Аппарат кротова для отбора проб воздуха инструкция по применению - RukovodstvoRus.ru

Большая группа приборов и устройств предназначается для концентрирования микроорганизмов в пробах из объектов внешней среды (вода, воздух), а также в пробах патологического материала от больных.

Как известно, объекты внешней среды могут быть источником массовых заражений человека и животных, в случае загрязнения их патогенными микроорганизмами. Для суждения о наличии в объектах внешней среды патогенных микроорганизмов, наиболее надежным критерием является их прямое обнаружение. Однако используемые в микробиологической практике методы не всегда позволяют делать это. Патогенные микроорганизмы трудно выявить в объектах внешней среды, так как их гораздо меньше, чем сапрофитов. Поэтому в силу антагонистических действий на питательных средах рост патогенной флоры зачастую подавляется ростом сапрофитов. Первоочередной задачей при исследовании такого объекта внешней среды, как воздух, является концентрация взвешенных в нем микроорганизмов в небольшом количестве жидкости (питательной среды).

Одним из ведущих показателей бактериальной обсемененности объектов внешней среды является показатель микробного числа. Эти данные санитарной микробиологии регистрируются подсчетом колоний, выросших на чашках Петри, с последующим пересчетом.

Значительное количество работ посвящено методам забора проб воздуха. Предложено большое количество всевозможных приборов, улавливающих бактериальные аэрозоли.

Одним из первых приборов для исследования аэромикрофлоры, который был внедрен в серийное производство в нашей стране, был прибор Кротова [11]. Несмотря на сравнительно большое количество времени с начала его серийного выпуска (пятидесятые годы), прибор не потерял своей значимости при исследовании санитарно-бактериологического состояния воздуха закрытых помещений и до сегодняшнего дня широко используется в практике санитарно-бактериологических лабораторий.

Прибор для бактериологического анализа воздуха (прибор Кротова) (рис. 58) представляет собой цилиндр, закрывающийся крышкой, под которой имеется столик для установки чашки Петри с плотной питательной средой. Внутри цилиндра находится электрический мотор, вращающий столик с чашкой и турбинку, засасывающую воздух внутрь прибора через щель, находящуюся в крышке. Количество воздуха, просасываемого в минуту, определяется по поплавковому расходомеру и регулируется при помощи вентиля. Прибор питается от сети переменного тока напряжением 220 В. Габариты прибора в футляре —229X200X280 мм. Масса — 8 кг.

Рис. 58. Прибор для бактериологического анализа воздуха.
1 — вентиль ротаметра, 2 — ротаметр; 3 — накидные замки; 4 — диск вращающийся; 5 — крышка; 6 — диск; 7 — клиновидная щель; 8 — корпус; 9 — основание.

Подготовка прибора к работе сводится к отбору стандартных чашек Петри диаметром 100 мм и высотой 20 мм и заблаговременному заполнению их питательной средой в количестве 15 мл. Розлив и охлаждение питательных сред производится на строго горизонтальной поверхности, подсушивание в обычных условиях.

Другим прибором аналогичного назначения [13] является пробоотборник воздуха ПОВ-1 (рис.59).

Рис. 59. Пробоотборник воздуха ПОВ-1

Забор проб воздуха производится в жидкую питательную среду, что позволяет применять специфические элективные среды и проводить специальные (направленные) бактериологические исследования.

Техническая характеристика прибора ПОВ-1
Производительность………… 20 л/мин
Питание от сети переменного тока….. 127/220 В
Потребляемая мощность……….не более 18 В А
Габариты прибора……………………..170x255x285 мм
» укладки……………………..170X270X350 »
Масса (с укладкой)……………………..не более 15 кг

Аспиратор для отбора проб воздуха, модель 822, выпускаемый объединением «Красногвардеец» предназначен для анализа содержащихся в воздухе примесей. На передней панели прибора (рис. 60) расположены: колодка для подключения прибора к сети 1, тумблер для включения и выключения аппарата 2, гнездо предохранителя 3, разгрузочный клапан, предохраняющий от перегрузки электродвигатель при отборе проб воздуха с малыми скоростями 4, ротаметры (конусные стеклянные трубки с поплавками) для определения скорости прохождения воздуха 5, ручки вентилей ротаметров для регулировки скорости отбора проб 6, винты крепления панели к кожуху прибора 7, штуцеры для присоединения резиновых трубок с фильтрами 8 и клемма для заземления прибора 9.

Рис. 60. Аспиратор для отбора проб воздуха. Пояснения в тексте.

На рис. 61 показан общий вид аспиратора с держателем фильтров.

Отбор проб производится при просасывании воздуха через специальные фильтры с определенной скоростью. Воздух, проходя через фильтры, оставляет на них содержащиеся в нем примеси. Зная скорость прохождения воздуха и время прохождения, можно определить объем воздуха, прошедшего через фильтр. Определив количество примесей на фильтре, можно рассчитать количество примесей в единице объема воздуха.

Аспиратор для забора проб воздуха выпускает французская фирма «Baudard» [21]. Аспиратор представляет собой герметичный аппарат с приспособлением для укрепления мелкопористых фильтров, которые легко могут быть извлечены после просасывания через аспиратор заданного объема воздуха и, в зависимости от цели исследования, изучаться либо бактериологически (инкубирование фильтра с имеющимися на нем микроорганизмами на питательных средах), либо микроскопически (определение природы частиц, задержанных фильтром, их подсчет и т. п.).

Используемые мелкопористые фильтры могут быть либо бумажными, либо изготовленными из стекловолокна. Диаметр фильтров составляет 110 мм.

Вентилятор центрифужного принципа действия имеет две скорости и рассчитан на питание от электросети напряжением 220 В; мощность мотора — 50 Вт; производительность аспиратора — от 360 до 1000 л/мин в зависимости от сопротивления используемого мелкопористого фильтра.

При исследовании воды и других объектов внешней среды (почва), а также биологических жидкостей человека и животных (мокрота, эксудаты и транссудаты) на наличие патогенной флоры, как и при исследовании воздуха, необходима предварительная концентрация микроорганизмов в небольшом объеме питательной среды, которая в дальнейшем подвергается бактериологическому исследованию (микроскопия, посев, постановка биохимических и серологических реакций и т. д.).

Рис. 61. Аспиратор с держателем фильтров.

Однако прогресс в области методов концентрирования микроорганизмов из объектов внешней среды невелик, и большей частью приходится ограничиваться старыми методиками, представляющими различные способы накопления:
—       осаждением механическими способами — фильтрация, центрифугирование, выпаривание воды;
—       осаждением микробов физико-химическими методами при помощи различных коагулянтов;
—       концентрированием микробов методом флотации;
—       осаждением микробов специфическими агглютинирующими сыворотками;
—       применением комбинированных методов концентрирования микроорганизмов, заключающихся в сочетании методов осаждения с последующим высевом на питательные среды или заражением восприимчивого лабораторного животного.

Новые методы концентрирования микроорганизмов основаны на применении некоторых физических принципов [7, 15]. Одним из таких физических принципов является электрофорез. Применение этого метода обеспечивает движение микробной клетки к одному из электродов, расположенных в жидкой среде, под воздействием приложенной к электродам внешней электродвижущей силы (ЭДС). Этот принцип положен в основу прибора ЭФМ-1 (рис. 62). Прибор позволяет концентрировать микробные клетки, имеющие положительный или отрицательный поверхностный заряд в малом объеме изолированной жидкости (0,01—0,02 мл).

Рис. 62. Прибор для электрофореза микобактерий ЭФМ-1.

Кроме исследований воды, прибор может быть использован для бактериологических исследований водных суспензий пищевых продуктов, различных смывов и т. п. Прибор также может быть использован и для обнаружения микроорганизмов в различных материалах, полученных от больных, в частности для обнаружения микобактерий туберкулеза в таких материалах, как спинномозговая жидкость, промывные воды бронхов и желудка, всевозможные пунктаты, моча. В мазках, приготовленных из взвеси микобактерий туберкулеза в физиологическом растворе и подвергнутых электрофоретической концентрации, количество микробных клеток увеличивается в 10—15 раз по сравнению с мазками из нативного материала.

Прибор снабжен комплектом принадлежностей, куда входят 20 небьющихся кювет емкостью по 12 мл, электроды, пипетки. Прибор питается от сети переменного тока напряжением 220 В± ±10%, 50 Гц. Потребляемая мощность — не более 20 Вт. Габариты— 405X165X205 мм. Масса прибора с комплектом принадлежностей — 6 кг.

Принцип работы прибора. В специальные кюветы, из комплекта к прибору, наливают по 10 мл исследуемого материала. Над каждой кюветой с помощью зажима-держателя укрепляют пипетку, в которую помещен графитовый электрод. Часть исследуемой жидкости поднимается на 4—5 мм по капилляру пипетки и касается электрода. В зависимости от цели исследования устанавливают полярность приложенной ЭДС. Электрофорез рекомендуется проводить в течение 1—3 ч.

После выключения тока жидкость из капилляра с помощью резинового баллончика выдавливают в каплю сыворотки (нормальная лошадиная или кроличья сыворотка в разведении 1 :10), предварительно нанесенную на поверхность предметного стекла, и тщательно перемешивают запаянной пастеровской пипеткой, препарат высушивают, фиксируют над пламенем горелки и окрашивают по Граму, Циль — Нильсену или другим способом.

Чтобы исключить возможность диагностических ошибок, все манипуляции проводят с тщательно обработанными кюветами, пипетками и предметными стеклами. Графитовые электроды после каждого исследования необходимо менять.

Растворы красок и кислоты должны быть тщательно проверены бактериологически.

Для увеличения точности подсчета выросших микробных колоний Киевским заводом медицинского оборудования выпускается прибор для счета колоний бактерий [14]. Для подсчета колоний электропером на дно чашки наносятся точки в месте «нахождения каждой колонии, при этом контакты электропера замыкаются и поступающий к счетчику электрический импульс производит отсчет. Внешний вид прибора приведен на рис. 63.

Рис. 63. Прибор для счета колоний.

Для подсчета числа колоний на закрытой чашке используется карандаш или ручка, которыми ставят отметки на оборотной стороне чашки, что исключает возможность повторного учета одной и той же колонии.

Универсальный счетчик для подсчета колоний на питательной среде «Бактроник» [22] укомплектован электронным наконечником для подсчета числа колоний на открытых чашках. При контакте с любой агаризированной средой наконечник включает электромагнитный счетный механизм и оставляет след на поверхности среды.

Такое устройство устраняет электроразряды, которые имеют место при использовании других систем.

При подсчете числа колоний на чашках с редким ростом можно использовать кнопку на панели прибора, а если необходимо— дистанционный кнопочный выключатель, что облегчает работу.

Фирма «Millipore» выпускает специальную чемодан-укладку для микробиологических исследований [20]. Чемодан, являющийся по существу портативной лабораторией (рис. 64), обеспечивает всеми необходимыми материалами и оборудованием для исследований бактериального загрязнения воды, обнаружения микроорганизмов в воздухе и в почве, контроль температуры и роста бактерий, выявление дрожжевых грибов в окружающей среде, образование газа дрожжами, определение эффективности дезинфектантов и т. д.

Рис. 64. Чемодан-укладка для микробиологических исследований.

Для определения качества пищевых продуктов выпускается люминоскоп ЛПК-1 [16]. С его помощью можно определять видовую принадлежность мяса, раннюю порчу свинины и свиного жира, соотношение составных частей фарша, экспертизу пищевых масел, жиров, меда и других продуктов (рис. 65).

В приборе использован принцип визуального люминесцентного анализа. Под действием ультрафиолетовых лучей пищевые продукты в зависимости от их свойства и качества начинают светиться различным цветом, а светофильтры выделяют соответствующие участки спектра. При работе с прибором не требуется затемнения помещения, исследователь огражден от воздействия ультрафиолетовых лучей.

Режим работы прибора повторнократковременный. Время работы—1 ч, пауза — 25 мин. На исследование продукта затрачивается не более 1 мин. Питание прибора от сети переменного тока — 220 В±10%. Потребляемая мощность — не более 350 Вт. Габаритные размеры — 366X185X240 мм. Масса — 6 кг.

Рис. 65. Прибор для определения качества продуктов ЛПК-1.

Поиск Лекций

Содержание

Методы отбора проб воздуха и приборы
Приборы и устройства для санитарной микробиологии
Тема. Анализ микрофлоры воздуха в помещении.
Методы бактериологическогоконтроля воздуха помещений
Б. Методы забора проб воздуха
Все методы отбора проб воздуха можно разделить на седиментационные и аспирационные.
- ПОСМОТРЕТЬ ЕЩЕ:
Аспираторы воздуха и пробоотборные устройства
Санитарно-бактериологическое исследование воздуха — Ф. К. Черкес
- Методы отбора проб воздуха
Отбор проб воздуха
- Контрольные вопросы
- Задача
- Задание

Методы отбора проб воздуха и приборы

Санитарно-микробиологическое исследование воздуха можно разделить на 4 этапа:

1) отбор проб;

2) обработка, транспортировка, хранение проб, получение концентрата микроорганизмов (если необходимо);

3) бактериологический посев, культивирование микроорганизмов;

4) идентификация выделенной культуры.

Отбор проб:

Правильное взятие проб гарантирует точность исследования. В закрытых помещениях точки отбора проб устанавливаются из расчета на каждые 20 м2 площади — одна проба воздуха, по типу конверта: 4 точки по углам комнаты (на расстоянии 0,5 м от стен) и 5-я точка — в центре. Пробы воздуха забираются на высоте 1,6—1,8 м от пола — на уровне дыхания в жилых помещениях. Пробы необходимо отбирать днем (в период активной деятельности человека), после влажной уборки и проветривания помещения. Атмосферный воздух исследуют в жилой зоне на уровне 0,5—2 м от земли вблизи источников загрязнения, а также в зеленых зонах (парки, сады и т.д.) для оценки их влияния на микрофлору воздуха.

Следует обратить внимание на то, что при отборе проб воздуха во многих случаях происходит посев его на питательную среду.

Все методы отбора проб воздуха можно разделить на седиментационные и аспирационные.

Седиментационный — наиболее старый метод, широко распространен благодаря простоте и доступности, однако является неточным. Метод предложен Р. Кохом и заключается в способности микроорганизмов под действием силы тяжести и под влиянием движения воздуха (вместе с частицами пыли и капельками аэрозоля) оседать на поверхность питательной среды в открытые чашки Петри. Чашки устанавливаются в точках отбора на горизонтальной поверхности.

Приборы и устройства для санитарной микробиологии

При определении общей микробной обсемененности чашки с мясопептонным агаром оставляют открытыми на 5—10 мин или дольше в зависимости от степени предполагаемого бактериального загрязнения. Для выявления санитарно-показательных микробов применяют среду Гарро или Туржецкого (для обнаружения стрептококков), молочно-солевой или желточно-солевой агар (для определения стафилококков), суслоагар или среду Сабуро (для выявления дрожжей и грибов). При определении санитарно- показательных микроорганизмов чашки оставляют открытыми в течение 40—60 мин.

По окончании экспозиции все чашки закрывают, помещают в термостат на сутки для культивирования при температуре, оптимальной для развития выделяемого микроорганизма, затем (если этого требуют исследования) на 48 ч оставляют при комнатной температуре для образования пигмента пигментообразующими микроорганизмами.

Седиментационный метод имеет ряд недостатков: на поверхность среды оседают только грубодисперсные фракции аэрозоля; нередко колонии образуются не из единичной клетки, а из скопления микробов; на применяемых питательных средах вырастает только часть воздушной микрофлоры. К тому же этот метод совершенно непригоден при исследовании бактериальной загрязненности атмосферного воздуха.

Более совершенными методами являютсяаспирационные, основанные на принудительном осаждении микроорганизмов из воздуха на поверхность плотной питательной среды или в улавливающую жидкость (мясо-пептонный бульон, буферный раствор, изотонический раствор хлорида натрия и др.). В практике санитарной службы при аспирационном взятии проб используются аппарат Кротова, бактериоуловитель Речменского, прибор для отбора проб воздуха (ПОВ-1), пробоотборник аэрозольный бактериологический (ПАБ-1),бактериально-вирусный электропреципитатор (БВЭП-1), прибор Киктенко, приборы Андерсена, Дьяконова, МБ и др. Для исследования атмосферы могут быть использованы и мембранные фильтры № 4, через которые воздух просасывается с помощью аппарата Зейтца. Большое разнообразие приборов свидетельствует об отсутствии универсального аппарата и о большей или меньшей степени их несовершенства.

Прибор Кротова. В настоящее время этот прибор широко применяется при исследовании воздуха закрытых помещений и имеется в лабораториях

Аппарат Кротова

Принцип работы аппарата Кротова (рис. 22) основан на том, что воздух, просасываемый через клиновидную щель в крышке аппарата, ударяется о поверхность питательной среды, при этом частицы пыли и аэрозоля прилипают к среде, а вместе с ними и микроорганизмы, находящиеся в воздухе.

Бактериально-вирусный электропреципитатор (БВЭП-1). Прибор основан на аспирационно-ионизационном принципе действия. БВЭП-1 состоит из осадительной камеры, в которую вмонтированы электроды: отрицательный в виде приводящей трубки, через которую поступает воздух (и частички аэрозоля соответственно заряжаются отрицательно), и положительный, на котором оседают бактерии.

Прибор МБ. Этот прибор служит не только для определения общей микробной обсемененности, но и для отбора проб воздуха с аэрозольными частицами различных размеров. Прибор МБ построен по принципу «сита» и представляет собой цилиндр, разделенный на 6 горизонтальных полос, на каждую из которых помещают чашки Петри с МПА. Воздух просасывается, начиная с верхней ступени, в пластине которой отверстия самые крупные, и чем ниже ступень, тем меньше размером отверстия (через последние проходят только тонкодисперсные фракции воздушного аэрозоля). Прибор рассчитан на улавливание частиц аэрозоля размером более 1 мкм при скорости отбора воздуха 30 л/мин. Уменьшение числа отверстий обеспечивает более равномерное распределение по питательной среде аэрозоля из воздуха. Для улавливания еще более мелких частиц аэрозоля можно добавлять дополнительно фильтр из фильтрующего материала АФА.

При использовании любого из перечисленных приборов получаемые результаты являются приблизительными, однако они дают более правильную оценку обсемененности воздуха в сравнении с седиментационным методом. Поскольку и отбор и санитарно-микробиологические исследования воздуха не регламентированы ГОСТ, то можно использовать любой прибор для оценки бактериальной загрязненности воздуха. Во многих случаях отбор проб совмещен с этапом посева.

Для снижения численности микроорганизмов в воздухе закрытых помещений применяют следующие средства: а) химические — обработка озоном, двуокисью азота, распыление молочной кислоты, б) механические — пропускание воздуха через специальные фильтры, в) физические — ультрафиолетовое облучение.

©2015-2018 poisk-ru.ru
Все права принадлежать их авторам. Данный сайт не претендует на авторства, а предоставляет бесплатное использование.
Нарушение авторских прав и Нарушение персональных данных

Тема. Анализ микрофлоры воздуха в помещении.

Цель работы:

— приобретение навыков и умений в количественном определении микроорганизмов чашечным методом.

Задачи:

-изучить количественный метод определения микроорганизмов воздуха чашечным методом;

— произвести микробиологический посев из воздуха различных помещений седиментационным методом;

— произвести подсчет колоний по правилу Омелянского.

Сущность метода:

—вначале делают посев исследуемого субстрата в чашке Петри с плотной питательной средой. Посевы термостатируют, и выросшие колонии подсчитывают. Метод широко используется для определения микроорганизмов в пищевых продуктах, воде, воздухе.

Микрофлора воздуха

Микробная загрязнённость воздуха подчиняется законам аэробиологии имеет непостоянный и локальный характер. Летом обсеменённость воздуха в несколько раз выше, чем зимой. Особенно сильно микроорганизмами насыщен атмосферный воздух над крупными городами. Микрофлора атмосферного воздуха и микрофлора воздуха жилых помещений различается.

Микрофлора атмосферного воздуха. В атмосферном воздухе стафилококки и стрептококки обнаруживают лишь в 3,7% проб, взятых в местах большого скопления людей. Среди микроорганизмов доминируют виды, обитающие в почве. В атмосферном воздухе в основном встречают три группы микроорганизмов.

· Пигментообразующие кокки в солнечные дни составляют до 70-80% всей флоры (пигмент защищает бактерии от инсоляции).

· Почвенные споровые и гнилостные микроорганизмы. Их содержание резко увеличивается в сухую и ветреную погоду.

· Плесневые грибы и дрожжи. Их содержание увеличивается при повышении влажности воздуха.

В отличие от воздуха закрытых помещений, в атмосферном воздухе постоянно происходят процессы самоочищения. Этот процесс происходит благодаря осадкам, инсоляции, температурным воздействиям и другим факторам. В свою очередь атмосферный воздух сам по себе — фактор очищения воздуха жилых помещений.

Микрофлора воздуха закрытых помещений более однообразна и относительно стабильна. Среди микроорганизмов доминируют обитатели носоглотки человека, в том числе патогенные виды, попадающие в воздух при кашле, чихании или разговоре.

Методы бактериологическогоконтроля воздуха помещений

Основной источник загрязнения воздуха патогенными видами — бактерионосители. Уровень микробного загрязнения зависит главным образом от плотности заселения, активности движения людей, санитарного состояния помещения, в том числе пылевой загрязнённости, вентиляции, частоты проветривания, способа уборки, степени освещённости и других условий. Так, регулярные проветривания и влажная уборка помещений снижает обсеменённость воздуха в 30 раз (по сравнению с контрольными помещениями). Самоочищения воздуха закрытых помещений не происходит.

Признаки колоний микроорганизмов.

Важные признаки колоний — их размеры и форма. Колонии могут быть большими или мелкими.

Величина колоний, размеры колоний — признак, позволяющий различать различные виды, роды и даже типы бактерий. В большинстве случаев колонии грамположительных бактерий мельче колоний грамотрицателъных бактерий.

Колонии бактерий могут быть плоскими, приподнятыми, выпуклыми, иметь вдавленный или приподнятый центр.

Другой важный признак — форма краёв колоний. При изучении формы колоний учитывают характер её поверхности: матовый, блестящий, гладкий или шероховатый. Края колоний могут быть ровными, волнистыми, дольчатыми (глубоко изрезанными), зубчатыми, эрозированными, бахромчатыми и т.д.

Определение количества микроорганизмов

В воздухе помещения.

Воздух неблагоприятная среда для микроорганизмов, так как в нем нет питательных веществ и постоянной оптимальной температуры.

Санитарную оценку воздуха жилых и производственных помещений осуществляют по общему микробному числу (ОМЧ). В воздухе производственных помещений определяют ОМЧ в единице объема воздуха по методу Омелянского – седиментационный метод. Метод основан на способности микроорганизмов под влиянием силы тяжести оседать, падать вниз.

Правило Омелянского:

На площадь чашки Петри 100 см2 в течение 5 минут оседает столько микроорганизмов, сколько их содержится в 10 литрах воздуха.

На основании этого правила им выведена формула для расчета количества микроорганизмов в 1 м3 воздуха:

X – количество микроорганизмов в 1 м2 воздуха

А – число колоний, выросших на чашке Петри при анализе

100 – число для пересчета на 1 м3 с 10 дм3

5 – коэффициент времени Омелянского

100 – площадь чашки Петри Омелянского (см2)

В – площадь чашки Петри, взятой для анализа (см2)

t –продолжительность времени (мин), в течение которого была открыта чашка (5 мин).

Ход работы

1. Приготовить плотную питательную среду для выращивания микроорганизмов – МПА (мясо-пептонный агар): по схеме растворить МПА в дистиллированной воде (3,8 г сухого МПА + 100 мл дистиллированной воды), прокипятить 30 мин, слегка остудить и разлить в стерильные чашки Петри. После застывания МПА на дне чашек, плотную среду следует подсушить в сушильном шкафу при температуре 450С в течение 10 мин (агаровая пластинка должна быть обращена вниз).

2. Произвести посев микроорганизмов из воздуха различных помещений учебного заведения: открыть чашки Петри со средой в исследуемом помещении на 5 мин, закрыть и поместить в термостат (при 300С) на 72 часа для определения ОМЧ, для определения дрожжей и плесневых грибов – (при 250С) на 5-7 суток. Термостатирование проводят переворачивая чашки Петри крышками вниз.

3. После термостатирования производят подсчет колоний, выросших на чашках Петри, и делают пересчет на 1 м2 воздуха согласно правилу Омелянского. Подсчет колоний проводят с помощью счетчика колоний. Чашки при подсчете размещают дном кверху на темном фоне.

При подсчете колоний придерживаются следующих правил:

— если на чашке выросло небольшое количество колоний (до 100), подсчитывают все колонии;

— если колонии распределены равномерно и их количество около 200-300, чашки делят маркером на 6 секторов и считают колонии в двух противоположных секторах, вычисляют среднее и умножают на 6.

Выводы

Согласно нормативным документам, воздух закрытых помещений считают чистым при содержании в 1 м3 до 2000 бактерий.

В воздухе пищевых производственных цехов должно содержаться не более 100-500 бактерий в 1 м3 в зависимости от характера производства. В воздухе пищевых предприятий нормируется содержание возбудителей порчи продуктов – плесневых грибов и дрожжей.

Объект анализа	Оценка
	Хорошо	Удовлетворительно
	Количество	Количество
	плесеней	дрожжей	плесеней	дрожжей
	количество колоний, выросших на чашке Петри
Воздух цеховых помещений предприятий	до 5	до 5	до 5	до 5
Воздух остальных помещений предприятия	5-10	до 5	10-15	5-10

Контрольные вопросы

1. От каких факторов зависит микрофлора воздуха?

2. Как определить степень загрязненности воздуха микроорганизмами?

3. Какие формы микроорганизмов чаще всего бывают патогенными?

Лабораторная работа №12

Б. Методы забора проб воздуха

1. Гравитационный метод основан на том, что взвешенные в воздухе плотные частицы оседают под действием силы тяжести. Для сбора проб гравитационным методом применяют пробозаборник Дарема (см. рис. 3.1). В держатель прибора вставляют предметное стекло, покрытое глицериновым гелем, который готовят следующим образом: 5 г желатина, 40 мл воды, 4 г фенола смешивают с 195 г глицерина и нагревают; во время нагревания в гель вводят 2 мл раствора Кальберия — 5 мл глицерина, 10 мл 95% этилового спирта и 2 капли насыщенного водного раствора фуксина основного. Прибор оставляют на воздухе на 24 ч. Переносимые воздушным потоком частицы под действием силы тяжести оседают на предметное стекло. Состав и количество частиц определяют под микроскопом. Результаты выражают в виде количества частиц, осевших на 1 см2 за 24 ч. Этот метод прост и недорог, но имеет следующие недостатки.

а.На результаты исследования влияют направление и скорость ветра, влажность воздуха и осадки.

б.За 24 ч оседает небольшое количество частиц.

в.На стекло оседают в основном крупные частицы.

2. Объемометрические методыоснованы на том, что взвешенные в воздухе частицы задерживаются на препятствии, установленном на пути воздушного потока.

а. Ротационный пробозаборник. Собирающая поверхность, покрытая специальным веществом, вращается в течение определенного времени с заданной скоростью. Результат пробы выражают в виде количества частиц, осевших на 1 см2 за 24 ч. Этот метод позволяет исключить влияние скорости и направления ветра на результаты исследования. В пробозаборнике Ротород (Сэмплинг Текнолоджис Инк., рис. 3.2) собирающей поверхностью служат акриловые стержни, покрытые тонким слоем силиконовой смазки. В других приборах собирающая поверхность вращается не постоянно, а периодически, что позволяет избежать ее переполнения, в перерывах между вращениями она прикрывается заслонками. Американская академия аллергологии и иммунологии в качестве стандартных объемометрических пробозаборников рекомендует использовать именно эти приборы.

б. Аспирационные пробозаборникипропускают воздух через мембранные фильтры с известным диаметром пор, поэтому на собирающей поверхности оседают частицы заданного размера. На этом принципе основана споровая ловушка Бурхарда (см. рис. 3.3), собирающая поверхность которой перемещается со скоростью 2 мм/ч, что позволяет следить за изменением концентрации частиц в воздухе в течение всего периода наблюдения. Поскольку прибор имеет флюгер, на результаты проб не влияет направление ветра. Более сложный пробозаборник АккуВол (см. рис. 3.4) улавливает частицы менее 1 мкм в диаметре.

Оценка результатов

а.С помощью гравитационных методов в пробах воздуха можно обнаружить только крупные частицы (более 20 мкм в диаметре), например пыльцу амброзии. Для научных целей используются более точные объемометрические методы. Существуют руководства по определению спор грибов и пыльцы. Таблицы, составленные по результатам количественного микроскопического исследования проб воздуха, позволяют определить сезонные пики концентрации пыльцы и спор грибов в разных штатах в то или иное время года (см. приложение VI). Между обострением атопического заболевания и средней суточной концентрацией аллергенов в воздухе, определяемой с помощью количественного микроскопического исследования, четкой связи нет. Это объясняется тем, что при низкой средней суточной концентрации аллергенов обострение атопического заболевания может быть спровоцировано кратковременным повышением их концентрации. Кроме того, количественное микроскопическое исследование не всегда позволяет точно судить о концентрации воздушных аллергенов.

б.Для количественного определения аллергенов с помощью иммунологических методов используются меченые антитела. Установлена связь между концентрацией аллергенов, определяемой иммунологическими методами, и обострением атопического заболевания, особенно экзогенной бронхиальной астмы. Однако таких исследований мало, опубликованы лишь данные по антигену E амброзии, аллергенам насекомых и грибов рода Alternaria. Иммунологические методы исследования воздушных аллергенов, не определяемых микроскопически, например частиц эпидермиса животных и насекомых, очень точны. В ряде случаев эти исследования позволяют установить причину аллергии.

В. Аллергены пыльцы.Пыльца состоит из множества пыльцевых зерен, содержащих мужские гаметы и служащих для полового размножения семенных растений. У энтомофильных (опыляемых насекомыми) растений с яркими и ароматными цветками пыльца крупная, клейкая, распространяется, как правило, на незначительные расстояния, концентрация ее в воздухе невелика. У анемофильных (ветроопыляемых) растений цветки маленькие, незаметные, без запаха, а пыльца мелкая, нелипкая, с гладкой и ровной поверхностью. Причиной аллергии обычно является именно пыльца анемофильных растений, потому что ее концентрация в воздухе в период цветения гораздо выше, чем концентрация пыльцы энтомофильных растений. Выброс пыльцы у большинства анемофильных растений происходит ранним утром, однако ее концентрация в воздухе обычно становится максимальной днем или ранним вечером. Это обусловлено тем, что днем усиливается циркуляция воздуха. В сухую погоду даже под действием слабого ветра пыльца может распространяться на большие расстояния, поэтому даже в крупных городах концентрация пыльцы в воздухе может быть очень высокой. Хотя через несколько часов пыльца утрачивает жизнеспособность, ее аллергенные свойства сохраняются в течение длительного времени. В приложении VI приведены флористическая карта США и Канады и перечень цветущих растений, распространенных в разных флористических районах.

1. Амброзия. Главной причиной аллергического риноконъюнктивита в США служит пыльца амброзии (Ambrosia spp.) — представителя семейства сложноцветных. В северо-восточной части США и бассейне реки Миссисипи амброзия распространена особенно широко, поскольку плодородная, культивируемая почва этих районов идеально подходит для ее роста. Выделяют два пыльцевых антигена амброзии — антиген E (Amb aI) и антиген K (Amb aII).

Все методы отбора проб воздуха можно разделить на седиментационные и аспирационные.

Оба хорошо изучены. Антиген E — это полипептид с молекулярной массой 37 800, антиген K — полипептид с молекулярной массой 38 000. Антиген E составляет всего 6% белковой фракции экстракта пыльцы, однако он в 200 раз активнее антигена K.

2. Злаки. Пыльцу злаков трудно различить по морфологическим признакам, поэтому при обнаружении ее в образцах воздуха прежде всего учитывают, какие злаки распространены в данной местности.

а.В южных районах США и на южном побережье Тихого океана широко распространен свинорой, на северо-востоке и в северной части бассейна реки Миссисипи — мятлик, тимофеевка, ежа сборная и полевица белая (см. приложение VI).

б.Аллергия к пыльце трав, в том числе злаков, развивается лишь в период их цветения, который зависит от климатических условий, поэтому для каждого района характерны свои сезонные пики заболеваемости. Так, в северных районах пик заболеваемости приходится на весну и лето, в южных районах частота обострений в течение года почти не меняется. На большой высоте над уровнем моря, например в районе Скалистых гор, и в северных штатах США (Висконсин, Мичиган, Мэн) концентрация пыльцы невелика.

в.В США пыльца злаков занимает второе место после пыльцы амброзии по частоте и тяжести вызываемых ею аллергических реакций. В других странах она является наиболее значимым воздушным аллергеном.

г.Пыльца мятлика, тимофеевки, полевицы белой и ежи сборной имеет сходные антигены и вызывает перекрестные аллергические реакции. Пыльца свинороя существенно отличается по антигенному составу от пыльцы других трав и не вызывает перекрестных реакций.

3. Деревья.Аллергию вызывает, как правило, пыльца анемофильных деревьев. Пыльца энтомофильных деревьев, например плодовых и декоративных, вызывает аллергию крайне редко. Не вызывает аллергию и пыльца анемофильных деревьев, покрытая плотной внешней оболочкой.

а.Пыльца разных деревьев имеет четкие морфологические признаки. Кроме того, деревья различаются по продолжительности, интенсивности и сезону цветения.

б.Поскольку пыльца деревьев разных родов имеет очень мало перекрестных антигенов и в пределах одного флористического района обычно преобладают деревья определенного рода, в нем наблюдается аллергия к пыльце деревьев только одного рода.

в.Поскольку период цветения у деревьев обычно непродолжительный, обострения аллергии к их пыльце также кратковременны.

г.Цветение лиственных деревьев начинается до, во время либо вскоре после появления листьев. В районах с умеренным климатом сезон цветения заканчивается поздней весной, когда деревья полностью покрываются листвой. В более теплых районах сезон цветения длится дольше (см. приложение VI).

Г. Аллергены грибов. Грибы широко распространены и обитают почти во всех климатических районах. Грибы можно обнаружить в почве, пресной и соленой воде. По типу питания грибы делятся на сапрофитов и паразитов.

1. Строение грибов.По морфологическим признакам все грибы делятся на дрожжевые и мицелиальные. Дрожжевые грибы состоят из отдельных клеток, которые размножаются бесполым путем — делением или почкованием. Мицелиальные грибы относятся к многоклеточным организмам и представляют собой сеть ветвящихся нитей — гиф, которые могут образовывать споры. Споры грибов разносятся водой, ветром и животными. Плесень — это расположенные на поверхности питательного субстрата органы размножения разных видов грибов. Плесень состоит из переплетенных гиф и спор и представляет собой аморфную массу, которая может иметь разную окраску, форму и консистенцию. Плесневые грибы — не таксономическое, а традиционное название грибов, образующих плесень.

2. Классификация грибов основана на способе размножения. Грибы размножаются путем фрагментации гиф и спорами, которые образуются бесполым (простое деление клеток) и половым (слияние двух клеток с образованием зиготы) путем. В жизненном цикле большинства грибов чередуются стадии бесполого — несовершенная стадия — и полового — совершенная стадия — размножения. По современной классификации грибы делятся на 4 класса: Ascomycetes, Basidiomycetes, Zygomycetes и Oomycetes. Грибы родов Alternaria, Penicillium и Aspergillus ранее относились к классуDeuteromycetes (несовершенные грибы, размножающиеся только бесполым путем), а по современной классификации входят в подкласс Hyphomycetes классаAscomycetes(см. табл. 3.1). Именно эти грибы чаще всего вызывают аллергию. Поскольку классификация Hyphomycetes основана только на морфологии спор и не отражает других признаков, разные грибы, входящие в этот подкласс, значительно отличаются друг от друга по антигенному составу.

3. Распространенность грибов. Благодаря огромному разнообразию и исключительной способности к выживанию в разных климатических условиях грибы распространены повсеместно. Они сохраняют жизнеспособность даже при низкой температуре. Их мало лишь в засушливых и высокогорных районах, где недостаточно влаги и кислорода. Грибы, обитающие в домах, часто служат причиной круглогодичных аллергических заболеваний. В жилых помещениях грибов особенно много в старой мебельной обивке, комнатных увлажнителях воздуха, на занавесках для душа, сантехнике, в мусорных баках, пищевых отходах, сырых подвалах.

4. Контакт с грибами.Аллергические заболевания, вызванные грибами, протекают с периодическими обострениями, обусловленными повышением концентрации грибов в воздухе, например после посещения леса или фермы, заготовки сена или зерна, сбора опавших листьев, влажным, теплым летом и осенью после листопада (см. табл. 3.1). Представители некоторых профессий — хлеборобы, садоводы, рабочие бумажных фабрик — особенно часто контактируют с грибами. Так называемое новогоднее обострение аллергии к грибам обусловлено тем, что их очень много на елях, а резкий запах хвои и пыль с елочных игрушек способствуют обострению заболевания. Способы борьбы с грибами изложены в гл. 4, п. III.Д.

5. Лабораторные исследования.Лучший способ профилактики аллергии к грибам — постоянный контроль за их содержанием в окружающей среде и борьба с ними. Лабораторные исследования необходимы для: 1) определения грибов, послуживших причиной аллергического заболевания, например экзогенного аллергического альвеолита, 2) оценки эффективности борьбы с грибами, 3) определения видов грибов, распространенных в данном районе.

Количественное определение присутствующих в воздухе грибов основано на микроскопическом исследовании проб, полученных с помощью объемометрических методов, и культур, полученных при посеве этих проб. Для культивирования грибов обычно применяют среду Сабуро и агар с картофельным крахмалом или кукурузной мукой. Определение грибов требует времени, специального оборудования и профессиональных навыков. Необходимо учитывать, что определенные условия культивирования, например температура, влажность воздуха, атмосферное давление, благоприятствуют росту грибов, не имеющих клинического значения. Плесневые грибы, которые особенно часто вызывают аллергию, перечислены в табл. 3.1 и приложении VI.

Д. Эпидермальные аллергены. Чаще всего аллергию вызывают эпидермис собак и кошек, а также используемые для набивки мебели, подушек и перин шерсть (чаще всего козья или овечья) и перо (например, утиное). Обработанные шерсть и шкуры реже вызывают аллергию, поскольку наиболее сильные аллергены водорастворимы и удаляются во время обработки. Многие эпидермальные аллергены обнаруживаются также в слюне и моче животных. Эпидермальные аллергены очень активны, и даже непродолжительный контакт с ними способен вызвать сильную аллергическую реакцию. К наиболее активным эпидермальным аллергенам относятся антигены эпидермиса кошек. Частицы эпидермиса кошек очень мелкие (менее 2,5 мкм), медленно оседают и накапливаются в воздухе, поэтому даже кратковременное пребывание в помещении, где живет кошка, может спровоцировать бурную аллергическую реакцию. Поскольку это эпидермальные аллергены, аллергию вызывают как длинношерстные, так короткошерстные и нелиняющие животные. В домах и квартирах распространению эпидермальных аллергенов способствуют центральные системы воздушного отопления. Уборка помещений и мытье животных — временные и малоэффективные противоаллергические мероприятия. Эпидермальные аллергены могут служить причиной профессиональных аллергических заболеваний. У людей, которые живут в многоквартирных и содержащихся в плохом состоянии домах, часто возникают аллергические реакции на эпидермис и мочу грызунов.

Предыдущая45678910111213141516171819Следующая

Дата добавления: 2016-08-08; просмотров: 290;

ПОСМОТРЕТЬ ЕЩЕ:

Аспираторы воздуха и пробоотборные устройства

Пробы атмосферного воздуха отбирают в сосуды ограниченной емкости, как правило, аспирационным способом. Этот способ основан на извлечении определяемого вещества поглотительным раствором или твердыми сорбентами с большой поглощающей поверхностью (селикагель, алюмогель, активированный уголь и др.). Широко распространено также использование фильтрующих материалов из тонких волокон (ацетилцеллюлозы, полиакрилонитрила, полиакрилата и др.). Как и во всех аналитических исследованиях, правильный отбор проб имеет решающее значение. Результаты самого точного и тщательно выполненного анализа теряют всякий смысл в случае неправильной подготовки к отбору пробы и неверного ее выполнения. Обычно место для отбора проб воздуха следует выбирать так, чтобы в непосредственной близости от него не было каких-либо деревьев или стен зданий. Нельзя также проводить отбор проб во время дождя или снегопада. При отборе проб необходимо также учитывать агрегатное состояние и свойства определяемого загрязнителя. Наиболее часто при анализе воздуха непосредственно в процессе отбора проб производятся разделение и концентрирование компонентов воздуха, подлежащих определению. В зависимости от предполагаемого уровня содержания определяемого загрязнителя воздуха отбор проб может осуществляться с применением концентрирования или без него. В последнем случае в качестве пробоотборных емкостей используют стеклянные шприцы, газовые пипетки, мешки из полимерных пленок, резиновые камеры и др. Для концентрирования микропримесей используют обычные твердые сорбенты и поглотительные растворы. Воздух протягивают через сорбенты или поглотительный раствор с определенной скоростью за определенный промежуток времени. При отборе проб необходимо получение статистически усредненного образца. Статистически усредненный образец воздуха можно получить, прокачивая большие объемы его через специальные фильтры или жидкие поглотители и затем вымывая абсорбированный загрязнитель специаль ными растворами. Иногда фильтры-поглотители могут озоляться или анализироваться непосредственно (например нейтронно-активационным методом). Повышение концентраций загрязнителей воздуха с помощью обычных адсорбентов с целью их последующей десорбции и количественного определения является подготовительным этапом к газохроматографическому анализу. При использовании газожидкостной хроматографии для определения низких концентраций веществ, содержащихся в воздухе, применяют два основных метода предварительного концентрирования. Согласно первому, через концентратор пропускают анализируемый воздух в таком количестве, чтобы сорбент был полностью насыщен определяемым веществом. Чаще всего в этом случае используют охлаждение (жидкий азот, сухой лед с ацетоном). Этот метод наиболее пригоден для анализа малолетучих веществ. По второму методу анализируемый воздух пропускают через концентратор в таком количестве, чтобы наступило равновесие между сорбентом и газовой фазой. Этот метод пригоден главным образом для определения легколетучих веществ в воздухе рабочей зоны. Концентрация анализируемых веществ в атмосферном воздухе (С,мг/ м 3 ) вычисляется по формуле С = m/V, где m – масса вещества, найденная в анализируемой пробе, мкг; V – объем исследуемой пробы воздуха, приведенный к нормальным условиям (t = 0 оС, p0 = 101080 Па), л. V = 273 p Vt / [101080 ( 273 +t)], где р – атмосферное давление при отборе пробы, Па; t – температура воздуха в месте отбора пробы, оС; Vt – объем пробы воздуха при температуре t, л.

Аспирационный метод имеет ряд недостатков: во-первых, он трудоемок и, во-вторых, требует длительного времени (до 30 мин) аспирации, что может привести к усреднению концентрации токсичных веществ, в то время как концентрация веществ в воздухе меняется довольно быстро.

7)Методы определения загрязнений атмосферного воздуха

Экологический мониторинг атмосферного воздуха включает в себя изучение источников загрязнения, исследование химических и фотохимических превращений загрязняющих веществ, выявление наиболее токсичных веществ, изучение распространения загрязняющих веществ в атмосферном воздухе с воздушными потоками, определение концентраций загрязняющих веществ и прогноз изменения экосистем под влиянием загрязнений воздуха. Анализ воздуха, содержащего загрязнения, довольно сложен, так как необходимо, с одной стороны, проанализировать сложную по составу многокомпонентную смесь, а с другой стороны, произвести избирательное определение вредных веществ при их концентрации в воздухе на уровне ПДК и ниже. Кроме того, определение не должно быть длительным (по ГОСТу длительность отбора проб не должна превышать 30 мин). Подготовка пробы зависит от метода анализа загрязнений в атмосфере. В зависимости от природы загрязняющего вещества и его концентрации в воздухе используются методы газовой и газожидкостной хроматографии, нейтронно-активационный, атомно-абсорбционный, полярографический, фотометрический и спектрофотометрический и другие методы. Определение загрязнений в атмосфере включает следующие операции: отбор проб воздуха и концентрирование микропримесей вредных веществ; подготовка пробы к анализу; анализ микропримесей, обработка результатов анализа и прогноз изменения состояния окружающей среды. Пробы атмосферного воздуха отбирают в сосуды ограниченной емкости, как правило, аспирационным способом. Этот способ основан на извлечении определяемого вещества поглотительным раствором или твердыми сорбентами с большой поглощающей поверхностью (селикагель, алюмогель, активированный уголь и др.). Широко распространено также использование фильтрующих материалов из тонких волокон (ацетилцеллюлозы, полиакрилонитрила, полиакрилата и др.). Как и во всех аналитических исследованиях, правильный отбор проб имеет решающее значение. Результаты самого точного и тщательно выполненного анализа теряют всякий смысл в случае неправильной подготовки к отбору пробы и неверного ее выполнения. Обычно место для отбора проб воздуха следует выбирать так, чтобы в непосредственной близости от него не было каких-либо деревьев или стен зданий. Нельзя также проводить отбор проб во время дождя или снегопада. При отборе проб необходимо также учитывать агрегатное состояние и свойства определяемого загрязнителя. Наиболее часто при анализе воздуха непосредственно в процессе отбора проб производятся разделение и концентрирование компонентов воздуха, подлежащих определению. В зависимости от предполагаемого уровня содержания определяемого загрязнителя воздуха отбор проб может осуществляться с применением концентрирования или без него. В последнем случае в качестве пробоотборных емкостей используют стеклянные шприцы, газовые пипетки, мешки из полимерных пленок, резиновые камеры и др. Для концентрирования микропримесей используют обычные твердые сорбенты и поглотительные растворы. Воздух протягивают через сорбенты или поглотительный раствор с определенной скоростью за определенный промежуток времени. При отборе проб необходимо получение статистически усредненного образца. Статистически усредненный образец воздуха можно получить, прокачивая большие объемы его через специальные фильтры или жидкие поглотители и затем вымывая абсорбированный загрязнитель специаль ными растворами. Иногда фильтры-поглотители могут озоляться или анализироваться непосредственно (например нейтронно-активационным методом). Повышение концентраций загрязнителей воздуха с помощью обычных адсорбентов с целью их последующей десорбции и количественного определения является подготовительным этапом к газохроматографическому анализу. При использовании газожидкостной хроматографии для определения низких концентраций веществ, содержащихся в воздухе, применяют два основных метода предварительного концентрирования. Согласно первому, через концентратор пропускают анализируемый воздух в таком количестве, чтобы сорбент был полностью насыщен определяемым веществом. Чаще всего в этом случае используют охлаждение (жидкий азот, сухой лед с ацетоном). Этот метод наиболее пригоден для анализа малолетучих веществ. По второму методу анализируемый воздух пропускают через концентратор в таком количестве, чтобы наступило равновесие между сорбентом и газовой фазой. Этот метод пригоден главным образом для определения легколетучих веществ в воздухе рабочей зоны. Концентрация анализируемых веществ в атмосферном воздухе (С,мг/ м 3 ) вычисляется по формуле С = m/V, где m – масса вещества, найденная в анализируемой пробе, мкг; V – объем исследуемой пробы воздуха, приведенный к нормальным условиям (t = 0 оС, p0 = 101080 Па), л. V = 273 p Vt / [101080 ( 273 +t)], где р – атмосферное давление при отборе пробы, Па; t – температура воздуха в месте отбора пробы, оС; Vt – объем пробы воздуха при температуре t, л.

НОВОСТИ БИБЛИОТЕКА КАРТА САЙТА ССЫЛКИ О САЙТЕ

Санитарно-бактериологическое исследование воздуха — Ф. К. Черкес

Среди факторов окружающей среды, влияющих на жизнь человека, воздух занимает ведущее место. Наука, изучающая микрофлору воздуха, называется аэромикробиологией.

Воздух не является благоприятной средой для развития микроорганизмов, так как не содержит питательных веществ и находится в постоянном движении. Поэтому большинство микроорганизмов быстро исчезают из воздуха. Однако некоторые из них более устойчивые, например туберкулезная палочка, споры клостридий, грибов и другие, могут длительно сохраняться в воздухе.

В воздухе городов микроорганизмов больше, чем в воздухе лесов и полей.

Количество микроорганизмов в воздухе с высотой уменьшается. Например, на высоте 500 м над Москвой в 1 м3 воздуха обнаруживают 2-3 бактерии, а на высоте 1000 м — вдвое меньше.

Количество микроорганизмов в помещениях обычно больше, чем в воздухе открытых мест.

ГОСТ не нормирует методы проведения исследования воздуха. Раньше большое внимание уделялось определению гемолитических стрептококков как показателей загрязнения воздуха закрытых помещений микрофлорой, находящейся в носоглотке человека. В настоящее время больше внимания уделяют непосредственному обнаружению в воздухе патогенных и условно-патогенных микроорганизмов.

Санитарно-бактериологическое исследование воздуха проводят в плановом порядке: в больницах, операционных, детских учреждениях и др.

При санитарно-бактериологическом исследовании определяют:

1. Общее количество бактерий в 1 м3 воздуха.

2. Наличие патогенных и условно-патогенных микроорганизмов в 1 м3 воздуха.

Выявление микроорганизмов в воздухе проводится при помощи специальных приборов и специальных сред (диагностических и дифференциально-диагностических).

Методы отбора проб воздуха

Существуют два основных способа отбора проб воздуха для исследования: 1) седиментационный — основан на механическом оседании микроорганизмов; 2) аспирационный — основан на активном просасывании воздуха (этот метод дает возможность определить не только качественное, но и количественное содержание бактерий).

Отбор проб воздуха

Седиментационный метод

Чашки Петри с питательной средой (МПА) устанавливают в открытом виде горизонтально, на разном уровне от пола. Метод основан на механическом оседании бактерий на поверхность агара в чашках Петри. Чашки со средой экспонируют от 10 до 20 мин, в зависимости от предполагаемого загрязнения воздуха. Для выявления патогенной флоры используют элективные среды. Экспозиция в этих случаях удлиняется до 2-3 ч. После экспозиции чашки закрывают, доставляют в лабораторию и ставят в термостат на 24 ч при температуре 37° С. На следующий день изучают выросшие колонии. Метод этот используют в основном в закрытых помещениях.

()

Бактериоуловитель Речменского. Перед работой прибор заполняют стерильной содой. Действие прибора основано на протягивании через него воздуха с помощью аспиратора. При этом происходит распыление находящейся в приборе жидкости. После окончания просасывания жидкость, через которую был пропущен воздух, засевают по 0,1-0,2 мл на МПА в чашках Петри. При необходимости использовать элективные среды посевную дозу увеличивают (0,3-0,5 мл). Полученная в приемнике жидкость может быть использована для заражения животных (например, при исследованиях, проводимых для выявления вирусов, риккетсий и т. д.).

Прибор Дьяконова также основан на улавливании бактерий в жидкости, через которую пропущен воздух.

Прибор ПАБ-1 предназначен для бактериологического исследования больших объемов воздуха в течение короткого промежутка времени. Получение проб воздуха производят со скоростью 125-150 л/мин. Принцип работы прибора основан на улавливании микроорганизмов на электрод противоположного заряда. Большая скорость отбора проб воздуха в этом приборе и возможность посева его на различные питательные среды имеет значение для обнаружения патогенных и условно-патогенных бактерий (например, синегнойной палочки в хирургических отделениях и др.).

Аппарат Кротова. Действие основано на принципе удара струи воздуха на среду в чашках Петри. Аппарат состоит из трех частей: узла для отбора проб воздуха, ротаметра, электрической части питающего механизма.

Исследуемый воздух при помощи центробежного вентилятора, вращающегося со скоростью 4000-5000 об/мин, засасывается в щель прибора и ударяется о поверхность открытой чашки Петри со средой. Содержащиеся в воздухе микроорганизмы оседают на питательный агар. Для равномерного распределения микроорганизмов по всей поверхности столик с находящейся на нем чашкой вращается. Из прибора воздух выводится через воздухопроводную трубку, которая соединена с ротаметром, показывающим скорость протягивания воздуха через прибор.

Недостатком прибора Кротова является то, что он нуждается в электроэнергии, поэтому не во всех условиях может быть использован.

Первый день исследования

Отобранные пробы помещают в термостат при 37° С на 18-24 ч.

Второй день исследования

Чашку вынимают из термостата и производят подсчет колоний. Бактериальное загрязнение воздуха выражается общим числом микробов в 1 м3 его.

Расчет. Например, за 10 мин пропущено 125 л воздуха, на поверхности выросло 100 колоний.

Число микробов в 1 м воздуха =	100×1000	= 800
125

Для определения золотистого стафилококка забор производят на желточно-солевой агар. Чашки с посевами инкубируют в термостате при 37° С в течение 24 ч и 24 ч выдерживают при комнатной температуре для выявления пигмента. Колонии, подозрительные на S. aureus, подлежат дальнейшей идентификации (см. главу 14).

В детских учреждениях воздух проверяют на наличие сальмонелл. Для этого воздух засевают в чашку со средой висмут-сульфитный агар.

Выявление патогенных бактерий и вирусов в воздухе закрытых помещений проводят по эпидемиологическим показаниям. Для выявления возбудителей туберкулеза пользуются прибором ПОВ, в качестве улавливающей используется среда Школьниковой.

Контрольные вопросы

1. Является ли воздух благоприятной средой для развития микроорганизмов?

2. В каких учреждениях проводят плановое исследование микрофлоры воздуха?

3. Расскажите устройство аппарата Кротова.

Задача

За 10 мин было пропущено 250 л воздуха. Выросло 150 колоний. Рассчитайте количество колоний в 1 м воздуха.

Задание

Возьмите 4 чашки Петри со средой МПА, откройте их и установите на разном уровне от пола. Через 20 мин закройте чашки и поставьте в термостат. На следующий день подсчитайте количество выросших колоний, определите степень загрязнения воздуха.

Источник

Санитарно-микробиологическое исследование воздуха

Цель занятия.
Ознакомить
студентов
с микрофлорой
воздуха, источниками ее загрязнения
патогенной микрофлорой. Студенты должны
овладеть методами бактериологического
исследования воздуха — методами Коха и
Кротова.

Материальное
оснащение. Для
исследования воздуха: аппарат Кротова,
чашки Петри с МПА и средой Чапека, спирт
для обработки внутренней поверхности
аппарата Кротова.

Воздух
является неблагоприятной средой для
размножения микроорганизмов. Отсутствие
питательных веществ, солнечные лучи и
высушивание обусловливают быструю
гибель микроорганизмов в воздухе,
поэтому микрофлора воздуха не так
обильна, как микрофлора почвы и воды.

Состав микрофлоры
воздуха очень разнообразен, там
встречаются пигментные сапрофитные
бактерии (микрококки, сарцины), споровые
палочки, плесневые грибы и дрожжи.
Доказано что в 1 м³
воздуха животноводческих помещений
находится до 2 млн. микробов, в том числе
и патогенных. Патогенные микроорганизмы
попадают в воздух при кашле, отфыркивании
и чихании. При этом капли аэрозоли,
находящиеся в воздухе, служат источником
аэрогенного заражения окружающих.
Скорость оседания капель зависит от
диаметра аэрозоля.

Бактериальные
аэрозоли делят на три фазы. 1. Крупнокапельная
фаза с
диаметром частиц аэрозоля более 0,1 мм;
длительность пребывания таких частиц
в воздухе – несколько секунд, капли
быстро оседают. 2. Капельно-ядерная
фаза, имеющая
диаметр частиц 0,1 мм и менее. Частицы
длительно находятся в воздухе и
рассеиваются на большие расстояния с
потоками воздуха. С ней рассеиваются
различные микроорганизмы, в том числе
и патогенные. 3.
Фаза бактериальной пыли
имеет частицы разного диаметра от 1 мм
до 0,001 мм. Эта фаза имеет наибольшее
эпизоотологическое и эпидемиологическое
значение, т.к. она длительно находится
во взвешенном состоянии и глубоко
проникает в дыхательные пути. Аэрогенным
путем инфекционные заболевания
передаются, главным образом, в закрытых
помещениях.

Санитарно-бактериологическое
исследование воздуха проводят для
определения количества МАФАнМ (мезофильных
аэробных и факультативно-анаэробных
микроорганизмов) в 1 м³
и качественного состава (наличие
санитарно-показательных и патогенных
микроорганизмов). МАФАнМ в воздухе
определяют посевом на поверхность МПА,
а количество санитарно-показательных
микробов (стафилококков и стрептококков)
определяют посевом на кровяной и
желточно-солевой агар. Для определения
наличия плесневых грибов и дрожжей
применяют среды Сабуро и Чапека.

Существует много
методов бактериологического исследования
воздуха. Самыми доступными и чаще
применяемыми являются методы Коха и
Кротова.

Седиментационный
метод Коха.
Суть
метода
заключается в осаждении
микробных
частиц и
капель аэрозоли на поверхность плотной
питательной среды под действием силы
тяжести.

Методика:
чашки Петри с МПА и средой Сабуро
оставляют открытыми на 5-20 мин в классе,
в цехах молочного завода, мясокомбината
(время экспозиции зависит от предполагаемой
загрязненности). Чашки закрывают и
помещают в термостат при 30⁰С,
если это МПА или кровяной агар, их
культивируют в течение 48 часов; если
это среда Сабуро – культивирование
проводят при 25⁰С
в течение 4-7 суток. Затем проводят подсчет
выросших колоний бактерий и плесневых
грибов во всей чашке.

После подсчета
выросших колоний в чашке Петри, определяют
количество микроорганизмов в 1 м³
воздуха по формуле Омелянского, согласно
которой предполагается
(т.е. это не
точный метод),
что в чашки с питательной средой площадью
100 см²,
в течение 5 мин оседает столько микробных
клеток, сколько их содержится в 10 л
воздуха. Для определения количества
бактерий в 1м³
воздуха применяют формулу Омелянского:

А . 100 . 1000 .
5

Х =
———————

в . 10 . Т

где Х – количество
микробов в 1 м³
(1000 л) воздуха;

А – число
колоний выросших на МПА в чашках;

в – площадь
чашки (78 см²);

5 – время
экспозиции по правилу Омелянского;

Т – время,
в течение которого чашка была открыта;

10 –10 л
воздуха по правилу Омелянского;

1000 – 1 м³
воздуха;

100 — 100 см²
питательной среды.

Аспирационный
метод микробиологического исследования
воздуха
с применением прибора Кротова
основан на использовании ударного
действия воздушной струи, протянутой
через щель прибора, на поверхность МПА
в чашках Петри. Этот метод является
более точным, т.к. прибор снабжен
микроманометром (или ротаметром),
показывающим количество литров посеянного
воздуха. Аппарат Кротова – это
цилиндрический прибор, внутри
которого
имеется электромотор с центробежным
вентилятором. При вращении вентилятора
воздух засасывается из исследуемого
помещения через узкую клиновидную щель
в крышке прибора. Под крышкой прибора
находится вращающаяся платформа с
открытой чашкой Петри, струя воздуха
ударяется о поверхность питательной
среды, на которую оседают микроорганизмы
из воздуха. Чашки с посевами помещают
в термостат на 24-48 ч при 30⁰С,
затем подсчитывают количество колоний
в чашке и по формуле определяют число
микробов в 1м³
воздуха исследуемого помещения:

а
. 1000

Х
= ————

где Х –
число микробов в 1 м³
(1000 л) воздуха;

а —
число колоний, выросших на МПА в чашках;

1000 л = 1
м³
воздуха;

в — количество
литров воздуха, пропущенного через щель
прибора.

Таблица 1

Микробиологические
нормативы санитарного состояния воздуха

производственных
помещений
(исследуют 1 раз в месяц)

Метод исследования	МАФАнМ, КОЕ. Не более	Плесневые грибы, КОЕ. Не более
1	2	3
Метод Кротова	150 колоний в 100 л	15 колоний в 100 л
Метод Коха	200 колоний за 20 мин	20 колоний за 20 мин

Задание
для самостоятельной работы

Провести посев
воздуха класса в чашки с МПА методом
Коха для определения количества МАФАнМ.
Провести посев
воздуха класса методом Кротова для
определения количества МАФАнМ. Чашки
с посевами поставить в термостат.
На следующем
занятии провести подсчет выросших
колоний и определить количество МАФАнМ
в 1 м³
воздуха.

Санитарно-микробиологическое
исследование почвы

Цель занятия.
Ознакомить
студентов
с микрофлорой
почвы, источниками ее загрязнения
патогенной микрофлорой. Студенты должны
овладеть различными методами
бактериологического исследования
почвы.

Материальное
оснащение: образцы
почвы в пакетиках по 1 г, стерильный
физраствор по 9 мл в пробирках, стерильные
пипетки по 1 мл, стерильные чашки Петри,
расплавленный МПА в пробирках столбиком,
пробирки со средой Кесслера , агар Эндо
в чашках Петри.

Почва является
естественной средой обитания многих
видов микроорганизмов. В ней имеются
все условия для благоприятного их
развития: достаточное количество влаги,
органических и минеральных веществ.
Почвенные микроорганизмы участвуют в
минерализации органических отбросов,
самоочищении почвы, в круговороте
веществ в природе.

В почву с
выделениями больных, а также с трупами
животных, погибших от инфекционных
болезней, со сточными водами попадают
патогенные микроорганизмы. В связи с
этим почва может служить источником
распространения возбудителей инфекционных
болезней, через почву загрязняются
объекты окружающей среды, может
происходить обсеменение сапрофитными
и болезнетворными микроорганизмами
сырья животного
происхождения, пищевых продуктов,
кормов.

В составе микрофлоры
почвы принято выделять так называемые
физиологические группы микроорганизмов,
которые участвуют в различных процессах
и на разных этапах постепенного разложения
органических веществ, к которым относятся:

1. Аммонификаторы,
являющиеся гнилостными микроорганизмами,
вызывающими гниение остатков растений,
трупов животных, разложение мочевины
(Bac.
subtilis,
Bac.mesentericus,
S.marcescens,
Proteus,
грибы рода Aspergillus,
Penicillium;
анаэробы — Cl.sporogenes
Cl.perfringens).

2. Нитрифицирующие
бактерии;

3. Азотфиксирующие
– клубеньковые и свободноживущие
азотфиксирующие бактерии обладают
исключительной способностью усваивать
из воздуха атмосферный азот и в процессе
жизнедеятельности образуют из
молекулярного азота белки и другие
органические соединения азота, которые
используются растениями.

4. Бактерии,
расщепляющие клетчатку, вызывающие
различные виды брожения, наблюдаемые
при разложении микробами органических
соединений углерода (молочнокислое,
спиртовое, масляное, уксусное,
пропионовокислое, ацетонобутиловое и
др.).

5. Бактерии,
участвующие в круговороте серы, железа,
фосфора.

На сроки
выживания патогенных бактерий в почве
оказывают влияние многие факторы: тип
почвы, температура, воздействие окружающий
экологии.

К первой группе
патогенных микроорганизмов относятся
клостридии Cl.perfringens,
Cl.botulinum,
которые образуют споры и могут попасть
с остатками земли в силосуемую массу.

Вторая группа
включает спорообразующие патогенные
микроорганизмы (возбудители сибирской
язвы, столбняка, газовой гангрены),
почва для них является вторичным
резервуаром, поскольку при благоприятных
условиях они могут размножаться и
сохраняться в почве длительное время
в виде спор. Например, палочки сибирской
язвы оказались способными вегетировать
в почве при 12⁰
С, достаточной влажности и наличии
гумуса и микроэлементов.

В третью группу
включены патогенные микроорганизмы,
попадающие в почву с выделениями животных
и человека и сохраняющиеся там, в течение
нескольких недель или месяцев. Все эти
микроорганизмы – сальмонеллы, бруцеллы,
микобактерии, лептоспиры и т.д. не
образуют спор и поэтому быстро гибнут,
в результате воздействия различных
физических и химических факторов.

В почве обитает
много плесневых грибов, некоторые из
них, например, грибы из рода Фузариум,
Стахиботрис, попадая на злаковые и
другие растения, в процессе своего
развития, вырабатывают токсические
вещества, особенно во время зимовки на
полях.

Микробы, для
которых

почва
является природным биотопом

Микробы,
попадающие в почву с выделениями
животных и человека

Сохраняющиеся
долго

Сохраняющиеся
сравнительно недолго

Клостридии
ботулизма

Возбудители
глубоких микозов.

Актиномицеты

Некоторые
возбудители

Микотоксикозов.

Бациллы сибирской
язвы.

Клостридии
столбняка.

Клостридии
анаэробных инфекций.

Сальмонеллы,
шигеллы, вибрионы, бруцеллы.

Возбудители
туляремии,

туберкулеза,лептоспироза.

Возбудитель
сапа, Вирус

ящура, энтеровирусы.

Обычно ограничиваются
определением следующих показателей в
почве:

— количество МАФАнМ
в 1 г;

— коли-титра почвы;

— в отдельных
случаях в почве определяют наличие
возбудителей сибирской язвы (например,
при строительстве детских лагерей,
новых животноводческих помещений).

Отбор проб
почвы. На
обследуемой территории до 1000 м³
выделяют два участка по 25 м²
каждый: один участок выбирают вблизи,
другой – вдали от источника загрязнения.
С каждого участка отбирают среднюю
пробу, составленную из 5 образцов, взятых
по диагонали. Образцы берут на глубине
до 20 см, при исследовании почвы
скотомогильников – ниже глубины
захоронения не менее чем на 25 см. Пробы
отбирают стерильным железным совком
или специальным буром в стерильные
широкогорлые банки, которые закрывают
ватными пробками. К банке приклеивают
этикетку с датой и номером отобранной
почвы.

Масса
каждого
образца должна быть 200-300 г, а смешанного
– не менее 1 кг. Отобранные пробы почвы
направляют в лабораторию и исследуют
сразу же или не позднее, чем через 12-18 ч
при хранении в холодильнике.

Определение
МАФАнМ в 1 г почвы методом серийных
разведений

Для приготовления
первого разведения 1:10 в колбу емкостью
500 мл наливают 270 мл стерильной водопроводной
воды, куда добавляют 30 г исследуемой
почвы. Колбу встряхивают несколько
минут и отстаивают для оседания тяжелых
частиц, микроорганизмы останутся в
верхнем прозрачном слое.

Но в условиях
учебного класса обычно 1 г почвы вносят
в 10 мл стерильной воды, из полученного
разведения почвы 1:10^-1
готовят последующие десятикратные
разведения: для чистых почв до 1:10^-4,
для загрязненных – до 1:10^-6
— 1:10^-9.

Из двух
последних разведений почвы берут по 1
мл и переносят в стерильные чашки Петри
(не менее двух чашек на каждое разведение),
которые заливают 15 мл охлажденного до
50⁰С
МПА и тщательно перемешивают, (этот
метод называется «метод горячих
заливок»). Посевы культивируют в
термостате 24-48 ч при 30⁰С.

Учет результатов
проводят путем подсчета выросших колоний
в чашках Петри и определения
среднеарифметического числа. Полученное
число колоний умножают на степень
разведения исследуемой почвы и получают
число бактерий в 1 г почвы. Обычно в 1 г
огородной почвы количество бактерий
достигает 1-3 млрд.

Определение
коли-титра почвы методом бродильных
проб с использованием среды Кесслера.
Исследования проводят в три этапа. На
первом этапе готовят разведения: для
чистых почв от 1:10^-1
до 1:10^-3;
для загрязненных – от 1:10^-3
до 1:10^-9.
После тщательного перемешивания
полученной суспензии из различных
разведений по 1 мл переносят в пробирки
с 9 мл среды Кесслера с поплавками. Посевы
культивируют при 43⁰С
в течение 48 часов (при такой температуре
дает рост кишечная палочка только
теплокровных).

На втором
этапе исследования просматривают посевы
на среде Кесслера. Из проросших пробирок
с наличием газа делают высев на поверхность
агара Эндо в чашках Петри по секторам
(4), с таким расчетом, чтобы выросли
изолированные колонии. Посевы культивируют
при 37⁰С
в течение 24 ч.

На третьем
этапе исследуют колонии, выросшие на
среде Эндо. Для этого отмечают и отбирают
колонии, типичные для бактерий БГКП,
готовят из них мазки, красят по Граму,
микроскопируют. При обнаружении в мазках
коротких грамотрицательных палочек
проводят высев из этих колоний на среду
Кесслера для подтверждения газообразования
в чистой культуре. В таблице 2 приведены
санитарно-микробиологические показатели
почвы.

Таблица 2

Микробиологические
нормативы санитарного состояния почвы

Оценка почвы	МАФАнМ, КОЕ, не более	Коли-титр почвы
Относительно чистая	Менее 10 тысяч	Выше 1,0
Умеренно загрязненная	Сотни тысяч	1,0 — 0,01
Сильно загрязненная	Миллионы	0,01 — 0,001

Особую трудность
представляет выделение сибиреязвенных
спор из почвы, так как в ней находится
огромное количество различных
микроорганизмов, в том числе спорообразующих
сапрофитных аэробов (Bac.subtilis
— сенная палочка, Bac.mesentericus
— картофельная палочка, Bac.
megatherium
— капустная палочка) по многим своим
свойствам схожих с палочкой сибирской
язвы. Существующие бактериологические
методы не всегда позволяют легко выделить
возбудителя сибирской язвы из почвы.
Основная трудность состоит в отделении
спор от частиц почвы. Из многих известных
методов более надежным является метод
предварительной подготовки пробы почвы
по следующей методике: 1.100 г исследуемой
почвы заливают 5-10 кратным объемом
стерильного фосфатного буфера или воды;
2. Шуттелируют взвесь в течение 20-30 мин,
с последующим 5-8 мин отстаиванием; 3.
Фильтрование через 2-3 слоя марли; 4.
Прогревание полученной суспензии в
водяной бане в течение 30 мин при 70⁰С
для уничтожения сопутствующей вегетативной
микрофлоры; 5. Посев полученной суспензии
в МПБ и на поверхность МПА в чашках Петри
для получения изолированных колоний;
6.Заражение полученной культурой 5-10
белых мышей, подкожно в дозе 0,1-0,2 мл; 7.
Вскрытие павших мышей и выделение чистой
культуры возбудителя сибирской язвы.

Для выделения
чистой культуры возбудителя сибирской
язвы из исследуемого материала
загрязненного посторонней микрофлорой,
предложены селективные среды, в состав
которых вводят 200-500 ЕД/мл полимиксина
в сочетании с триметопримом, которые
подавляют рост сопутствующей микрофлоры:
мезофильных бактерий, B.subtilis,
B.cereus
и E.coli.

Задание
для самостоятельной работы

Провести
бактериологическое исследование
различных образцов почвы методом
серийных разведений для определения
количества МАФАнМ посевом в чашки
Петри. Чашки поставить в термостат.
На следующем
занятии провести подсчет выросших
колоний, определить количество МАФАнМ
в 1 г исследуемой почвы.
Провести демонстрацию
посева исследуемых образцов почвы в
среды Кесслера для определения
коли-титра.

Соседние файлы в предмете [НЕСОРТИРОВАННОЕ]

Источник

Другим прибором аналогичного назначения [13] является пробоотборник воздуха ПОВ-1 (рис.59).

Рис. 59. Пробоотборник воздуха ПОВ-1

Техническая характеристика прибора ПОВ-1
Производительность………… 20 л/мин
Питание от сети переменного тока….. 127/220 В
Потребляемая мощность……….не более 18 В А
Габариты прибора……………………..170x255x285 мм
» укладки……………………..170X270X350 »
Масса (с укладкой)……………………..не более 15 кг

Рис. 60. Аспиратор для отбора проб воздуха. Пояснения в тексте.

На рис. 61 показан общий вид аспиратора с держателем фильтров.

Рис. 61. Аспиратор с держателем фильтров.

Рис. 62. Прибор для электрофореза микобактерий ЭФМ-1.

Прибор снабжен комплектом принадлежностей, куда входят 20 небьющихся кювет емкостью по 12 мл, электроды, пипетки. Прибор питается от сети переменного тока напряжением 220 В± 10%, 50 Гц. Потребляемая мощность — не более 20 Вт. Габариты— 405X165X205 мм. Масса прибора с комплектом принадлежностей — 6 кг.

Принцип работы прибора. В специальные кюветы, из комплекта к прибору, наливают по 10 мл исследуемого материала. Над каждой кюветой с помощью зажима-держателя укрепляют пипетку, в которую помещен графитовый электрод. Часть исследуемой жидкости поднимается на 4—5 мм по капилляру пипетки и касается электрода. В зависимости от цели исследования устанавливают полярность приложенной ЭДС. Электрофорез рекомендуется проводить в течение 1—3 ч.

Растворы красок и кислоты должны быть тщательно проверены бактериологически.

Рис. 63. Прибор для счета колоний.

Такое устройство устраняет электроразряды, которые имеют место при использовании других систем.

Рис. 64. Чемодан-укладка для микробиологических исследований.

Рис. 65. Прибор для определения качества продуктов ЛПК-1.

Источник

11. ИССЛЕДОВАНИЕ МИКРОФЛОРЫ ВОЗДУХА ПОМЕЩЕНИЙ

Цель работы: ознакомиться с методами микробиологического исследования воздуха помещений.

Оборудование, реактивы: аппарат Кротова, стерильные чашки Петри, питательные среды — мясопептонный агар, сусло-агар.

Воздух производственных помещений на предприятиях пищевой промышленности может стать источником инфицирования посторонними микроорганизмами сырья и готовой продукции. Обычно в воздухе находятся различные микрококки, сарцины, неспорообразующие палочки, дрожжи, споры бактерий и мицелиальных грибов, могут встречаться и болезнетворные микроорганизмы.

При микробиологическом исследовании в 1 м воздуха определяют общее количество микроорганизмов, наличие плесневых грибов, а при необходимости — группу санитарно-показательных микроорганизмов: гемолитический стрептококк (посев на кровяной агар) и золотистый стафилококк (посев на желточно-солевой агар).

Для определения количества микроорганизмов в воздухе используют различные методы. Наиболее распространенными являются седиментационный и аспирационный методы.

11.1. Седиментационный метод

Седиментационный метод (метод Коха) основан на оседании пылинок и капель вместе с микроорганизмами на поверхность питательной среды в открытых чашках Петри. Контроль воздуха помещений проводят следующим образом. Готовят две стерильные чашки Петри. Одну из них заливают расплавленным мясопептонным агаром (МПА), другую — сусло-агаром (СА). После застывания агара чашки переносят в исследуемое помещение, открывают крышки, сдвигают их на края бортиков так, чтобы вся поверхность питательной среды была открыта полностью. Чашки оставляют открытыми в течение 5, 10 или 15 мин в зависимости от степени загрязненности воздуха. Затем чашки закрывают, переворачивают вверх дном и помещают в термостат.

Внимание! Если чашки не переворачивать вверх дном, то конденсационная влага, выделяющаяся из агаризованной среды, будет попадать с внутренней стороны крышки на поверхность среды и размывать колонии микроорганизмов.

Чашки с МПА выдерживают при температуре 37 °С в течение 24 ч, а чашки с СА — при 30 °С в течение 48 ч.

Для определения количества микроорганизмов в 1 м² воздуха пользуются формулой В.Л. Омелянского, согласно которой на поверхность чашки площадью 100 см² оседает в течение 5 мин столько микроорганизмов, сколько их содержится в 10 дм³ воздуха:

X = а • 100 • 5 • 100/ST,

где а — число колоний, выросших на чашке; 100 — пересчет площади чашки на 100 см²; 5 — экспозиция чашки по Омелянскому, мин; 100 — пересчет на 1 м³ воздуха; S — площадь чашки Петри (78,5 см²); Т — время экспозиции открытой чашки, мин.

11.2. Аспирационный метод

Аспирационный метод (метод Кротова) основан на использовании щелевого аппарата конструкции Ю. А. Кротова. Прибор, смонтированный в портативном ящике, состоит из узла для отбора пробы, куда на специальную площадку помещают чашку Петри без крышки, электромотора, вентилятора и ротаметра. Вентилятор, вращаясь с частотой 4-5 тыс. об/мин, засасывает воздух, струя которого ударяется о поверхность питательной среды в чашке Петри, оставляя на ней мироорганизмы. Воздух выходит из прибора через ротаметр. Для равномерного распределения микроорганизмов на поверхности среды диск с чашкой вращается с частотой 60 об/мин. Скорость протягивания воздуха составляет 25 дм³/мин. При определении общей численности бактерий количество пропущенного воздуха должно составлять 100 дм³. Засеянные чашки вынимают из аппарата, закрывают их крышками, помещают на 24 ч в термостат при температуре 37 °С, затем вынимают и оставляют при комнатной температуре на 24 ч. Подсчитывают число выросших колоний и производят перерасчет на 1 м воздуха:

X = а/1000 • V,

где а — количество выросших на чашке колоний; V — объем пропущенного через прибор воздуха; 1000 — искомый объем воздуха, дм³.

Кроме количественной, дается качественная характеристика микрофлоры воздуха. Для этого проводят описание колоний бактерий, выросших на чашках Петри, и готовят микроскопические препараты из этих колоний. Описание колоний бактерий проводят, как это указано в разд. 5.3.

Результаты исследования оформляют в виде таблицы по форме табл. 11.1, микроскопические препараты из колоний зарисовывают в тетрадь.

Таблица 11.1. Изучение морфологии колоний бактерий, выросших на МПА

Характеристика колонии
Размер	Форма	Профиль	Край	Поверхность	Цвет	Структура

Плесневые грибы, выросшие в чашке Петри с сусло-агаром, рассматривают визуально и под микроскопом с объективом 8х. Пользуясь описанием грибов, приведенным в разделе 5, определяют их принадлежность к определенному роду.

Санитарное состояние воздуха обследуемого помещения оценивают согласно санитарным нормам и правилам. В табл. 11.2 приведен фрагмент формы журнала санитарно-микробиологического контроля на предприятиях пищевой промышленности.

Таблица 11.2. Санитарно-микробиологический контроль на предприятии

Объект контроля	Микробиологическое определение	Допустимая норма	Периодичность контроля
Воздух цеха	Общее микробное число	200 колоний на чашке с МПА при седиментационном методе после 20 мин экспозиции; 150 колоний — при просасывании 100 дм3 аппаратом Кротова	2 раза в месяц
Воздух цеха	Споры плесневых грибов	20 колоний на чашке с СА после 20 мин экспозиции и 15 колоний — по методу Кротова	2 раза в месяц

Пользуясь данными, приведенными в табл. 11.2, дать заключение о микробиологической чистоте воздуха обследованного помещения.

Контрольные вопросы

1. Какими методами производят микробиологический анализ воздуха помещений?

2. Каковы критерии санитарной оценки воздуха производственных помещений на предприятиях пищевой промышленности?

3. Какие микроорганизмы наиболее часто встречаются в воздухе помещений?

Источник