Инструкция работы по приготовлению временного микропрепарата

Техника изготовления временных микропрепаратов

  Материалы.
Листья традесканции виргинской
(Tradescantia
virginica),
подсолнечника (Helianthus
annuus); тычинки
из цветков мальвы (Malva
sp.),
зафиксированные в 90-96%-ном спирте;
комплект постоянных микропрепаратов
«Анатомия растений»; лактофенол,
сернокислый анилин.

  Для
изучения растительных объектов с помощью
светового микроскопа необходимо
приготовить микропрепарат. Микропрепараты,
не предназначенные для длительного
хранения, называются временными.
Изучаемый объект помещают на предметное
стекло в каплю воды, глицерина, раствора,
реактива или красителя и накрывают
покровным стеклом. Такие препараты
можно хранить в течение нескольких
дней, поместив во влажную атмосферу.

Если
объекты помещают в бальзам, глицерин с
желатиной или целлоидин, препараты
сохраняются годами и называются
постоянными.

Некоторые
растения или их органы (водоросли, споры,
пыльца и др.) можно рассматривать под
микроскопом целиком, без предварительного
изготовления срезов. Такие препараты
называются тотальными.

Однако
число объектов, которые можно изучать
на тотальных микропрепаратах невелико.
Чаще приходится делать срезы органов,
подлежащих изучению. Срезы изготавливают
из свежих или фиксированных частей
растений. Обычно для фиксации употребляют
растворы спирта или формалина. Сделанные
срезы должны быть очень тонкими и
прозрачными. Различают следующие виды
срезов: поперечный
и продольный
(радиальный,
тангентальный,
парадермальный)
(рис. 2, Б).

Поперечный
срез проходит
перпендикулярно оси органа и позволяет
изучить строение органа в поперечном
сечении.

Продольный
радиальный срез
проходит по радиусу оси органа и дает
возможность изучить строение органа в
продольном сечении.

Продольный
тангентальный срез проходит
перпендикулярно радиусу цилиндрической
структуры, например, корня или стебля;
в случае вторичных ксилемы и флоэмы
проходит под прямым углом к сердцевинным
лучам.

Парадермальный
срез (греч.
пара +
дерма —
кожа) — сечение, параллельное поверхности
плоской структуры, например, листа (срез
эпидермы листа).

Правила изготовления анатомических срезов

Для
приготовления временных микропрепаратов
необходимо иметь набор предметных и
покровных стекол, препаровальные иглы,
пипетку, безопасную бритву, скальпель,
стеклянную палочку, фильтровальную
бумагу, реактивы.

При
изготовлении временных микропрепаратов
необходимо соблюдать следующую
последовательность операций:

•  Вымыть
и тщательно вытереть предметное и
покровное стекла. Чтобы не сломать очень
хрупкое покровное стекло, надо поместить
его в складку салфетки между большим и
указательным пальцами правой руки и
осторожно вытереть его круговыми
движениями пальцев;

•  Нанести
на предметное стекло пипеткой каплю
жидкости (воды, глицерина, раствора,
реактива или красителя);

•  Сделать
срез изучаемого органа при помощи
лезвия. Лезвие должно быть очень острым.
Для изготовления срезов, мелкие объекты
поместить между кусочками из сердцевины
бузины или пенопласта (рис. 2, А). Лезвием
выровнить верхнюю поверхность пенопласта
вместе с объектом. Затем сделать тонкий
срез, ведя лезвием к себе наискось одним
плавным и быстрым движением. При этом
объект держать строго вертикально, а
лезвие — строго горизонтально. Обе руки
должны быть совершенно свободны. Не
следует ими опираться на стол или
прижимать к груди (рис. 3). Сделать сразу
несколько срезов. Лезвие и объект все
время смачивать.

•  Выбрать
самый тонкий срез, перенести его с
помощью препаровальной иглы или тонкой
кисточки в центр предметного стекла в
каплю жидкости;

•  Закрыть
срез покровным стеклом так, чтобы под
него не попал воздух. Для этого покровное
стекло взять двумя пальцами за грани и
подвести под углом нижнюю грань к краю
капли жидкости и плавно его опустить;

•  Если
жидкости много, и она вытекает из-под
покровного стекла, удалить ее при помощи
фильтровальной бумаги. Если же под
покровным стеклом остались места,
заполненные воздухом, то добавить
жидкость, поместив ее каплю рядом с
краем покровного стекла, а с противоположной
стороны фильтровальную бумагу.

Рис.
2. Закладка объекта в сердцевину бузины
(А) и сечения
цилиндрического органа (Б):

1
— поперечное, 2 — продольное радиальное,
3 — продольное тангентальное.

Рис.
3. Положение рук при изготовлении среза.

При
необходимости окрашивания препарата
реактивом воду из-под покровного стекла
отсасывают с помощью фильтровальной
бумаги, а капельку реактива наносят с
противоположной стороны на край
покровного стекла. Реактивами, часто
используемыми при окраске растительных
препаратов, являются такие:

• йод,
растворенный в йодиде калия (для
окрашивания крахмальных зерен);

• фуксин
(для окрашивания цитоплазмы);

• гематоксилин
(для окрашивания ядер);

• хлор-цинк-йод
(для окрашивания целлюлозных клеточных
оболочек);

• флороглюцин
и соляная кислота (для окрашивания
одревесневших оболочек);

• глицерин
(для просветления препарата) и др.

  Ход
работы

  Задание
1. Приготовить
2 тотальных микропрепарата пыльцы мальвы
(Malva sp.):
пыльца в воздухе (без покровного стекла)
и в лактофеноле. Рассмотреть оба препарата
при малом увеличении, отметив особенности
сред, в которые помещены пыльцевые
зерна. Исследовать строение пыльцы при
большом увеличении микроскопа. Сделать
рисунок.

Последовательность
работы. На
середину предметного стекла пипеткой
нанести каплю спирта с пыльцой. После
высыхания спирта, препарат положить на
предметный столик микроскопа и рассмотреть
пыльцевые зерна в окружении воздуха.
Показатели преломления стекла, воздуха
и пыльцы существенно различаются.
Поэтому в воздушной среде видны лишь
грубые и сильно затемненные элементы
структуры. Чтобы избежать не желательных
оптических явлений, надо рассмотреть
пыльцу в среде, показатель преломления
которой близок к показателю преломления
стекла. Такой средой служит лактофенол.
Стеклянной палочкой на объект нанести
каплю лактофенола, затем накрыть его
покровным стеклом.

Готовый
микропрепарат поместить на предметный
столик и исследовать. При малом увеличении
видны крупные шаровидные пыльцевые
зерна с шиповидными выростами на
поверхности (рис. 4). При большом увеличении
и перемещении тубуса с помощью
микрометренного винта пыльцевые зерна
рассмотреть в разных плоскостях: то с
поверхности, то в оптическом разрезе.
На поверхности пыльцевого зерна хорошо
видны выросты стенки. Ближе к периферии
они кажутся удлиненными и заостренными,
ближе к центру — более шаровидными, а в
проекции они имеют вид небольших
окружностей. Кроме выростов, на поверхности
расположены ростковые
поры, через
которые в период прорастания пыльцы
выходят пыльцевые трубки.

Слегка
опустить тубус с помощью микрометренного
винта и рассмотреть густое темное
внутреннее содержимое (которое отстало
от стенки вследствие обезвоживания его
спиртом) и две стенки: внутреннюю тонкую
— интину и
наружную толстую с шаровидными выростами
— экзину.
После детального исследования при
большом увеличении зарисовать одно
пыльцевое зерно и обозначить экзину,
шиповидные выросты, ростковую пору,
интину, внутреннее содержимое.

Рис.
4. Пыльцевое зерно мальвы (Malva
sp.) (часть
зерна в оптическом разрезе):

1
— экзина, 2 — шиповидный вырост, 3 — ростковая
пора (вид сверху), 4 — ростковая пора (вид
сбоку), 5 — интина, 6 — внутреннее содержимое.

Задание
2. Приготовить
временный препарат парадермального
среза эпидермы с нижней стороны листа
традесканции виргинской (Tradescantia
virginica) в
капле воды, и рассмотреть его под
микроскопом.

Последовательность
работы. Для
изготовления препарата лист традесканции
обвернуть вокруг указательного пальца
левой руки так, чтобы нижняя сторона
фиолетового цвета была обращена наружу.
Правой рукой при помощи препаровальной
иглы надорвать эпидерму над средней
жилкой в средней части листа и пинцетом
снять ее кусочек. При этом невольно
захватывается и часть мякоти листа
(мезофилла), но обычно можно найти тонкий
участок на периферии, состоящий из
одного ряда клеток эпидермы. Сорванный
кусочек положить на предметное стекло
в каплю воды наружной стороной вверх и
накрыть покровным стеклом. При малом
увеличении рассмотреть вытянутые клетки
в виде шестиугольников, бесцветные или
окрашенные в бледно-фиолетовый цвет
благодаря присутствию в вакуолях
пигмента антоциана.

Задание
3. Научиться
изготовлять разные виды срезов
(поперечный, продольный радиальный,
продольный тангентальный) из стебля
подсолнечника (Helianthus
annuus) и делать
из них микропрепараты. Рассмотреть их
под микроскопом.

Последовательность
работы.
Свежесрезанные или фиксированные
междоузлия стебля (длиной 2 — 3 см,
толщиной 7- 8 мм) разрезать вдоль на 2
части. Невооруженным глазом или с помощью
лупы на поперечном сечении стебля можно
выделить две зоны: наружную — неоднородную,
состоящую преимущественно из плотно
сомкнутых клеток, и внутреннюю — рыхлую,
построенную однородно.

Поперечные
срезы. С
выровненной поверхности одной из
половинок сделать лезвием несколько
поперечных срезов. Эти срезы должны
захватить как периферическую часть,
так и часть рыхлой сердцевины. С помощью
препаровальной иглы или кисточки срез
поместить в центр предметного стекла,
окрасить его раствором сернокислого
анилина, накрыть покровным стеклом и
рассмотреть под микроскопом.

Продольные
срезы. Для
изготовления продольного радиального
среза разрезать
вдоль кусочек стебля подсолнечника
так, чтобы разрез прошел через середину
одного из крупных пучков, и с полученного
радиального разреза сделать лезвием
несколько тонких срезов. Срез поместить
на предметное стекло, окрасить сернокислым
анилином, накрыть покровным стеклом и
рассмотреть под микроскопом.

Для
изготовления продольного тангентального
среза разрезать
кусочек стебля подсолнечника
перпендикулярно радиусу стебля, так
чтобы он проходил под прямым углом к
сердцевинным лучам. Произвести его
окрашивание сернокислым анилином.

Одревесневшие
оболочки клеток окрасятся в лимонно-желтый
цвет.

Задание
4. Рассмотреть
несколько постоянных микропрепаратов
из комплекта «Анатомия растений».
Сравнить временные и постоянные
микропрепараты стебля подсолнечника.

Соседние файлы в предмете [НЕСОРТИРОВАННОЕ]

• #
• #
• #
• #
• #
• #
• #
• #
• #
• #
• #

Персональный сайт — Занятия «Мир под микроскопом» (ucoz.ru)

Пояснительная записка

Занятие кружка «Мир под микроскопом» 

Возраст: 8-15лет

Направленность: естественнонаучная

Тип занятия: комплексное применение знаний

Форма обучения: заочная (с применением информационно-коммуникативных технологий, в том числе с применением дистанционных образовательных технологий)

Занятие разработано: по Дополнительно общеобразовательной (общеразвивающая) программе «Мир под микроскопом» Составитель: канд. биол. наук, доцент Габдулинова Камиля Гапбасовна.

Основой занятия – Является просмотром видео лекций, презентации, самостоятельное выполнение заданий, обобщающее тестирование.

 Необходимые технические средства: выход в интернет, ноутбук. смартфон, микроскоп.

Методы и приемы: репродуктивные, интерактивные, частично-поисковые, исследовательские, наглядные, диалоговый.

 Деятельность обучающихся: индивидуальная

Технологии: ИКТ, личностно-ориентированная, здоровье сберегающая.

Основные принципы при проведении занятия:

не развлекательность, а занимательность и увлечение как основа эмоционального фона занятия;

создание условий для общения учащихся как основы внутренней мотивации к учению;

уважительное отношение к детскому знанию и незнанию;

оценка не только знаний, но и стремления к ним, находчивости;

Цель– создание условий для формирования склонности обучающихся для самостоятельного приобретение недостающих знаний из разных источников эффективного использования ресурсов ДОД .

Задачи:

Образовательные: (ориентированные на достижение предметных результатов):

—развивать самостоятельность при ведении учебно-познавательной деятельности.

— знакомить с многообразием микроскопов, устройством и правилами работы с ними (на примере цифрового микроскопа).

— обучать технике изготовления микропрепаратов; способам фиксирования результатов наблюдений в виде фото и видео, выполненных с помощью цифрового микроскопа.

— сформировать у школьников представление о принципах функционирования микроскопа и об основных методах микроскопирования;

Развивающие: (ориентированные на метапредметные результаты образования):

— развить способности аналитически мыслить, сравнивать, обобщать, классифицировать изучаемую информацию;

-формировать навык работы со справочной научной и научно — популярной литературой (поиск и отбор необходимого материала).

— развивать у обучающихся представления и понятий об объектах и явлениях окружающего мира (неживой и живой природы, а также предметах, изготовленных людьми) в процессе работы с цифровым микроскопом.

Воспитательные: (ориентированные на личностные результаты):

— воспитание бережного отношения к природе через осознание неповторимости и своеобразия природных объектов и явлений в процессе их изучения с помощью микроскопа.

— развитие эмоциональной сферы и восприятия, сохранение чувства удивления, восхищения открывающимися гранями красоты природы при созерцании микромира

Техника приготовления временных микропрепаратов

   Видео лекция  » Приготовление временных препаратов»

         https://youtu.be/OsQOzjdUzIM

    Видео лекция  «Приготовление фиксированных препаратов»

• Практический материал «Техника приготовления временных микропрепаратов»​​​​​​​

Задание для индивидуальной работы​​​​​​​​​​​​​​

Микроскопы открывают крохотные миры. С помощью микроскопа можно увидеть невероятный мир, существующий на клеточном уровне. Поразительным свойством микропрепаратов является возможность их длительного хранения и наблюдения распада клеток с течением времени. В любом случае, если не терпится поскорее взглянуть на образец или проводится долгое научное исследование, нужно научиться приготавливать микропрепараты.

Приготовление сухого препарата

Сухие препараты используются для изучения образцов, не требующих для выживания контакта с водой. Для начала потребуется чистое предметное стекло. Осторожно поместите как можно более тонкий срез образца в центр предметного стекла и накройте его покровным стеклом. Если вы в резиновых перчатках, можете слегка придавить покровное стекло, чтобы выровнять препарат.

Приготовление влажного препарата

Влажные препараты используются, если образец не может обходиться без воды, чтобы оставаться живым. Это часто бывает с одноклеточными организмами и мелкими животными. Возьмите чистое предметное стекло. С помощью пипетки, поместите одну-две капли дистиллированной воды в центр стекла. Поместите в воду образец и накройте его покровным стеклом. Опять же, можно немного прижать покровное стекло, если на руках резиновые перчатки. Прикосновение к стеклу без перчаток оставит на нем отпечатки, мешающие наблюдениям препарата под микроскопом.

Влажные препараты сами по себе удерживают покровное стекло на месте и могут храниться некоторое время. Если исследуемые микроорганизмы слишком подвижны, чтобы их можно было изучать, «замедлить» их, добавив в воду связующий компонент, например «Protoslo» (1,5% раствор метилцеллюлозы).

Подкрашивание препаратов

Некоторые организмы трудно увидеть под микроскопом без дополнительного окрашивания. Лучший способ это сделать – добавить капельку раствора Люголя (раствор йода и йодида калия) в воду перед тем, как поместить в нее образец. Также можно использовать растворы «метиленового синего» или «кристаллического фиолетового».

Если требуется окрасить уже готовый препарат , можно попробовать такую хитрость. Поместите с одной стороны покровного стекла краситель, а с другой – бумажную салфетку. Салфетка будет вытягивать влагу из-под стекла с  одной стороны и таким образом затягивать под него краситель с другой стороны.

 Видео лекция  » Приготовление временных препаратов»

Рекомендации по изготовлению временных микропрепаратов
и выполнению биологического рисунка

Правила приготовления микропрепаратов

Техника приготовления временных микропрепаратов

1. Микропрепараты готовят путем помещения объектов в каплю воды на предметном стекле, тщательно расправляя их с помощью препаровальных игл
и накрывая покровным стеклом. Избыток воды удаляется фильтровальной бумагой.

2. Приготовленный препарат рассматривается вначале при малом (×8, ×20),
а затем при большом (×40, ×60, ×90 с иммерсией) увеличении микроскопа с осветителем. При использовании иммерсионной системы микроскопа на препарат наносят каплю кедрового масла и рассматривают без покровного стекла.

3. Рассматриваемые объекты зарисовываются и подписываются.

4. Узнать увеличение микроскопа, при котором рассматривается тот или иной объект, просто. Для этой цели необходимо умножить цифру, стоящую на объективе, на цифру, обозначенную на окуляре (эта цифра всегда со знаком ×). Например, при объективе 40 и окуляре ×10, микроскоп дает увеличение в 400 раз.

Техника выполнения биологического рисунка

Зарисовке ботанических объектов нужно уделять серьезное внимание, так как это не только способ оформления результатов наблюдения, но и метод эксперимента, позволяющий более детально изучить объект.

1. Рисунок должен быть четким, пропорциональным, правильно отражать результаты наблюдений, трактовку исследованных структур.

2. Схему строения таллома рисуют при малом, а детальное строение отдельных клеток при большом увеличении микроскопа.

3. Располагают рисунок с левой стороны листа.

4. На правую сторону выносят стрелки с цифрами и расшифровывают их
в подрисуночной подписи.

5. Рисунок должен быть крупным (не более двух на листе). Делают его простым карандашом.

  Видео лекция  «Приготовление фиксированных препаратов»

Приготовление фиксированных окрашенных препаратов включает следующие этапы: приготовление мазка, высушивание, фиксацию и окраску.

1. Приготовление мазка. На обезжиренное спиртом предметное стекло помещают маленькую каплю водопроводной воды и переносят в нее петлей небольшое количество исследуемого материала как для препарата «раздавленная капля». Полученную суспензию равномерно размазывают петлей на площади 1 — 2 см2 возможно более тонким слоем. Мазок должен быть настолько тонок, чтобы высыхал после приготовления.
2. Высушивание мазка. Лучше всего сушить готовый препарат при комнатной температуре на воздухе. Хорошо приготовленный тонкий мазок высыхает быстро. Если высушивание мазка замедлено, то препарат можно слегка нагреть в струе теплого воздуха высоко над пламенем горелки, держа стекло мазком вверх. Эту операцию следует проводить осторожно, не перегревая мазка, иначе клетки микроорганизмов деформируются.

3. Фиксация препарата преследует несколько целей: убить микроорганизмы, то есть сделать безопасным дальнейшее обращение с ними; обес печить лучшее прилипание клеток к стеклу; сделать мазок более восприимчивым к окраске, так как мертвые клетки окрашиваются лучше, чем живые. Самым распространенным способом фиксации является термическая обработка. Для этого препарат трижды проводят через наиболее горячую часть пламени горелки, держа предметное стекло мазком вверх. Не следует перегревать мазок, так как при этом происходят грубые изменения клеточных структур, а иногда и внешнего вида клеток, например их сморщивание. Для исследования тонкого строения клетки прибегают к фиксации различными химическими веществами. Фиксирующую жидкость наливают на мазок, либо препарат на определенное время погружают в стакан с фиксатором.

4. Окраска. Клетки микроорганизмов окрашивают главным образом анилиновыми красителями. Различают простые и дифференциальные спо собы окрашивания микроорганизмов. При простой окраске прокрашивается вся клетка, так что становятся хорошо видны ее форма и размеры. Дифференциальная окраска предполагает окрашивание не всей клетки, а опре деленных ее структур. С помощью дифференциальной окраски выявляют некоторые клеточные структуры и запасные вещества. Для простого окрашивания клеток микроорганизмов чаще всего пользуются фуксином, генциановым фиолетовым, метиленовым синим. Для получения более чистых препаратов краситель наливают на мазок, покрытый фильтровальной бумагой.

Метод окрашивания в модификации

Синева позволяет использовать вместо растворов красителей фильтровальную бумагу, заранее пропитанную красителем. В правильно окрашенном и хорошо промытом препарате поле зрения светлое и чистое, окрашены только клетки микроорганизмов. Фиксированные, окрашенные препараты могут храниться длительное время. Необходимо помнить, что возраст культуры, состав среды и условия культивирования существенно влияют на морфологию и цитологию микроорганизмов.

Практический материал «Техника приготовления временных препаратов»

Задание 1. Ознакомление с лабораторным оборудованием, применяемом при работе с микроскопом.

Ознакомьтесь с назначением лабораторного оборудования, применяе- мого при работе с микроскопом: микротомом, предметными и покровными стеклами, пинцетом, пипеткой, препаровальной иглой и др.

Задание 2. Освоение техники приготовления временных препаратов.

Изготовьте препарат эпидермы (кожицы) сочной чешуи луковицы лука. Для правильного выполнения задания используйте литературу для учащихся [2, 3], презентацию лекции «Продолжим знакомство с микроско- пом».

Найдите и рассмотрите при малом увеличении участок эпидермы, со- стоящий из одного слоя клеток с хорошо заметными ядрами (используйте нижнюю подсветку микроскопа). Изучите строение клетки при большом увеличении.

Задание 3. Выводы по занятию.

Литература для педагога

Приготовление микропрепаратов. https://www.4glaza.ru/articles/about_kits_for_experimenting/

Лабораторный практикум по зоологии позвоночных: Учеб. пособие для студ. высш. учеб. зав. / В.М. Константинов, С.П.Шаталова, В.Г.Бабенко и др. / Под ред. В.М.Константинова. — М.: Академия, 2004. — 272 с.

Практикум по систематике растений и грибов: учеб. пособие для студ. высш. учеб. заведений / А.Г.Еленевский, М.П.Соловьева, Н.М.Ключникова и др.; Под ред. А.Г.Еленевского. — М.: Академия, 2004. — 160 с.

Степанян, Е.Н. Лабораторные занятия по зоологии с основами экологии: Учеб. пособие для студ. высш. пед учеб. заведений. / Е.Н.Степанян, Е.М. Алексахина. — М.: Академия, 2001. — 120 с.

Шарова, И.Х. Зоология беспозвоночных: Учеб. для студ. высш. учеб. заведений / И.Х. Шарова. — М.: Гуманит. изд. центр ВЛАДОС, 2002. — 592с.

Хржановский, В.Г. Практикум по курсу общей ботаники: Учеб. пособие. / В.Г.Хржановский, С.Ф Пономарева. — М.: Высш. школа, 1979. — 422 с.

Литература для учащихся и учебная литература

Гуриков В.А. Становление прикладной оптики / В.А.Гуриков. — М.: Наука, 1983 — 188с.

Мазур, О. Ч. Невидимый мир / О. Ч. Мазур., 2015. — 96с.

Мазур, О.Ч. Удивительный микроскоп. Иллюстрированный путеводитель / О.Ч.Мазур. — М.Эксмо, 2018 — 96с.

Толанский, С. Революция в оптике / С.Толанский. — М.: Мир, 1971- 223 с.

Литература для родителей:

Мазур, О. Ч. Невидимый мир / О. Ч. Мазур. 2015. -96с.

Толанский, С. Революция в оптике / С.Толанский. — М.: Мир, 1971­223 с.

Информационно-коммуникативные технологии познания окружающего мира в начальной школе (Цифровые средства наблюдения и фиксации в курсе «Окружающий мир») / авт.-сост. Т. Р. Кулиджи, В. В. Хрущева. — Новосибирск:, 2013.​​​​​​​

Мобильная лаборатория естествоиспытателя

ЛАБОРАТОРИЯ МИКРОСКОПИРОВАНИЯ

1. Приготовление микропрепаратов

Далеко не всё, что есть под рукой, имеет смысл класть на предметный столик и пытаться рассмотреть в окуляр микроскопа. Например, непрозрачные объекты (палец, монета) рассмотреть совсем не удастся, да и для рассматривания вполне достаточно сильной лупы.

Обычно для микроскопирования используют специально приготовленные микропрепараты. При приготовлении микропрепарата берется предметное стекло (размер 25 × 75 мм), на которое помещается рассматриваемый объект; обычно для лучшей сохранности и удобства использования объект накрывается сверху тонким покровным стеклом (размер 18 × 18 мм).

По способу приготовления и времени хранения различают:

• постоянные препараты – объект помещен в прозрачную твердеющую среду (обычно канадский бальзам) и накрыт покровным стеклом; такие препараты могут храниться годами и десятилетиями, однако их приготовление весьма трудоемко (объект должен быть тщательно подготовлен: обезвожен, окрашен и др.);
• временные препараты – объект помещен в жидкую среду (вода, физиологический раствор, глицерин-желатин и др.), такие препараты годны для использования в течение нескольких часов, однако с ними можно проводить опыты (например, заменять воду солевым раствором определенной концентрации, добавлять краситель и др.).

Постоянный препарат

В таблице представлены типы препаратов в зависимости от характера исследуемого объекта.

№	Тип	Описание	Постоянный/ временный	Пример
1	Тотальный препарат	Целый организм или его небольшие части (конечности, ротовой аппарат). Обычно требуют обработки (осветления)	Постоянный, временный
2	Срез	Объект заливается в пластичный материал (парафин, акрил) и после его затвердевания разрезается на тонкие пластины с помощью микротома (приспособления для получения тонких срезов)	Обычно постоянный
3	Мазок	Токослойный препарат без покровного стекла (обычно препарат крови): капля с помощью полированного стекла размазывается по поверхности предметного стекла тонким слоем, высушивается	Временный, реже постоянный
4	Шлиф	Тонкая (толщина 0,03-0,02 мм) пластинка горной породы или другого твердого образца (кости, окаменелости), приклеенная к покровному стеклу	Постоянный

В некоторых случаях временный препарат можно рассматривать непосредственно, не накрывая покровным стеклом. Такой препарат будет практически невозможно рассмотреть резко сразу весь – какая-то часть его будет в фокусе, а остальное – нет. Но если рассматривать такой препарат с малым увеличением микроскопа, можно рассмотреть некоторые интересные объекты.

Микропрепарат клеток мякоти арбуза (без покровного стекла)

Так же в виде открытых временных препаратов можно вырастить кристаллы разных солей (ацетилсалициловой кислоты, или аспирина; медного купороса, или сульфата меди; красной кровяной соли, или гексацианоферрата калия). На предварительно очищенное от пыли и отпечатков пальцев наносится несколько капель водного или спиртового раствора соли (для лучшего качества кристаллов раствор предварительно лучше профильтровать, так как это позволит уменьшить количество точек кристаллизации и получить более крупные и аккуратные кристаллы). Каплям дают высохнуть (можно провести эксперимент с одним из стекол, нагрев его, с целью ускорения выпаривания, а другому дать растворителю испариться, а кристаллам – выпасть самостоятельно). Также можно рассматривать полуготовый микропрепарат на этапе процесса кристаллизации: можно увидеть, как кристалл увеличивается прямо на глазах или как вокруг зародыша твердого вещества возникает течение жидкости из-за разницы концентраций ионов.

Простой и эффектный способ изготовления микропрепаратов без срезов, позволяющий рассмотреть рельеф поверхности изучаемого объекта (например, листа растения, покровов тела насекомого) – метод реплик. При этом берется объект (например, лист растения), и на него наносится тонкий слой прозрачного лака для ногтей (достаточно небольшого пятна 5 × 10 мм). После того, как лак высохнет (примерно через 5-7 минут), к лаковому пятну приклеивается кусок липкой ленты; так реплика отделяется, после чего ее кладут на предметное стекло и рассматривают под микроскопом. 

Реплика поверхности листа, видны устьичные клетки и жилка (микроскоп Микромед С-13, малое увеличение).

1.1. Приготовление временного препарата

Техника приготовления временного препарата хорошо известна по школьным опытам с кожицей лука. Кладем предметное стекло на стол (препараты всегда держат за боковые грани предметного стекла). В центр стекла помещаем 1-2 капли воды и объект исследования Берем покровное стекло за боковые грани и осторожно накрываем им сверху каплю с объектом. Правильнее упереть покровное  стекло одной из граней в предметное и медленно уменьшать угол между стеклами так, чтобы накрыть каплю с объектом. Это уменьшает возможность появления пузырьков воздуха.

Накрывание объекта покровным стеклом

1.2. Приготовление мазка крови

Мазки крови для исследования крови готовят следующим образом.

Шаг	Описание	Фотография
1	Поместите небольшую каплю крови на лежащее на горизонтальной поверхности предметное стекло, с помощью стеклянной капиллярной пипетки (или непосредственно из места укола пальца перенесите выступившую каплю крови на конец стерильного предметного стекла, стараясь не касаться стекла проколотым участком кожи).
2	Чистое шлифованное стекло помещается коротким ребром под углом 45° к предметному стеклу у края капли. Ждем, пока кровь расплывется под ребром стекла.
3	Как только кровь растеклась по ребру, быстрым движением от капли проводим по предметному стеклу. Не следует сильно нажимать на стекло, так как при этом могут разрушиться форменные элементы крови.
4	После приготовления мазок быстро сушат на воздухе до исчезновения влажного блеска, подержав его над абажуром лампы или помахав им в воздухе. Хорошо сделанный мазок тонок, имеет желтоватый цвет и оканчивается «метелочкой». Густо-розовые и красноватые мазки непригодны, так как они слишком толстые и клеточные элементы различить будет сложно.

Изображения и описание с сайта microtome.info/documents/micropreparaty.html.

2. Некоторые особенности микроскопирования

Использование микроскопов на малом и большом увеличении достаточно хорошо известно по школьным опытам и не требует особо сложных навыков.

2.1. Имерсионный объектив

Если в ващем распоряжении имеется микроскоп с иммерсионным объективом (он маркируется 100× МИ и черным кольцом, и имеет подвижную часть объектива, обращаемую к микропрепарату), то у вас есть возможность рассмотреть объекты с большим увеличением (однако для этого имеет смысл использовать мазки).

Порядок работы с объективом масляной иммерсии следующий.

1. Выведите из хода лучей сухой объектив (поверните барабан объективов так, чтобы ни один объектив не был обращен к препарату).
2. На препарат нанесите одну каплю иммерсионного (кедрового) масла; желательно иммерсионным маслом также немного смазать линзу этого объектива.
3. Повернув барабан объективов, введите иммерсионный объектив в ход лучей (до щелчка фиксации).
4. Опустите объектив до соприкосновения с каплей иммерсионного масла, затем, наблюдая в микроскоп, с помощью винтов грубой и точной фокусировки, произведите настройку на резкость.

При работе с иммерсионным объективом потребуется максимальная освещенность. После окончания исследования иммерсионный объектив нужно протереть мягкой оптической тряпочкой или батистовой, слегка смоченной специальной жидкостью для чистки оптики. Важно: любые другие виды объективов протирать нельзя!

Применение вместо кедрового масла других масляных жидкостей не рекомендуется, т. к., если показатель преломления используемой иммерсии (например, вазелинового масла с показателем 1,48162) отличается от показателя преломления кедрового масла (показатель 1,515), возможно снижение контраста, нечеткость изображения, уменьшение разрешающей способности.

2.2. Фотографии в косом освещении и темном поле

Для объемных препаратов (тотальные препараты насекомых, водорослей и др.) интересно использовать освещение, отличное от обычного просвечивающего. Для регулировки освещения в микроскопах используется конденсор – поворотное устройство с отверстиями разного диаметра и расположения. Используя специальные варианты конденсора, можно изменить характер освещения препарата, подчеркнув объем рассматриваемого объекта.

В таблице сравнивается работа с освещением разных типов.

№	Тип освещения	Способ создания	Вид зрачка объектива с вынутым окуляром	Пример
1	Обычное (просвечи-вающее)	Свет проходит через поле зрения равномерно.
2	Косое	Свет проходит через препарат под углом, так как конденсор закрывает часть отверстия. Этого эффекта можно добиться притеняя рукой или другой преградой  часть светового потока перед зеркалом микроскопа
3	Темное поле	Специальный конденсор закрывает центральную часть поля зрения, так что свет проходит с краев. При определенной тренировке такого эффекта также можно добиться, частично притеняя часть светового потока перед зеркалом микроскопа

3. Съемка

Фотографирование настроенного на резкость микропрепарата с помощью камеры планшета особых трудностей не представляет, так как мы непосредственно контролируем то, что именно будем снимать. Настройки камеры планшета также зависят от типа устройства, которое вы используете; так как камера планшета обычно имеет достаточно большую глубину резкости, даже при настройках камеры по умолчанию можно получить вполне качественное изображение.

4. Интернет-ресурсы

Лекция по микроскопированию для студентов:

•  fep.tti.sfedu.ru/russian/ehamt/learn/nano-biology/lek_2.pdf

Простые опыты в домашних экспериментах:

• edu.altami.ru/research-index/

Сайты с историческими микроскопами и микропрепаратами:

• www.victorianmicroscopeslides.com/slides.htm,
• steampunker.ru/blog/interior_design/5342.html,
• bibliodyssey.blogspot.com/2008/08/early-microscopes.html,
• marinni.livejournal.com/749561.html.

Книга Роберта Гука (Robert Hooke) о микроскопировании “Micrographia: Some Physiological Descriptions of Minute Bodies Made by Magnifying Glasses with Observations and Inquiries Thereupon”

• www.gutenberg.org/files/15491/15491-h/15491-h.htm.

Описание методики изготовления микроскопа Гука из бумаги: Nektarios Tsagliotis Build your own microscope: following in Robert Hooke’s footsteps (Сделай свой микроскоп: по следам Роберта Гука) // Science in School, Issue 22, p.29-35.

• www.scienceinschool.org/2012/issue22/microscope.

Цель: научить технике работы со световым микроскопом, приготовлению
временных микропрепаратов.

Задачи:

1. Стимулировать стремление к самостоятельной познавательной деятельности.
2. Развивать умение наблюдать, сравнивать.
3. Продолжить воспитание бережного отношения к оборудованию.

Оборудование:

• микроскоп, микропрепарат, предметное стекло;
• покровное стекло, стакан с водой, пипетка;
• фильтровальная бумага, мягкая ткань, газета, ножницы.

Ход урока

Приложение

Световая микроскопия – один из основных методов изучения биологических
объектов. Навык изготовления временных препаратов необходим для изучения ряда
разделов по цитологии, микробиологии, физиологии.

В медицинской практике правильная диагностика некоторых заболеваний возможна
только при микроскопическом изучении объекта.

Микроскоп – это оптический прибор, позволяющий получить обратное
изображение изучаемого объекта и рассмотреть мелкие детали его строения, размеры
которых лежат за пределами разрешающей способности глаза.

Невозможно точно определить, кто изобрёл микроскоп. Считается, что
голландский мастер очков Ханс Янссен и его сын Захария Янссен изобрели первый
микроскоп в 1590, но это было заявление самого Захария Янссена в середине XVII
века. Дата, конечно, не точна, так как оказалось, что Захария родился около 1590
г. Другим претендентом на звание изобретателя микроскопа был Галилео Галилей. Он
разработал «occhiolino» («оккиолино»), или составной микроскоп с выпуклой и
вогнутой линзами в 1609 г.

Антони Ван Левенгук (1632-1723) считается первым, кто сумел привлечь к
микроскопу внимание биологов. Изготовленные вручную, микроскопы Ван Левенгука
представляли собой очень небольшие изделия с одной очень сильной линзой. Они
были неудобны в использовании, однако позволяли очень детально рассматривать
изображения лишь из-за того, что не перенимали недостатков составного микроскопа
(несколько линз такого микроскопа удваивали дефекты изображения). Понадобилось
около 150 лет развития оптики, чтобы составной микроскоп смог давать такое же
качество изображения, как простые микроскопы Левенгука. Так что, хотя Антон Ван
Левенгук был великим мастером микроскопа, он не был его изобретателем вопреки
широко распространённому мнению.

В микроскопе выделяют три системы: оптическую, механическую и световую.

Основные части микроскопа:

1. Механическая (основание, штатив, предметный столик, тубус, винты).
2. Оптическая (окуляры, объектив).
3. Осветительная (зеркало).

1 – основание (штатив);
2 – микрометрический винт;
3 – макрометрический винт;
4 – винты, перемещающие столик;
5 – предметный столик;
6 – тубусодержатель;
7 – окуляр;
8 – тубус;
9 – револьвер;
10 – объективы;
11 – отверстие предметного столика;
12 – конденсор;
13 – диафрагма;
14 – винт конденсора;
15 – зеркало.

Задание! Используя схему строения микроскопа, найдите основные части
выданного вам микроскопа.

Штатив закреплен на массивном основании, которое придает микроскопу
устойчивость. Предметный столик укреплен на штативе. На него помещают
микропрепараты, которые удерживаются двумя зажимами для фиксации. Через круглое
отверстие в центре столика обеспечивается освещение объекта. Винты для настройки
фокуса находятся на боковых поверхностях штатива. Макрометрический винт
позволяет поднять или опустить тубус для приблизительной настройки прибора на
фокус при работе с малым увеличением. Микрометрический винт используется для
точной настройки прибора на фокус при работе с большим увеличением.

Чтобы узнать увеличение микроскопа, нужно увеличение объектива умножить на
увеличение окуляра.

Например:

Расчет увеличения микроскопа.

Задание! Определите увеличение вашего микроскопа.

Правила работы с микроскопом и техника безопасности.
Т.Б. при проведении лабораторной работы.

Выполняйте все действия вместе с преподавателем, согласно его инструкциям.

Запомните! Микроскоп следует правой рукой брать за штатив, а левой –
поддерживать основание! Работать с микроскопом следует сидя.

1. Установите микроскоп. Штатив должен быть обращен к вам, а зеркало –
   напротив света. Необходимо держать микроскоп в вертикальном положении, чтобы
   не выпал окуляр. Ставить микроскоп нужно ручкой штатива к себе на
   расстоянии10 см от края стола. Во время работы его не сдвигать.
2. Смотрите в окуляр и вращайте зеркало до тех пор, пока поле зрения не
   будет освещено ярко и равномерно.
3. Опустите объектив над столиком на высоту примерно 0,5см с помощью винта
   (винт нужно вращать на себя).
4. Положите на предметный столик микропрепарат покровным стеклом вверх.
   Передвигая препарат рукой, найти нужное место, расположить его в центре поля
   зрения микроскопа.
   Внимание! Смотрите на микроскоп сбоку и опускайте тубус с помощью винта на
   расстояние приблизительно 2 мм от объектива до препарата.
5. Смотрите в окуляр и (медленно!) поднимайте тубус (вращайте винт на
   себя!) до тех пор, пока не увидите четкого изображения объекта.
6. По окончании работы приведите микроскоп в нерабочее состояние.

Первые наблюдения в микроскоп производились непосредственно над каким-либо
объектом (птичье перо, снежинки, кристаллы и т. п.). Для удобства наблюдения в
проходящем свете, препарат стали размещать на стеклянной пластинке (предметное
стекло). Иногда эту пластинку делали с лункой – для размещения объекта в капле
воды. Позже препарат стали закреплять тонким покровным стеклом, что позволило
создавать коллекции образцов, например, гистологические коллекции.

Техника приготовления временного препарата.

1 – пипетка;
2 – капля воды;
3 – предметное стекло;
4 – пинцет;
5 – объект;
6 – покровное стекло;
7 – готовый микропрепарат.

1. Возьмите предметное стекло из контейнера, держа его за боковые грани.
2. Нанесите пипеткой 1–2 капли воды
3. Поместите в центр стекла объект.
4. Возьмите покровное стекло за боковые грани и положите его боковой гранью
   на каплю воды, затем медленно опустите на нее стекло.

Внимание! Между стеклами не должно быть пузырьков воздуха, нельзя покровное
стекло кидать на каплю сверху, его нужно как бы вдвинуть в каплю сбоку.

1. Излишки воды уберите фильтровальной бумагой;
2. Приготовленный микропрепарат поместите на предметный столик и
   рассмотрите сначала при малом, затем при большом увеличении.
3. В том случае, если микропрепарат сделан неаккуратно, между стеклами есть
   пузырьки воздуха, следует повторить действия.

Задание! Приготовление временного препарата.

1. Вырезанную из газеты букву положите в центр чистого предметного стекла.
2. Пипеткой нанесите каплю, воды на кусочек газеты и покройте сверху
   покровным стеклом.
3. Излишки воды удалите фильтровальной бумагой.
4. Положите приготовленный препарат на предметный столик так, чтобы буква
   оказалась над центром отверстия. Прижать стекло зажимами.
5. Пользуясь регулировочным винтом добиться, чтобы буква была четко видна.

Наблюдения.

Задание! Приготовление временного препарата.

А теперь давайте поиграем:

Каждый из вас получает две карточки с вопросом и ответом, которые не подходят
друг к другу. Игру начинает любой , читаете вопрос вслух и ждете ответа. У
которого есть ответ, читает его и предлагает свой вопрос. Итак, до тех пор, пока
не закончатся все карточки. Если ответ дан неверный или вообще не прозвучал,
допустивший ошибку выходит к доске и «реабилитирует» себя, ответив правильно на
два дополнительных вопроса, заданных вами.

Предложенные вопросы для «Цепочки» и ответы.

1. Составной микроскоп изобрел … Галилео Галилей.
2. Что относится к оптической части микроскопа … Окуляр и объективы.
3. Прибор для изучения клеточного строения … Микроскоп.
4. Система увеличительных стекол микроскопа в нижнем конце тубуса …
   Объектив.
5. Стеклянная пластинка, предназначенная для размещения рассматриваемого
   объекта … Предметное стекло.
6. Тонкая стеклянная пластинка для закрепления препарата … Покровное
   стекло.

Ну что ж, наш урок подходит к концу. Давайте посмотрим, кто с каким
настроением работал сегодня на уроке. Если вам было интересно и у вас хорошее
настроение, то на дерево прикрепите зеленый листочек, а если вам было скучно и у
вас плохое настроение – желтый.