Руководство по контролю качества питьевой водой - RukovodstvoRus.ru

ГОСУДАРСТВЕННОЕ САНИТАРНО-ЭПИДЕМИОЛОГИЧЕСКОЕ НОРМИРОВАНИЕ
РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

Утверждаю
Руководитель Федеральной службы
по надзору в сфере защиты
прав потребителей
и благополучия человека,
Главный государственный
санитарный врач
Российской Федерации
А.Ю.ПОПОВА
30 апреля 2020 г.

2.1.4. ПИТЬЕВАЯ ВОДА И ВОДОСНАБЖЕНИЕ НАСЕЛЕННЫХ МЕСТ

ОРГАНИЗАЦИЯ МОНИТОРИНГА ОБЕСПЕЧЕНИЯ НАСЕЛЕНИЯ КАЧЕСТВЕННОЙ
ПИТЬЕВОЙ ВОДОЙ ИЗ СИСТЕМ ЦЕНТРАЛИЗОВАННОГО ВОДОСНАБЖЕНИЯ

МЕТОДИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ
МР 2.1.4.0176-20

1. Разработаны: Федеральное бюджетное учреждение науки «Северо-Западный научный центр гигиены и общественного здоровья» (д.м.н. С.А. Горбанев, д.м.н., профессор К.Б. Фридман, к.м.н. И.О. Мясников, Ю.А. Новикова, А.А. Ковшов, В.Н. Федоров, Н.А. Тихонова); Федеральное бюджетное учреждение науки «Федеральный научный центр гигиены им. Ф.Ф. Эрисмана» Роспотребнадзора (д.м.н., профессор, член-корреспондент РАН О.О. Синицына, д.м.н., профессор Г.М. Трухина, к.м.н. Г.П. Амплеева, О.А. Гильденскиольд); Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (О.Н. Коршунова); Федеральное бюджетное учреждение здравоохранения «Федеральный центр гигиены и эпидемиологии» Роспотребнадзора (к.м.н. В.Ю. Ананьев, к.м.н. Е.А. Кузьмина, Е.С. Митрофанова); Федеральное бюджетное учреждение науки «Федеральный научный центр медико-профилактических технологий управлениями рисками здоровью населения» (академик РАН, д.м.н., профессор Н.В. Зайцева, д.б.н. И.В. Май, д.м.н. С.В. Клейн); Управление Роспотребнадзора по городу Санкт-Петербургу (Н.С. Башкетова); Управление Роспотребнадзора по Ленинградской области (О.А. Историк).

2. Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации А.Ю. Поповой 30 апреля 2020 г.

3. Введены впервые.

1.1. Питьевая вода оказывает значительное влияние на соматическую и инфекционную заболеваемость населения. Принимая во внимание такие ее особенности, как формирование свойств питьевой воды в каждом отдельном источнике централизованной системы холодного водоснабжения (далее — водоисточник), зависимость ее качества от воздействия антропогенной нагрузки на водоисточник, постоянное потребление населением питьевой воды в относительно одинаковых количествах и, следовательно, дозах химических веществ, мониторинг качества питьевой воды предоставляет возможность анализировать и прогнозировать ее качество с целью оценки риска здоровью населения, состояния санитарно-эпидемиологического благополучия населения, принимать меры по его улучшению.

1.2. Методические рекомендации предназначены для органов, осуществляющих федеральный государственный санитарно-эпидемиологический надзор, органов исполнительной власти, органов местного самоуправления, а также для юридических лиц и индивидуальных предпринимателей, осуществляющих эксплуатацию централизованных систем холодного водоснабжения, отдельных объектов таких систем, включая забор, очистку и распределение воды абонентам при работе системы централизованного холодного водоснабжения в штатном режиме.

1.3. Задачами мониторинга качества питьевой воды систем централизованного холодного водоснабжения (далее — питьевой воды) являются:

— оценка состояния санитарно-эпидемиологического благополучия населения в области обеспечения качественной питьевой водой;

— формирование баз данных по качеству питьевой воды для оценки состояния санитарно-эпидемиологического благополучия населения, обеспеченности качественной питьевой водой из систем централизованного холодного водоснабжения, установления причинно-следственных связей между качеством воды и показателями здоровья населения, разработки мероприятий, включая проведение проверок и расследований, и управленческих решений;

— информирование населения, органов государственной власти и местного самоуправления, юридических лиц и индивидуальных предпринимателей о качестве питьевой воды.

1.4. Для ведения мониторинга обеспечения населения качественной питьевой водой следует использовать результаты исследований, полученные в рамках:

— социально-гигиенического мониторинга (далее — СГМ);

— проверок и расследований в отношении организаций, осуществляющих водоснабжение;

— производственного контроля, проводимого юридическими лицами и индивидуальными предпринимателями, эксплуатирующими централизованные системы холодного водоснабжения, включая забор, очистку и распределение питьевой воды абонентам, в т.ч. на отдельных объектах таких систем.

2.1. Принципы организации мониторинга качества
питьевой воды

2.1.1. Мониторингу полежит питьевая вода систем централизованного холодного водоснабжения.

2.1.2. Основные задачи организации и функционирования системы мониторинга качества питьевой воды:

— использование единых и обязательных для всех организаций, участвующих в системе мониторинга, методологических подходов и гигиенических критериев оценки влияния на состояние здоровья факторов среды обитания человека, основанных на современных научных подходах о взаимодействии в системе «питьевая вода — человек»;

— применение взаимосогласованных нормативных и методических документов, обеспечивающих единство методов, способов и показателей, по которым осуществляется сбор, накопление и обработка данных в системе наблюдения и контроля за состоянием здоровья и среды обитания;

— использование результатов мониторинга для выбора эффективных технологий водоподготовки и очистки воды с использованием технологий, разработанных организациями оборонно-промышленного комплекса, и учетом оценки риска здоровью населения;

— открытость результатов мониторинга для широкого круга пользователей, обмен информацией между организациями, участвующими в системе.

2.2. Контроль качества и безопасности воды в рамках СГМ

2.2.1. Организация системы точек контроля в рамках СГМ

2.2.1.1. Качество питьевой воды централизованных систем холодного водоснабжения формируется на различных этапах: забор воды из водоисточника, технологические этапы подготовки, транспортировка, распределительная сеть.

2.2.1.2. Отбор проб воды должен осуществляться таким образом, чтобы в конечном итоге была обеспечена возможность оценки качества питьевой воды по всем выделенным территориям (зонам) для изучения влияния на здоровье населения.

2.2.1.3. К точкам обязательного контроля в системе следует отнести:

— водоисточник — для водозаборных сооружений поверхностных водозаборов — вода на станции 1-го подъема, для подземных — вода из скважины. Для оценки качества питьевой воды важное значение имеют данные, характеризующие условия, формирующие качество воды источника. Информация о динамике качества воды водоисточника необходима для оценки антропогенного загрязнения воды и/или влияния сезонных факторов, формирующих неблагоприятное качество воды водоисточника, а также оценки эффективности очистки воды в системе холодного водоснабжения в целом с учетом применения наиболее эффективных методов водоподготовки;

— точку перед подачей в распределительную сеть. Информация о качестве воды в данной точке характеризует эффективность проведенных мероприятий по приведению качества воды в соответствие с гигиеническими нормативами, позволяет судить о дополнительных факторах, появляющихся в ходе технологической обработки (хлорирование, озонирование и др.), и является основой для комплексной оценки соответствия качества водопроводной воды требованиям гигиенических нормативов, необходимости проведения дополнительных мероприятий по повышению эффективности водоподготовки;

— точку в распределительной сети, включая кран потребителя. Информация о качестве питьевой воды в этих точках позволяет оценить возможность изменения ее качества за счет процессов, происходящих в водоводах наружных и внутренних сетей.

2.2.1.4. Выбор точек контроля осуществляется по ходу движения воды от станций водоподготовки до потребителя по схеме:

— подъем станции водоподготовки (1, 2 подъем);

— водовод;

— водопроводная наружная распределительная сеть;

— водопроводные внутренние сети (кран потребителя).

2.2.1.5. Общие принципы выбора точек контроля в распределительной сети:

— точки отбора проб должны обеспечивать хорошее географическое представление системы водоснабжения, быть равномерно распределены по системе водоснабжения и позволять ретроспективно сравнивать качество воды на отдельных участках системы;

— выделяются территории, которые обеспечиваются из одного водозаборного сооружения (на основании схемы водопроводной сети по данным водоснабжающей организации), схема разводящей сети уточняется с учетом последних проведенных ремонтов и реконструкций; внутри территорий выделяются участки, где используются однотипные материалы и покрытия, а сети эксплуатируются одной и той же организацией; на каждом выделенном участке организуется не менее одной точки для отбора проб воды;

— точки отбора проб зависят от того, в каком месте системы ожидается попадание загрязняющего вещества, и вероятности изменения концентрации или характера параметра в системе водоснабжения: после насосных станций и водоразборных колонок (характеристики технического состояния насосных станций, водоразборных колонок), точки на возвышенных и тупиковых участках водопроводной сети, зоны с наличием частых аварий, удаленностью от станции водоподготовки; выделяются участки со сроком эксплуатации сетей, превышающим 20 лет, с учетом материалов, из которых выполнены водоводы;

— мониторингом должно быть охвачено наибольшее количество населения, снабжаемого водой из конкретной сети; численность водоснабжаемого контингента уточняется с учетом последних статистических данных, определения числа проживающих в зонах влияния станций водоподготовки, распределения плотности населения в этих зонах, а также в зонах взаимного влияния нескольких станций водоподготовки;

— показатель первичной заболеваемости населения, ассоциированной с качеством питьевой воды на территории, выше среднерайонного уровня;

— точки контроля организуются в зонах населенного пункта, для которых имеются данные о наиболее высоких значениях показателей качества питьевой воды при наибольшей численности населения.

2.2.1.6. В зависимости от численности водоснабжаемого населения количество точек в распределительной сети должно быть:

1) в сельских поселениях:

— до 5000 жителей — не менее 1 точки;

— свыше 5000 жителей — не менее 2 точек;

2) в городских поселениях:

— до 10000 жителей — не менее 4 точек;

— от 10000 до 50000 жителей — не менее 6 точек;

— от 50000 до 100000 жителей — не менее 12 точек;

— от 100000 до 250000 жителей — не менее 16 точек;

— от 250000 до 1000000 жителей — не менее 30 точек;

— от 1000000 до 3000000 жителей — не менее 50 точек;

— свыше 3000000 жителей — не менее 80 точек.

2.2.2. Показатели качества питьевой воды, контролируемые
в рамках СГМ

2.2.2.1. Выбор мониторируемых (контролируемых) показателей качества питьевой воды является важной задачей, определяющей эффективность проводимого мониторинга, и предусматривает, что:

— показатели должны отражать безопасность в эпидемическом и радиационном отношении, безвредность химического состава питьевой воды, подтверждать приемлемость для потребителей ее органолептических свойств (благоприятность), то есть должны включать органолептические, санитарно-химические, микробиологические, паразитологические показатели и показатели радиационной безопасности;

— перечень показателей должен включать, кроме унифицированного минимального обязательного перечня показателей (приложение 1 к настоящим МР), показатели, отражающие качество воды водоисточника конкретной централизованной системы холодного водоснабжения, региональные особенности, климатические и гидрогеологические условия;

— лабораторные исследования должны проводиться лабораториями, аккредитованными в установленном порядке в национальной системе аккредитации.

2.2.2.2. Минимальный обязательный перечень показателей для всех территорий позволяет проводить сравнительный анализ и делать предположения в отношении влияния водного фактора на здоровье населения.

В рамках мониторинга исследования качества воды водоисточников следует проводить в зависимости от типа водоисточника согласно минимальному обязательному перечню показателей водоисточников (пункт 1 приложения 1 к настоящим МР). Минимальный обязательный перечень показателей должен дополняться показателями, характеризующими условия формирования качества воды конкретного водоисточника. Для комплексной оценки водоисточника рекомендуется проводить 1 раз в 5 лет лабораторные исследования по расширенному перечню показателей и расчеты индивидуального риска здоровью населения. По результатам исследований определяют приоритетные показатели — показатели, уровни которых превышают гигиенические нормативы и/или обуславливают значения канцерогенного/неканцерогенного риска для здоровья выше приемлемых.

В воде перед подачей в распределительную сеть, кроме показателей минимального обязательного перечня (пункт 2 приложения 1 к настоящим МР), и показателей, характеризующих технологию водоподготовки (остаточные количества реагентов, вторичное загрязнение воды в ходе водоподготовки — пункт 3 приложения 1 к настоящим МР), целесообразно контролировать показатели, которые по результатам исследований воды водоисточника выделены как приоритетные.

В воде распределительной сети, кроме показателей минимального обязательного перечня (пункт 4 приложения 1 к настоящим МР) и дополнительного (обязательного) перечня в зависимости от способа водоподготовки (пункт 5 приложения 1 к настоящим МР), целесообразно контролировать показатели, выделенные как приоритетные.

2.2.2.3. В случае превышения допустимых уровней загрязнения одного или более основных бактериологических показателей, а также по эпидемическим показаниям в программу мониторинга, в зависимости от типа точки контроля, следует включать показатели дополнительного перечня (пункт 6 приложения 1 к настоящим МР).

2.2.3. Кратность отбора проб в рамках СГМ

2.2.3.1. В определении кратности отбора проб следует придерживаться принципа скорости возможного изменения качества воды, например, показатели качества воды поверхностного водоисточника характеризуют сезонные изменения, связанные с весенним половодьем и паводками, метеоусловиями и др., качество воды подземных водоисточников постоянно в течение многих лет. Отбор проб воды поверхностных водоисточников следует проводить не реже 1 раза в месяц, подземных — не реже 1 раза в сезон.

2.2.3.2. При отборе проб воды перед подачей в распределительную сеть устанавливается кратность не реже 1 раза в месяц (одновременно с отбором пробы из водоисточника), что позволит оценить эффективность водоподготовки.

2.2.3.3. Показатели, характеризующие физиологическую полноценность (магний, кальций, общая минерализация и т.п.), и часть показателей безопасности рекомендуется определять 1 раз в год.

2.2.3.4. Кратность отбора проб в точке распределительной сети устанавливается не реже 1 раза в месяц, так как в течение короткого периода в силу изменения гидравлического режима, связанного с неравномерностью водотока, образования биопленок наблюдается динамика таких показателей, как мутность, содержание железа, а, следовательно, органолептических и микробиологических показателей.

2.2.3.5. Время отбора проб рекомендуется в часы с максимальным разбором воды из сети.

2.3. Производственный контроль качества и безопасности
питьевой воды

2.3.1. Производственный контроль обеспечивается индивидуальным предпринимателем или юридическим лицом, осуществляющим эксплуатацию системы водоснабжения и/или обеспечивающим население питьевой водой, в том числе в многоквартирных жилых домах, по согласованной и утвержденной в установленном порядке программе производственного контроля качества и безопасности воды.

2.3.2. Индивидуальный предприниматель или юридическое лицо, осуществляющие эксплуатацию системы водоснабжения и/или обеспечивающие население питьевой водой, в том числе в многоквартирных жилых домах, в соответствии с программой производственного контроля должны постоянно контролировать качество и безопасность воды в местах водозабора, перед поступлением в распределительную сеть, а также в точках водоразбора наружной и внутренней распределительных сетей (далее — места водопользования).

2.3.3. Данные федерального государственного санитарно-эпидемиологического надзора в области водоснабжения подлежат использованию при составлении и корректировке программы производственного контроля качества питьевой воды, подаваемой системой централизованного холодного водоснабжения, с целью переноса больших объемов контроля в зоны повышенного риска заболеваемости населения болезнями, ассоциированными с качеством питьевой воды.

2.3.4. На водопроводных сооружениях, когда эксплуатация системы водоснабжения осуществляется несколькими хозяйствующими субъектами (водоподготовка, хранение и распределение воды), качество воды на соответствие гигиеническим нормативам должно контролироваться также на границах их зон эксплуатационной ответственности.

2.3.5. Количество и периодичность отбора проб воды для лабораторных исследований в местах водозабора устанавливают с учетом требований, указанных в таблице 1.

Таблица 1

Количество и периодичность отбора проб питьевой воды
для лабораторных исследований в местах водозабора

Виды показателей	Количество проб в течение одного года, не менее
для подземных источников	для поверхностных источников
Микробиологические	4 (по кварталам года с учетом сезона)	12 (ежемесячно)
Паразитологические	не проводят <*>	12 (ежемесячно)
Органолептические	4 (по кварталам года с учетом сезона)	12 (ежемесячно)
Обобщенные	4 (по кварталам года с учетом сезона)	12 (ежемесячно)
Неорганические и органические вещества	1	4 (по кварталам года с учетом сезона)
Радиологические	1	1

———————————

Примечание: <*> — определение проводят в системах водоснабжения из подземных источников, имеющих гидравлическую связь с поверхностными водами, а также из незащищенных подземных водоносных горизонтов.

2.3.6. Виды определяемых показателей и количество исследуемых проб питьевой воды перед ее поступлением в распределительную сеть (в резервуарах чистой воды) устанавливают с учетом требований, указанных в таблице 2.

Таблица 2

Виды определяемых показателей и количество исследуемых
проб питьевой воды перед ее поступлением
в распределительную сеть

Виды показателей	Количество проб в течение одного года, не менее
для подземных источников	для поверхностных источников
Численность населения, обеспечиваемого водой из данной системы водоснабжения, тыс. чел.
до 20	20 — 100	свыше 100	до 100	свыше 100
Микробиологические	50 (1)	150 (2)	365 (3)	365 (3)	365 (3)
Паразитологические	Не проводятся <3>	12 (6)	12 (6)
Органолептические	50 (1)	150 (2)	365 (3)	365 (3)	365 (3)
Обобщенные показатели	4 (4)	6 (5)	12 (6)	12 (6)	24 (7)
Неорганические и органические вещества	1	1	1	4 (4)	12 (6)
Показатели, связанные с технологией водоподготовки	Остаточный хлор, остаточный озон — не реже 1 раза в час, остальные регенты — не реже 1 раза в смену
Радиологические	1	1	1	1	1

Примечания:

1. Принимается следующая периодичность отбора проб воды:

1) — еженедельно;

2) — 3 раза в неделю;

3) — ежедневно;

4) — 1 раз в сезон года;

5) — 1 раз в два месяца;

6) — ежемесячно;

7) — 2 раза в месяц.

2. При отсутствии обеззараживания воды на водопроводе из подземных источников, обеспечивающем водой население до 20 тыс. человек, отбор проб для исследований по микробиологическим и органолептическим показателям проводится не реже одного раза в месяц.

3. Определение паразитологических показателей проводят в системах водоснабжения из поверхностных источников и подземных источников, имеющих гидравлическую связь с поверхностными водами, а также в системах, питающихся из незащищенных подземных водоносных горизонтов.

4. На период паводков и чрезвычайных ситуаций должен устанавливаться усиленный режим контроля качества питьевой воды по согласованию с территориальным органом федерального органа исполнительной власти, осуществляющего федеральный государственный санитарно-эпидемиологический надзор.

2.3.7. Для оценки влияния на здоровье населения количество проб воды в разводящей сети централизованного холодного водоснабжения должно быть не менее 12 в год (ежемесячно) в каждой точке контроля, независимо от типа источника водоснабжения (поверхностный, подземный), включая результаты производственного контроля и федерального государственного санитарно-эпидемиологического надзора.

2.3.8. Выбор показателей химического состава питьевой воды, подлежащих регулярному производственному контролю, проводится для каждой системы водоснабжения на основании оценки результатов расширенных исследований химического состава воды централизованных источников холодного водоснабжения, а также технологии очистки и водоподготовки.

2.3.9. Выбор показателей для проведения расширенных исследований, характеризующих химический состав питьевой воды, проводится организацией, осуществляющей эксплуатацию системы водоснабжения, в два этапа.

2.3.10. На первом этапе организация, осуществляющая эксплуатацию системы водоснабжения, проводит ретроспективный анализ многолетней и сезонной динамики показателей, характеризующих источник централизованного холодного водоснабжения за период не менее трех последних лет по следующим материалам:

— государственной статистической отчетности предприятий и организаций, а также иных официальных данных о составе и объемах сточных вод, поступающих в источники водоснабжения выше места водозабора в пределах их водосборной территории (для поверхностных источников водоснабжения);

— органов охраны природных ресурсов, включая недра, водные объекты, в сфере гидрометеорологии, предприятий и организаций о качестве поверхностных, подземных вод по результатам осуществляемого ими мониторинга качества вод и производственного контроля;

— органов управления и организаций сельского хозяйства об ассортименте и валовом объеме пестицидов и агрохимикатов, применяемых на территории водосбора (для поверхностного источника) и в пределах зоны санитарной охраны (для подземного источника).

2.3.11. На основании проведенного анализа составляется перечень веществ, характеризующих техногенное загрязнение воды конкретного источника водоснабжения и имеющих гигиенические нормативы в соответствии с действующими нормативными документами.

2.3.12. Перечень выбранных показателей, а также проведенный ретроспективный анализ многолетней и сезонной динамики показателей, характеризующих источник централизованного холодного водоснабжения, оценивается территориальным органом Роспотребнадзора по соответствующему субъекту Российской Федерации.

2.3.13. На втором этапе индивидуальные предприниматели и юридические лица, осуществляющие эксплуатацию системы водоснабжения, организуют проведение расширенных лабораторных исследований воды перед подачей в разводящую сеть централизованного холодного водоснабжения по составленному перечню химических веществ, характеризующих техногенное загрязнение, исходя из степени санитарно-эпидемиологической опасности по показателям:

— превышающим 0,5 ПДК по максимальным значениям в результате проведенного ретроспективного анализа;

— приведенным в санитарных правилах <1>.

———————————

<1> СанПиН 2.1.4.1074-01 «Питьевая вода. Гигиенические требования к качеству воды централизованных систем питьевого водоснабжения. Контроль качества. Гигиенические требования к обеспечению безопасности систем горячего водоснабжения» (далее — СанПиН 2.1.4.1074-01).

2.3.14. При необходимости получения более представительной и достоверной информации о химическом составе воды и динамике концентраций присутствующих в ней веществ количество исследуемых проб воды и их периодичность могут быть увеличены в соответствии с поставленными задачами оценки качества воды источника водоснабжения.

2.3.15. Для систем наружной разводящей сети централизованного холодного водоснабжения расширенные лабораторные исследования включают:

— на входе в систему разводящей сети водоснабжения: перечень показателей, превышающих 0,5 ПДК по максимальным значениям в результате проведенного ретроспективного анализа показателей, приведенных в санитарных правилах <1>;

— в точках разводящей сети: перечень показателей, превышающих 0,5 ПДК по максимальным значениям в результате проведенного ретроспективного анализа показателей, приведенных в санитарных правилах <1>; а также иные показатели, влияющие на качество питьевой воды в процессе транспортировки воды согласно техническим условиям (техническому регламенту и т.п. на материалы, оборудование и реагенты, применяемые при транспортировке воды).

2.3.16. Для систем внутридомовой (внутренней) разводящей сети централизованного холодного водоснабжения расширенные лабораторные исследования включают:

— на входе в систему внутридомовой (внутренней) разводящей сети: перечень показателей, установленный в точках наружной разводящей сети централизованной системы холодного водоснабжения;

— в точках внутридомовой (внутренней) разводящей сети: перечень показателей, установленный в точках наружной разводящей сети централизованной системы холодного водоснабжения, а также перечень показателей, влияющих на качество питьевой воды в процессе ее транспортировки по внутридомовым (внутренним) сетям согласно техническим условиям (техническому регламенту и т.п. на материалы, оборудования и реагенты, применяемые при транспортировке).

2.3.17. Производственный контроль качества питьевой воды в распределительной водопроводной сети проводят по микробиологическим, органолептическим и химическим показателям с частотой, зависящей от количества обслуживаемого населения (таблица 3).

Таблица 3

Количество исследуемых проб питьевой воды
в распределительной водопроводной сети

Количество обслуживаемого населения, тыс. чел.	Количество проб в месяц
до 10	2
10 — 20	10
20 — 50	30
50 — 100	100
более 100	100+1 проба на каждые 5 тыс. чел., свыше 100 тыс. населения

Примечание: в число проб не входят обязательные контрольные пробы после ремонта и иных технических работ на распределительной сети.

2.3.18. Результаты исследований должны использоваться для обоснования вложений средств в программы модернизации системы водоснабжения и определению приоритетных вложений в реализацию технических решений по:

— выбору технологии водоподготовки;

— выбору технологии реконструкции водовода;

— реконструкции существующих сооружений и водоводов;

— капитальному ремонту;

— изменению гидравлических режимов.

2.3.19. Для оценки правильности запитки микрорайона исследования в точках контроля должны осуществляться с привязкой к наружным и внутренним сетям в конкретных жилых домах, кварталах многоэтажной застройки, застройки в местах высокой и низкой зоны населенного пункта.

2.3.20. Данные федерального государственного санитарно-эпидемиологического надзора в области водоснабжения подлежат использованию при составлении и корректировке программы производственного контроля качества питьевой воды, подаваемой системой централизованного холодного водоснабжения, с целью переноса больших объемов контроля в зоны повышенного риска заболеваемости специфическими формами патологии.

2.3.21. Использование для оценки качества питьевой воды результатов производственного контроля возможно при соблюдении следующих условий:

— обеспечение в программах исследований унификации, единства выбора показателей наблюдения;

— обеспечение постоянства режима наблюдения в установленных точках и соблюдение установленной кратности отбора проб воды;

— информативность выбранных точек наблюдения в отношении максимального количества населения, снабжаемого из водопроводов;

— проведение лабораторных исследований аккредитованными в установленном порядке в национальной системе аккредитации лабораториями;

— обеспечение максимального охвата систем водоснабжения.

2.3.22. Результаты производственного лабораторного контроля также являются источником оперативной информации о возможных причинах ухудшения качества воды, что важно для организации проверок и расследований, формирования управленческих решений по обеспечению безопасности питьевого водоснабжения.

Организация, осуществляющая водоснабжение, в течение 3 рабочих дней со дня получения результатов лабораторных исследований и испытаний, свидетельствующих о несоответствии качества воды установленным требованиям, направляет территориальному органу федерального органа исполнительной власти, осуществляющего федеральный государственный санитарно-эпидемиологический надзор, выписку из журнала контроля качества воды (любым способом, позволяющим подтвердить факт и дату получения выписки территориальным органом) <2>:

———————————

<2> Постановление Правительства Российской Федерации от 06.01.2015 N 10 «О порядке осуществления производственного контроля качества и безопасности питьевой воды, горячей воды»

2.3.23. В качестве источника информации при проведении производственного лабораторного контроля качества воды можно использовать результаты измерений приборов оперативного контроля качества в режиме «онлайн», реализующих утвержденные методики и включенные в Государственный реестр средств измерений в установленном порядке.

2.4. Организация федерального государственного
санитарно-эпидемиологического надзора качества
и безопасности питьевой воды в рамках
проверочных мероприятий

2.4.1. При проведении проверок и расследований в отношении индивидуальных предпринимателей или юридических лиц, осуществляющих эксплуатацию системы водоснабжения и/или обеспечивающих население питьевой водой, в том числе в многоквартирных жилых домах, должен проводиться лабораторный контроль качества и безопасности питьевой воды.

2.4.2. Лабораторный контроль качества и безопасности питьевой воды осуществляется в зоне балансовой ответственности индивидуальных предпринимателей или юридических лиц.

2.4.3. При проведении проверок и расследований в отношении юридического лица, являющегося водоснабжающей организацией, лабораторный контроль осуществляется на станции 1 подъема, на выходе с станции водоподготовки, в разводящей сети (если она эксплуатируется организацией, в отношении которой проводится проверка или расследование).

2.4.4. При проведении проверок и расследований в отношении юридического лица, осуществляющего транспортировку питьевой воды, отбор проб проводится в точках разграничения балансовой ответственности юридических лиц.

2.4.5. При проведении проверок и расследований в отношении юридического лица или индивидуального предпринимателя, жилищно-эксплуатационной (управляющей) организации, имеющих на балансе внутридомовые (внутренние) системы водоснабжения, отбор проб проводится на вводе в здание (место разграничения балансовой ответственности) и непосредственно в распределительной сети объекта (жилого дома). В случае отсутствия возможности отбора проб в общедомовых помещениях отбор проб воды осуществляется в жилом помещении по предварительной договоренности жилищно-эксплуатационной (управляющей) организации с собственником жилого помещения.

2.4.6. При отборе проб из водоразборного крана в жилом помещении должны быть отключены какие-либо устройства, имеющиеся в данном жилом помещении и оказывающие влияние на качество питьевой воды.

2.4.7. Отбор проб рекомендуется проводить в часы с максимальным разбором воды из сети.

2.4.8. Перечень показателей для исследования определяется на основании данных СГМ и производственного контроля, сведений о материалах, из которых выполнены водопроводные сети, сроке эксплуатации сетей, применяемых реагентах на станциях водоподготовки.

2.4.9. Количество точек и показателей для контроля качества питьевой воды уточняется исходя из конкретной ситуации с учетом оценки состояния санитарно-эпидемиологического благополучия на объекте и территории, состояния здоровья населения.

Для федерального информационного фонда данных СГМ рекомендуется собирать информацию в соответствии с таблицами (приложение 2 к настоящим МР): об источниках водоснабжения (таблица 2.1.1), водопроводах (таблица 2.1.2), точках контроля (таблица 2.1.3), веществах, рассматриваемых как приоритетные загрязнения питьевой воды централизованной системы холодного водоснабжения (таблица 2.1.4), результатах исследований (таблицы 2.2.1 — 2.2.3), численности населения, обеспеченного качественной питьевой водой из систем централизованного холодного водоснабжения (таблица 2.3).

4.1. Для установления соответствия питьевой воды категории «качественная», определения проблемных аспектов в организации водоснабжения населения, прогнозирования ситуации, установления причинно-следственных связей в системе «питьевая вода-человек» и формирования управленческих решений проводится аналитическая обработка всего массива собранной в рамках мониторинга информации по каждой централизованной системе холодного водоснабжения:

— оперативный анализ результатов лабораторных исследований;

— стратегический анализ — оценка ретроспективных данных о качестве воды, соответствия питьевой воды категории «качественная», определение доли населения, обеспеченного качественной питьевой водой из централизованных систем холодного водоснабжения, проведение сравнительного анализа территорий с различными системами холодного водоснабжения, прогнозирование динамики качества питьевой воды, оценка риска здоровью и влияния качества питьевой воды на здоровье населения с применением геоинформационных систем.

4.2. Методические подходы к аналитической обработке данных мониторинга качества питьевой воды приведены в приложении 3 к настоящим МР.

4.3. Результаты мониторинга качества питьевой воды используют для оценки эффективности существующей схемы водоподготовки, выбора эффективных технологий водоподготовки и очистки воды с использованием «Справочника перспективных технологий водоподготовки и очистки воды с использованием технологий, разработанных организациями оборонно-промышленного комплекса и учетом оценки риска здоровью населения, эффективности мероприятий по повышению качества питьевой воды».

4.4. В зависимости от результатов мониторинга качества питьевой воды возможен следующий алгоритм действий:

1). Отсутствие необходимости проведения каких-либо мероприятий по повышению качества питьевой воды и снижению риска здоровью населения. Уровни показателей качества питьевой воды соответствуют гигиеническим нормативам, значения канцерогенного и хронического неканцерогенного риска для здоровья населения (с учетом всех возрастных групп) не превышают приемлемых значений в соответствии с руководством <3>:

———————————

<3> Р 2.1.10.1920-04 «Руководство по оценке риска для здоровья населения при воздействии химических веществ, загрязняющих окружающую среду» (далее — Р 2.1.10.1920-04).

— для канцерогенного риска — не выше 1 x 10-5;

— для хронического неканцерогенного риска (коэффициент опасности от воздействия отдельных загрязнителей, HQ) — не более 1,0.

2). Настороженность в отношении наиболее уязвимых групп населения (дети).

Показатели качества питьевой воды централизованных систем холодного водоснабжения соответствуют гигиеническим нормативам, величины риска соответствуют приемлемым значениям для населения в целом, но не соответствуют приемлемым значениям для уязвимых групп (дети). Следует рассмотреть возможность использования альтернативных источников водоснабжения, а также ввести динамическое наблюдение за состоянием здоровья уязвимых групп населения. В случае, если принятие управленческих решений в отношении неорганизованных уязвимых групп населения затруднено, необходимо их проинформировать о возможных рисках и мерах по их снижению. Для остальных групп населения проведение мероприятий не требуется.

3). Реализация сокращенного объема мероприятий.

Величины риска здоровью не превышают приемлемые значения для канцерогенного и хронического неканцерогенного риска для здоровья населения в целом <4>, но имеется превышение уровней исследуемых показателей качества питьевой воды гигиенических нормативов не более чем на величину ошибки метода определения. Следует проинформировать население о способах снижения рисков нарушений здоровья (например, использование бытовых фильтров по очистке воды, кипячение, контроль за состоянием своего здоровья и т.п.). Для организованных групп населения для питьевых целей и приготовления пищи возможно применять упакованную питьевую воду или привозную воду. Необходимо проведение мероприятий, направленных на повышение качества питьевой воды (например, совершенствование технологий водоочистки, замена водоводов).

———————————

<4> Р 2.1.10.1920-04.

4). Реализация расширенного объема мероприятий.

Значения канцерогенного риска и/или хронического неканцерогенного риска нарушений здоровья населения (коэффициента опасности от воздействия отдельных загрязнителей, HQ) превышают приемлемые значения <4>. Фактические уровни показателей качества питьевой воды превышают гигиенические нормативы более чем на величину ошибки метода определения. В дополнение к сокращенному объему мероприятий следует предусмотреть реализацию в приоритетном порядке мер, способных радикально улучшить качество питьевой воды (модернизация систем водоподготовки, реконструкция водоводов и т.д.). В отдельных случаях (например, неприемлемый риск в связи с воздействием веществ 1 или 2 класса опасности) может быть поставлен вопрос о приостановлении эксплуатации водоисточника.

5). Прекращение или ограничение водоснабжения.

Уровни санитарно-химических и микробиологических показателей превышают критерии существенного ухудшения качества питьевой воды, что может быть причиной высокого риска развития острых заболеваний (включая отравления, инфекционные и паразитарные болезни), в том числе со смертельным исходом и массовым распространением заболеваний среди населения. Имеется высокая степень микробного риска <5>, коэффициент опасности для острых экспозиций (AHQ) выше 1,0. В этом случае проводятся мероприятия в соответствии с пунктами 13, 14 приказа Роспотребнадзора от 28.12.2012 N 1204 «Об утверждении Критериев существенного ухудшения качества питьевой воды и горячей воды, показателей качества питьевой воды, характеризующих ее безопасность, по которым осуществляется производственный контроль качества питьевой воды, горячей воды и требований к частоте отбора проб воды».

———————————

<5> МР 2.1.10.0031-11 «Комплексная оценка риска возникновения бактериальных кишечных инфекций, передаваемых водным путем».

4.5. Примеры формирования стандартных управленческих решений приведены в приложении 4 к настоящим МР.

1. Минимальный обязательный перечень показателей,
контролируемых в воде водоисточников

1.1. Водоисточник поверхностный

Кратность отбора — 1 раз в месяц

Бактериологические	Общие колиформные бактерии
	Термотолерантные колиформные бактерии
	Колифаги
Паразитологические	Цисты и ооцисты патогенных простейших, яйца и личинки гельминтов
Неорганические	Аммиак и аммоний-ион (по азоту)
	Нитраты (по NO3)
	Нитриты (по NO2)
	Кадмий
	Марганец
	Мышьяк
	Свинец
	Сульфаты
	Фосфаты
	Хлориды
	Цинк
Обобщенные	pH
	Нефтепродукты (суммарно)
	БПК5
	ХПК
	ПАВ анионактивные (суммарно)
	Растворенный кислород
Органические	Бенз(а)пирен
	Гидроксибензол
Органолептические	Запах
	Мутность

Кратность отбора — 1 раз в год <6>

———————————

<6> В случае превышения 0,5 ПДК контроль осуществляют ежемесячно до достижения содержания на уровне 0,1 ПДК.

Неорганические	Медь
	Никель
	Ртуть
	Полихлорированные бифенилы
	Хром (суммарный)
Радиологические	Удельная эффективная альфа-радиоактивность
	Удельная эффективная бета-радиоактивность

1.2. Водоисточник подземный

Кратность отбора — 1 раз в сезон

Бактериологические	Общие колиформные бактерии
	Термотолерантные колиформные бактерии
	Общее микробное число
Неорганические	Аммиак и аммоний-ион (по азоту)
	Барий
	Бор
	Железо (включая хлорное железо) по Fe
	Кадмий
	Марганец
	Мышьяк
	Нитраты (по NO3)
	Нитриты (по NO2)
	Свинец
	Стронций
	Сульфаты
	Фтор
	Хлориды
	Цинк
Обобщенные	pH
	Жесткость общая
	Общая минерализация (сухой остаток)
	Окисляемость перманганатная
Органолептические	Запах
	Мутность
	Цветность

Кратность отбора — 1 раз в год <7>

———————————

<7> В случае превышения 0,5 ПДК контроль осуществляют ежемесячно до достижения содержания на уровне 0,1 ПДК.

Неорганические	Кремний (по Si)
	Медь
	Никель
	Ртуть
	Стронций
	Хром
Радиологические	Удельная активность радона (222Rn)
	Удельная эффективная альфа-радиоактивность
	Удельная эффективная бета-радиоактивность

1.3. Водоисточник морской

Кратность отбора — 1 раз в месяц

Бактериологические	Общие колиформные бактерии
	E. coli
	Колифаги
	Энтерококки
	Стафилококк
Неорганические	Аммиак и аммоний-ион (по азоту)
	Кадмий
	Марганец
	Мышьяк
	Нитраты (по NO3)
	Нитриты (по NO2)
	Свинец
	Сульфаты
	Фосфаты
	Цинк
Обобщенные	pH
	ХПК
	БПК5
	Нефтепродукты (суммарно)
Органические	Гидроксибензол
	Бенз(а)пирен
Органолептические	Запах
	Прозрачность

Кратность отбора — 1 раз в год <8>

———————————

<8> В случае превышения 0,5 ПДК контроль осуществляют ежемесячно до достижения содержания на уровне 0,1 ПДК.

Неорганические	Медь
	Никель
	Ртуть
	Хром (суммарный)
Радиологические	Удельная эффективная альфа-радиоактивность
	Удельная эффективная бета-радиоактивность

2. Минимальный обязательный перечень показателей,
контролируемых в воде перед подачей
в распределительную сеть

Кратность отбора — 1 раз в месяц

Бактериологические	Общее микробное число
	Общие колиформные бактерии
	Термотолерантные колиформные бактерии
	Колифаги <9>
Паразитологические	Цисты и ооцисты патогенных простейших, яйца и личинки гельминтов <9>
Неорганические	Аммиак и аммоний-ион (по азоту)
	Нитраты (по NO3)
	Барий
	Бор
	Железо (включая хлорное железо) по Fe
	Кадмий
	Кремний (по Si) <10>
	Марганец
	Мышьяк
	Свинец
	Сульфаты
	Фтор
	Хлориды
	Цинк
Обобщенные	pH
	Жесткость общая
	Общая минерализация (сухой остаток)
	Нефтепродукты (суммарно) <4>
	Окисляемость перманганатная
Органолептические	Запах
	Мутность
	Цветность

———————————

<9> Только для воды централизованных систем водоснабжения из поверхностных источников.

<10> Только для воды централизованных систем водоснабжения из подземных источников.

Кратность отбора — 1 раз в год <11>

———————————

<11> В случае превышения 0,5 ПДК контроль осуществляют ежемесячно до достижения содержания на уровне 0,1 ПДК.

Неорганические	Бром
	Йод
	Магний
	Медь
	Никель
	Ртуть
	Селен
	Хром (общий)

3. Дополнительный (обязательный) перечень химических
показателей, контролируемых в воде перед подачей
в распределительную сеть в зависимости
от способа водоподготовки

Кратность отбора — 1 раз в месяц

Применяемые реагенты	Показатель
Алюминийсодержащие коагулянты	Алюминий
Хлорсодержащие реагенты (за исключением диоксида хлора)	Хлор остаточный (свободный и связанный)
	Хлороформ
	Бромдихлорметан
	Дибромхлорметан
	Бромоформ
Диоксид хлора	Диоксид хлора
	Хлориты
Озонирование	Формальдегид
	Бромат-ион

4. Минимальный обязательный перечень показателей,
контролируемых в воде распределительной сети

Кратность отбора — 1 раз в месяц

Бактериологические	Общее микробное число
	Общие колиформные бактерии
	Термотолерантные колиформные бактерии
	Колифаги <12>
Неорганические	Железо (включая хлорное железо) по Fe
Обобщенные	pH
	Окисляемость перманганатная
Органолептические	Запах
	Мутность
	Цветность

———————————

<12> Только для воды централизованных систем водоснабжения из поверхностных источников.

Кратность отбора — 1 раз в год

только в воде распределительной сети из подземных водоисточников

Радиологические	Удельная активность радона (222Rn)
	Удельная эффективная альфа-радиоактивность
	Удельная эффективная бета-радиоактивность

5. Дополнительный (обязательный) перечень химических
показателей, контролируемых в воде распределительной сети
в зависимости от способа водоподготовки

Кратность отбора — 1 раз в месяц

Применяемые реагенты	Показатель
Алюминийсодержащие коагулянты	Алюминий
Хлорсодержащие реагенты (за исключением диоксида хлора)	Хлороформ
	Бромдихлорметан
	Дибромхлорметан
	Бромоформ
Диоксид хлора	Диоксид хлора
	Хлориты
Озонирование	Формальдегид
	Бромат-ион

6. Дополнительный перечень показателей
(определяются в случае превышения допустимых уровней одного
или более основных бактериологических показателей, а также
по эпидемическим показаниям):

1.1. Водоисточник поверхностный

вирусологические	Вирусы (энтеровирусы, ротавирусы, вирусы гепатита A и другие)
бактериологические	Возбудители кишечных инфекций бактериальной природы

1.2. Водоисточник подземный

вирусологические	Вирусы (энтеровирусы, ротавирусы, вирусы гепатита A и другие)
бактериологические	Возбудители кишечных инфекций бактериальной природы

1.3. Водоисточник морской

вирусологические	Вирусы (энтеровирусы, ротавирусы, вирусы гепатита A и другие)
бактериологические	Возбудители кишечных инфекций бактериальной природы

2. Вода перед подачей в распределительную сеть

вирусологические	Вирусы (энтеровирусы, ротавирусы, вирусы гепатита A и другие)
бактериологические	Возбудители кишечных инфекций бактериальной природы, Pseudomonas aeruginosa
	Споры сульфитредуцирующих клостридий (при оценке эффективности технологии обработки воды)

Сведения о водном объекте	Сведения о водозаборе	Сведения о точке контроля качества воды источника централизованной системы холодного водоснабжения	Население, пользующееся водой из данного источника, чел	Наличие (отсутствие) санитарно-эпидемиологического заключения о соответствии границ зон санитарной охраны и ограничений использования земельных участков в границах таких зон санитарным правилам
Группа	Наименование водного объекта	Номер скважины для подземного источника	Код водного объекта	Организация, осуществляющая водозабор в целях холодного водоснабжения	Местоположение водозабора	Номер (код) водозабора	Адрес точки	Код точки контроля водозабора	Географические координаты точки контроля
ИНН	Адрес	Наименование	Субъект Российской Федерации	Муниципальный район (городской округ)	Внутрирайонное МО	Городское или сельское поселение	Х-координаты точки (с.ш.)	У-координаты точки (в.д.)
Градусы (ГГ)	Минуты (ММ)	Секунды (СС)	Градусы (ГГ)	Минуты (ММ)	Секунды (СС)
1	2.	3.	4.	5.	6.	7.	8.	9.	10.	11.	12.	13.	14.	15.	16.	17.	18.	19.	20.	21.	22.

В качестве источника информации используются

Сведения о водном объекте

графы 1 — 4 — данные организации, осуществляющей водоснабжение, если данные о коде водного объекта не предоставляются, нумерация осуществляется Управлением Роспотребнадзора по субъекту Российской Федерации (утверждается руководителем Управления Роспотребнадзора по субъекту) самостоятельно.

Сведения о водозаборе

Организация, осуществляющая водозабор в целях холодного водоснабжения

графы 5 — 7 — блок ЕИАС Роспотребнадзора «Федеральный реестр хозяйствующих субъектов (ЮЛ/ИП) и их производственных объектов»;

Местоположение водозабора

графы 8 — 11 — справочник ОКТМО;

графа 12 — данные организации, осуществляющей водоснабжение;

Сведения о точке контроля качества воды источника централизованной системы холодного водоснабжения

графа 13 — блок ЕИАС Роспотребнадзора «Справочник РПН/Точка отбора»;

графа 14 — формируется в соответствии с правилами, утвержденными Роспотребнадзором;

графы 15 — 20 — определяются с помощью GPS-приемника;

графа 21 — данные организации, осуществляющей водоснабжение;

графа 22 — данные Роспотребнадзора.

Таблица 2.1.2

Паспорт точки перед подачей в распределительную сеть

Субъект Российской Федерации	Муниципальный район (городской округ)	Внутрирайонное МО	Городское или сельское поселение	Номер (код) водозабора	Наименование станции водоподготовки (водопровода)	Адрес водопровода	Номер (код) водопровода	Организация, эксплуатирующая водопровод	Характеристика водоочистных сооружений	Население, пользующееся питьевой водой из данного водопровода, чел
Мощность, м3/сут.	Комплекс очистных сооружений	Обеззараживающая установка	Год запуска	Год последнего капитального ремонта, реконструкции
ИНН	Адрес	Наименование	проектная	фактическая	Наличие (отсутствие) (да/нет)	Состав (механическая, коагуляция, фильтрация и т.д.)	Наличие (отсутствие) (да/нет)	Способ обеззараживания
1.	2.	3.	4.	5.	6.	7.	8.	9.	10.	и.	12.	13.	14.	15.	16.	17.	18.	19.	20.

Таблица 2.1.2
(продолжение)

Код контроля точки перед подачей в распределительную сеть	Географические координаты точки контроля
Х-координаты точки (с.ш.)	У-координаты точки (в.д.)
Градусы (ГГ)	Минуты (ММ)	Секунды (СС)	Градусы (ГГ)	Минуты (ММ)	Секунды (СС)
21.	22.	23.	24.	25.	26.	27.

В качестве источника информации используются

графы 1 — 4 — справочник ОКТМО;

графа 5 — таблица 2.1.1 (графа 13);

графы 6 — 8 — данные организации, эксплуатирующей водопровод;

Организация, эксплуатирующая водопровод

графы 9 — 11 — блок ЕИАС Роспотребнадзора «Федеральный реестр хозяйствующих субъектов (ЮЛ/ИП) и их производственных объектов»;

Характеристика водоочистных сооружений

графы 12 — 20 — данные организации, эксплуатирующей водопровод;

графа 21 — формируется в соответствии с правилами, утвержденными Роспотребнадзором;

графы 22 — 27 — определяются с помощью GPS-приемника.

Таблица 2.1.3

Паспорт точки контроля в распределительной сети

Субъект Российской Федерации	Муниципальный район (городской округ)	Внутрирайонное МО	Городское или сельское поселение	Номер (код) водозабора	Номер (код) водопровода	Наличие дополнительного обеззараживания (да/нет)	Тип точки в распределительной сети	Адрес точки	Код точки контроля в распределительной сети	Географические координаты точки контроля
Х-координаты точки (с.ш.)	У-координаты точки (в.д.)
Градусы (ГГ)	Минуты (ММ)	Секунды (СС)	Градусы (ГГ)	Минуты (ММ)	Секунды (СС)
1.	2.	3.	4.	5.	6.	7.	8.	9.	10.	11.	12.	13.	14.	15.	16.

В качестве источника информации используются

графы 1 — 4 — справочник ОКТМО;

графа 5 — таблица 2.1.1 (графа 12);

графа 6 — таблица 2.1.2 (графа 8);

графа 7 — 8 — данные организации, эксплуатирующей водопровод;

графа 9 — блок ЕИАС Роспотребнадзора «Федеральный реестр хозяйствующих субъектов (ЮЛ/ИП) и их производственных объектов»;

графа 10 — формируется в соответствии с правилами, утвержденными Роспотребнадзором;

графы 11 — 16 — определяются с помощью GPS-приемника;

Таблица 2.1.4

Вещества, рассматриваемые как приоритетные загрязнения
питьевой воды централизованной системы
холодного водоснабжения

Номер (код) водозабора	Номер (код) водопровода	Показатель	Способ поступления загрязняющего вещества	Население, пользующееся питьевой водой из данного водопровода, чел.
загрязнение источника	обработка воды	транспортировка воды
1.	2.	3.	4.	5.	6.	7.

В качестве источника информации используются:

графа 1 — таблица 2.1.1 (графа 12);

графа 2 — таблица 2.1.2 (графа 8);

графа 3 — блок ЕИАС Роспотребнадзора «Справочник РПН/Точка отбора»;

графы 4 — 6 — данные организации, осуществляющей водоснабжение;

графа 7 — данные организации, эксплуатирующей водопровод.

Таблица 2.2.1

Сведения о качестве воды источника централизованной системы
холодного водоснабжения (пример)

Код точки контроля водозабора (из табл. 2.1.1, графа 15)	Дата	Показатель	Единица измерения	Результат исследования	Норматив	Ошибка метода исследования	НД на метод исследования
1.	2.	3.	4.	5.	6.	7.	8.

Таблица 2.2.2

Сведения о качестве воды перед подачей в распределительную
сеть (пример)

Код точки контроля перед подачей в распределительную сеть (из табл. 2.1.2, графа 19)	Дата	Показатель	Единица измерения	Результат исследования	Норматив	Ошибка метода исследования	НД на метод исследования
1.	2.	3.	4.	5.	6.	7.	8.

Таблица 2.2.3

Сведения о качестве воды в распределительной сети

Код точки контроля в распределительной сети (из табл. 2.1.3, графа 4)	Дата	Показатель	Единица измерения	Результат исследования	Норматив	Ошибка метода исследования	НД на метод исследования
1.	2.	3.	4.	5.	6.	7.	8.

Таблица 2.3

Численность населения, обеспеченного качественной питьевой
водой из систем централизованного холодного
водоснабжения (пример)

Населенный пункт	Численность населения, чел.	Численность населения, обеспеченного централизованным водоснабжением, чел.	Численность населения, обеспеченного качественной питьевой водой из систем централизованного водоснабжения, чел.
общее	городское	общее	городское	общее	городское
1.	2.	3.	4.	5.	6.	7.

В качестве источника информации используются:

графа 1 — справочник ОКТМО;

Численность населения, чел.

графы 2 — 3 — данные Росстата (на начало календарного года);

Численность населения, обеспеченного централизованным водоснабжением, чел.

графы 4 — 5 — данные организации, осуществляющей водоснабжение;

Численность населения, обеспеченного качественной питьевой водой из систем централизованного водоснабжения, чел.

графы 6 — 7 — данные Роспотребнадзора.

Для оценки качества питьевой воды следует использовать 2 подхода:

I. оценка результатов исследований каждой пробы питьевой воды;

II. оценка результатов исследований, полученных в течение года.

В аналитическую обработку не включаются пробы воды, исследованные в процессе приемки в эксплуатацию вновь выстроенных водопроводных сооружений, наружных и внутренних распределительных сетей, в процессе их реконструкции, ремонтных работ, при аварийных ситуациях и после профилактических промывок и дезинфекции, а также законченных строительством объектов.

Расчет обеспеченности населения Российской Федерации качественной питьевой водой из централизованных систем холодного водоснабжения проводится для каждого субъекта Российской Федерации с учетом результатов отдельного расчета обеспеченности населения, в т.ч. городского, качественной питьевой водой, подаваемой конкретной централизованной системой холодного водоснабжения.

Результаты исследований каждой пробы питьевой воды оцениваются на соответствие гигиеническим нормативам с учетом допустимых отклонений, изложенных методических рекомендациях <13>.

———————————

<13> В п. 3.6 МР 2.1.4.0143-19 «Методика по оценке повышения качества питьевой воды, подаваемой системами централизованного питьевого водоснабжения», с изменениями, внесенными МР 2.1.4.0154-19 «Изменения в МР 2.1.4.0143-19 «Методика по оценке повышения качества питьевой воды, подаваемой системами централизованного питьевого водоснабжения».

Для оценки обеспеченности населения качественной питьевой водой из централизованных систем холодного водоснабжения органами и учреждениями Роспотребнадзора проводится статистическая обработка результатов содержания микробиологических (общее микробное число, общие колиформные бактерии, термотолерантные колиформные бактерии), неорганических и органических веществ, а также органолептических и обобщенных показателей в пробах питьевой воды, отобранных в течение календарного года.

Результаты исследования следует представлять в виде среднего арифметического значения, при этом для показателей, контролируемых 1 раз в квартал, дополнительно следует указывать медиану. В случае, если показатели контролируются 1 раз в год, расчет средних значений и медиан следует проводить за предыдущие 5 лет. Результаты исследований органолептических показателей, выраженные в баллах, следует представлять в виде модального значения <14>.

———————————

<14> В случае, если получено два и более модальных значений, следует указывать наибольшее значение.

Помимо расчета средних и, при необходимости, медианных или модальных уровней показателей проб питьевой воды после водоподготовки, отобранных в течение календарного года, требуется расчет удельного веса проведенных исследований по показателям микробной безопасности (общее микробное число, общие колиформные бактерии, термотолерантные колиформные бактерии), органолептическим, обобщенным показателям, концентрациям неорганических и органических веществ, не соответствующих гигиеническим нормативам по данным исследований в течение календарного года.

Расчет средних уровней показателей проб питьевой воды после водоподготовки, отобранных в течение календарного года, следует проводить с одинаковым временным интервалом. В противном случае требуется расчет средневзвешенных по времени результатов. Например, измерения уровней показателя X проводятся 15 числа каждого месяца, но в ноябре проведены два дополнительных исследования. В этом случае значения измерений в ноябре должны быть усреднены, и для расчета среднего значения за год следует использовать «среднее значение за ноябрь».

Если уровни исследуемых показателей или результаты измерения других показателей в данной пробе ниже предела определения, результаты измерения должны быть установлены на уровне половины значения предела определения для расчета средних значений. Это правило не применяется к веществам однонаправленного действия и иным веществам (факторам), оцениваемым суммарно. В этих случаях результаты измерений ниже предела определения отдельных веществ должны быть равны нулю.

Если рассчитанное среднее значение результатов измерений в течение года ниже предела определения, то среднее значение за год для данного показателя должно быть указано как «ниже предела определения».

При числе проб меньше рекомендуемого в течение календарного года распределение в выборке может отличаться от нормального распределения. В этом случае предпочтительным будет представление результатов за год в виде медианы. Для оценки нормальности распределения в выборке можно использовать критерий Колмогорова-Смирнова (при p меньше или равной 0,05 выборка считается несоответствующей нормальному распределению), алгоритм вычисления которого заложен в специализированных прикладных программных продуктах. В качестве ориентировочной оценки можно использовать сравнение среднего значения и медианы (в случае, если они приблизительно равны, распределение в выборке, скорее всего, подчиняется закону нормального распределения).

Водородный показатель pH является логарифмической величиной, поэтому для корректного расчета средних значений или медиан необходимо перевести значения pH в концентрации ионов водорода, возведя 10 в отрицательную степень, равную величине pH, по формуле: CH+ = 10-pH. Затем средние значения (медианы) обратно переводятся в логарифмические величины по формуле: pH= -lg [H+].

В рамках углубленных научных исследований возможно установление причинно-следственных связей между показателями качества питьевой воды и состоянием здоровья населения <15>. Причинно-следственная связь между качеством питьевой воды и здоровьем подтверждается выявленными зависимостями «доза-эффект», «время-эффект», силой статистической связи и ее постоянством, специфичностью эффекта и биологической правдоподобностью, образованием кластера (сгущение) числа случаев заболеваний обычно редко встречающейся в мониторируемой популяции, наличием приоритетных веществ в биосредах (моча, волосы, кровь).

———————————

<15> Гржибовский А.М., Унгуряну Т.Н. Анализ биомедицинских данных с использованием пакета статистических программ SPSS: учебное пособие/А.М. Гржибовский, Т.Н. Унгуряну. Архангельск: Изд-во Северного государственного медицинского университета, 2017. — 293 с.

Для установления связей между качеством питьевой воды и острыми заболеваниями (при условии, что данная связь не очевидна) следует проводить корреляционный анализ с использованием параметрических (коэффициент корреляции Пирсона — при нормальном распределении) или непараметрических критериев (po Спирмена). Количество наблюдений должно быть не менее 10, при этом необходимо анализировать наблюдения, полученные в равные промежутки времени, но не более чем 1 месяц. При наличии данных рекомендуется сократить анализируемые промежутки времени (например, до одних суток), не уменьшая количества наблюдений.

Для установления связей между качеством питьевой воды и хроническими заболеваниями может быть применен кросс-корреляционный анализ (с числом лет наблюдения не менее 10, а в случае отдаленных эффектов действия какого-либо фактора — не менее 20 лет), где определяется наиболее сильная корреляция на определенном лаге (сдвиг эффекта от действия причины на п количество лет).

При наличии сильной прямой связи (коэффициент корреляции 0,7 и выше) необходимо проведения углубленного эпидемиологического анализа с целью доказательства причинно-следственных связей. Также требуют внимания и наличие прямых средних по силе корреляционных связей (коэффициент корреляции 0,3 — 0,7), если подобная связь может быть объяснена логически. В то же время слабая корреляционная связь еще не означает отсутствие зависимости состояния здоровья от качества питьевой воды. Подобная зависимость может быть, но иметь сложный нелинейный характер. В таких случаях следует применять регрессионный анализ с использованием нелинейных моделей.

Использование корреляционных моделей возможно лишь при количественном типе данных (например, уровни показателей и показатели заболеваемости), при этом показатели, между которыми устанавливается корреляция, должны относиться к одинаковым временным промежуткам (как правило, показатели заболеваемости и средние уровни показателей за год). Для анализа категориальных и номинальных переменных следует применять другие типы статистической обработки данных <16>, основанных на вычислении критерия хи-квадрат и его производных.

———————————

<16> Ланг Т.А. Как описывать статистику в медицине. Аннотированное руководство для авторов, редакторов и рецензентов/Т.А. Ланг, М. Сесик; пер. с англ, под ред. В.П. Леонова. — М: Практическая медицина, 2011.- 480 с.

Простейшим вариантом оценки динамики количественных показателей является построение многолетних трендов. При коэффициенте детерминации модели (R2) выше 0,5 качество модели признается приемлемым, что позволяет сделать прогноз относительно дальнейшего изменения показателя.

Более сложные методы статистического анализа предполагают установление статистической и практической значимости различий показателей качества питьевой воды. Для подобного анализа следует формировать выборки за одинаковый промежуток времени (например, возможно сравнение массива данных прошлого года с позапрошлым, а при небольшом количестве наблюдений в течение года возможно объединение результатов за одинаковое n количество лет). Отличия считаются статистически значимыми, если значимость критерия (величина ошибки p) равна или меньше 0,05.

Анализ количественных данных на одной и той же территории в динамике возможен по Т-критерию для связанных выборок (в случае нормального распределения в выборках), критерию Уилкоксона (при отсутствии нормального распределения) или критерию Фридмана (при сравнении 3 и более периодов наблюдения). Анализ категориальных или номинальных переменных проводится на основе таблиц сопряженности. Например, при анализе связи инфекционных заболеваний с содержанием воде того или возбудителя, определенного качественно (да/нет), необходимо рассчитывать критерий Мак-Немара.

Возможно проведение сравнительного анализа качества питьевой воды на разных территориях за один и тот же промежуток времени. В случае анализа количественных показателей и наличии нормального распределения следует использовать параметрические критерии (Т-критерий для независимых выборок), при отсутствии нормального распределения — непараметрические критерии (критерий Манна-Уитни, а при сравнении 3 и более территорий — критерий Краскела-Уоллиса). Для анализа номинальных или категориальных переменных необходимо использование статистик на основе критерия хи-квадрат или его модификаций (хи-квадрат с поправкой Йейтса, точный критерий Фишера), таблиц сопряженности (коэффициент сопряженности, Фи и V Крамера, Гамма, Эта, d Сомерса и т.д.).

Для оценки эффективности мероприятий по повышению качества питьевой воды возможно применение методологии оценки риска для здоровья населения в соответствии с методиками на основе действующих нормативно-методических документов. Рекомендуется проводить оценку риска здоровью населения в целом по конкретной системе водоснабжения с целью определения критических точек (факторов, показателей), ухудшающих и наиболее негативно влияющих на качество воды и здоровье населения, что позволит выявлять приоритетные, в данный конкретный период времени, вопросы, решение которых необходимо для приведения качества воды в соответствие с установленными требованиями и снижения рисков здоровью населения, например: модернизация систем водоподготовки и/или замена разводящих сетей, и/или проведение мероприятий, направленных на стабилизацию качества воды источника водоснабжения, недопущение его дальнейшего загрязнения.

Мониторируемые показатели качества воды	Стандартные управленческие решения
1.1. Запах	При превышении гигиенического норматива, наличии стойкого специфического запаха, обусловленного технологией очистки (хлор, озон и др.) информировать водоснабжающую организацию, потребовать проведения проверки технических режимов, усиления производственного лабораторного контроля, проанализировать поступившие обращения граждан на ухудшение органолептических свойств воды. При наличии стойкого специфического химического запаха, вызывающего отрицательные сенсорные реакции (например, запах укропа, растворителя, нефти и др.), организовать расширенное лабораторное исследование исходной воды, при необходимости провести исследование на общую токсичность на альтернативных моделях.
1.2. Мутность	При превышении гигиенического норматива провести анализ ретроспективных данных показателя. В случае наличия динамики роста обратить внимание на соблюдение режима фильтрации, коагуляции, превышение нагрузки на станцию, подготовить указания водоснабжающей организации на проверку, обратив внимание на соблюдение режима водотока работы насосных станций. При длительной динамике роста показателя обратить внимание на качество воды в водоисточнике. Усилить лабораторный контроль. Обратить внимание на значения показателей: хлороформ и колифаги.
1.3. Цветность	При превышении гигиенического норматива обратить внимание на факторы, определяющие нарушения (увеличение концентраций железа, марганца). Подготовить указания водоснабжающей организации по расследованию причин. Обратить внимание на значения галогеноорганических показателей
1.4. Общая минерализация	Ведется контроль сравнения со средними значениями показателя.
1.5. Жесткость	Ведется контроль сравнения со средними значениями показателя.
1.6. Окисляемость перманганатная	При превышении гигиенического норматива более чем в 4 раза обратить внимание на качество исходной воды в части биологического загрязнения, качество обеззараживания. Обратить внимание на динамику показателей азота (аммоний-ион — нитриты — нитраты). По результатам анализа подготовить предложения водоснабжающей организации.
1.7. Нефтепродукты	При превышении гигиенического норматива провести расследование и определить причину: качество воды водоисточника, санитарное состояние оборудования станции водоподготовки. При сильном запахе нефти информировать население об ограничении использования сырой воды в питьевых целях.
1.8. Алюминий	При превышении гигиенического норматива провести дополнительные лабораторные исследования для определения причин, в том числе в процессах коагуляции воды (при реагентной обработке соединениями алюминия). В случае, когда превышение алюминия носит постоянный характер, провести мероприятия по поиску источника загрязнения (поверхностный смыв в период паводка, дноуглубительные работы на водоеме, сброс промстоков).
1.9. Железо	При превышении гигиенического норматива и многолетних фоновых концентраций обратить внимание на технические работы, проводимые на станциях водоподготовки, водопроводах, насосных станциях, в случае изменения режима водотока.
1.10. Кадмий	При превышении гигиенического норматива обратить внимание на фоновый уровень содержания вещества. Провести расчеты риска здоровью. При значительном превышении сделать расширенный химический анализ с определением общей токсичности на альтернативных моделях, при необходимости приостановить эксплуатацию централизованной системы холодного водоснабжения.
1.11. Марганец	При превышении гигиенического норматива обратить внимание на качество воды водоисточника, оценить среднее содержание в воде водоисточника. При необходимости провести мероприятия по поиску источника загрязнения.
1.12. Вещества 1-го и 2-го класса опасности (медь, мышьяк, никель, ртуть, свинец, цинк и т.д.)	При превышении уровня фонового значения в воде водоисточника гигиенического норматива более чем на величину допустимой ошибки метода определения провести расширенное исследование с постановкой реакции общей токсичности на альтернативных моделях, рассчитать риск здоровью населения, при условии неприемлемого риска приостановить эксплуатацию централизованной системы холодного водоснабжения.
1.13. Аммиак и аммоний-ион (по азоту), нитриты, нитраты	При превышении гигиенических нормативов обратить внимание на процессы нитрификации. Оценить микробиологические показатели качества воды, обратив внимание на общие колиформные бактерии, термотолерантные колиформные бактерии
1.14. Показатели, характеризующие технологию водоподготовки (формальдегид, остаточный хлор, хлороформ и др.)	При превышении гигиенических нормативов подготовить указание водоснабжающей организации об устранении технологических недостатков. Проводятся расчеты риска здоровью с целью определения ущерба, наносимого потребителям.
1.15. Органические химические препараты, используемые в сельском хозяйстве, стойкие органические соединения	При превышении гигиенических нормативов провести расширенный анализ воды, в том числе воды водоисточника, исследования общей токсичности на альтернативных моделях, расчет риска здоровью, при необходимости приостановить эксплуатацию централизованной системы холодного водоснабжения.
1.16. Микробиологические показатели (общее микробное число, общие колиформные бактерии, термотолерантные колиформные бактерии, колифаги, цисты и ооцисты патогенных простейших, яйца и личинки гельминтов)	При превышении гигиенического норматива по общему микробному числу, общим колиформным бактериям, термотолерантным колиформным бактериям, цистам и ооцистам патогенных простейших, яйцам и личинкам гельминтов проводится повторное микробиологическое исследование. При превышении гигиенического норматива по колифагам проводятся исследование на выявление патогенных микроорганизмов и оперативные мероприятия по устранению загрязнения воды. Обращается внимание на режим обеззараживания, увеличение концентраций нитритов и аммония, нарушения режимов водотока в сетях, наличие аварийных ситуаций на сетях. Население оповещается о необходимости использования кипяченной питьевой воды.

Библиографические ссылки

1. Федеральный закон от 30.03.1999 N 52-ФЗ «О санитарно-эпидемиологическом благополучии населения».

2. Федеральный закон от 26.12.2008 N 294-ФЗ «О защите прав юридических лиц и индивидуальных предпринимателей при осуществлении государственного контроля (надзора) и муниципального контроля»;

3. Федеральный закон от 07.12.2011 N 416-ФЗ «О водоснабжении и водоотведении»;

4. Постановление Правительства Российской Федерации от 02.02.2006 N 60 «Об утверждении Положения о проведении социально-гигиенического мониторинга»;

5. Постановление Правительства Российской Федерации от 06.01.2015 N 10 «О порядке осуществления производственного контроля качества и безопасности питьевой воды, горячей воды»;

6. СанПиН 2.1.5.980-00 «Водоотведение населенных мест, санитарная охрана водных объектов. Гигиенические требования к охране поверхностных вод».

7. СанПиН 2.1.4.1074-01 «Питьевая вода. Гигиенические требования к качеству воды централизованных систем питьевого водоснабжения. Контроль качества. Гигиенические требования к обеспечению безопасности систем горячего водоснабжения»;

8. ГН 2.1.5.1315-03 «Предельно допустимые концентрации (ПДК) химических веществ в воде водных объектов хозяйственно-питьевого и культурно-бытового водопользования»;

9. Приказ Роспотребнадзора от 17.11.2006 N 367 «О Порядке проведения социально-гигиенического мониторинга, представления данных»;

10. Приказ Роспотребнадзора от 28.12.2012 N 1204 «Об утверждении критериев существенного ухудшения качества питьевой воды и горячей воды»;

11. Р 2.1.10.1920-04 «Руководство по оценке риска для здоровья населения при воздействии химических веществ, загрязняющих окружающую среду»;

12. МР 2.6.1.0064-12 «Ионизирующее излучение, радиационная безопасность. Радиационный контроль питьевой воды методами радиохимического анализа»;

13. МР 2.1.4.0143-19 «Методика по оценке повышения качества питьевой воды, подаваемой системами централизованного питьевого водоснабжения»;

14. МР 2.1.4.0154-19 «Изменения в МР 2.1.4.0143-19 «Методика по оценке повышения качества питьевой воды, подаваемой системами централизованного водоснабжения»;

15. ГОСТ Р 51232-98 «Вода питьевая. Общие требования к организации и методам контроля качества»;

16. Письмо Роспотребнадзора от 23.10.2015 N 01/12950-15-32 «О порядке применения правил осуществления производственного контроля качества и безопасности питьевой воды, горячей воды»;

17. Информационно-методическое письмо от 28.01.2016 N 01/870-16-32 «Законодательное и методическое обеспечение лабораторного контроля за факторами среды обитания при проведении социально-гигиенического мониторинга»;

18. Справочник перспективных технологий водоподготовки и очистки воды с использованием технологий, разработанных организациями оборонно-промышленного комплекса и учетом оценки риска здоровью населения.

Источник

ГОСТ Р 70152-2022

НАЦИОНАЛЬНЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

КАЧЕСТВО ВОДЫ

Методы внутреннего лабораторного контроля качества проведения микробиологических и паразитологических исследований

Water quality. Methods of internal laboratory quality control for conducting microbiological and parasitological studies

ОКС 13.060.70

Дата введения 2023-01-01

Предисловие

1 РАЗРАБОТАН Российской ассоциацией водоснабжения и водоотведения (РАВВ) совместно с Федеральным государственным бюджетным учреждением «Центр стратегического планирования и управления медико-биологическими рисками здоровью» Федерального медико-биологического агентства «Научно-исследовательский институт экологии человека и гигиены окружающей среды им.А.Н.Сысина» (ФГБУ «ЦСП» ФМБА России)

2 ВНЕСЕН Техническим комитетом по стандартизации ТК 343 «Качество воды»

3 УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 17 июня 2022 г. N 483-ст

4 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

Правила применения настоящего стандарта установлены в статье 26 Федерального закона от 29 июня 2015 г. N 162-ФЗ «О стандартизации в Российской Федерации». Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодном (по состоянию на 1 января текущего года) информационном указателе «Национальные стандарты», а официальный текст изменений и поправок — в ежемесячном информационном указателе «Национальные стандарты». В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ближайшем выпуске ежемесячного информационного указателя «Национальные стандарты». Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования — на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет (www.rst.gov.ru)

1 Область применения

Настоящий стандарт предназначен для осуществления внутреннего лабораторного контроля с целью оценки достоверности полученных результатов при проведении бактериологических, вирусологических, микологических и паразитологических исследований объектов окружающей среды, в том числе воды централизованного горячего и холодного, нецентрализованного и хозяйственно-бытового водоснабжения, воды, расфасованной в емкости, источников питьевого водоснабжения, воды в зонах рекреации, воды бассейнов и аквапарков, сточных и технических вод, воды для орошения и полива.

2 Нормативные ссылки

В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие стандарты:

ГОСТ 18963 Вода питьевая. Методы санитарно-бактериологического анализа

ГОСТ 24849 Вода. Методы санитарно-бактериологического анализа для полевых условий

ГОСТ 26670 Продукты пищевые. Методы культивирования микроорганизмов

ГОСТ 30813 Вода и водоподготовка. Термины и определения

ГОСТ 31942 (ISO 19458:2006) Вода. Отбор проб для микробиологического анализа

ГОСТ 31955.1 (ISO 9308-1:2000) Вода питьевая. Обнаружение и количественный учет Escherichia coli и колиформных бактерий. Часть 1. Метод мембранной фильтрации

ГОСТ 34786 Вода питьевая. Методы определения общего числа микроорганизмов, колиформных бактерий, Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa и энтерококков

ГОСТ ISO 11133 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред

ГОСТ Р 58144 Вода дистиллированная. Технические условия

ГОСТ Р ИСО 15882 Стерилизация медицинской продукции. Химические индикаторы. Руководство по выбору, использованию и интерпретации результатов

ГОСТ Р ИСО 21748 Руководство по использованию оценок повторяемости, воспроизводимости и правильности при оценке неопределенности измерений

Примечание — При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов в информационной системе общего пользования — на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет или по ежегодному информационному указателю «Национальные стандарты», который опубликован по состоянию на 1 января текущего года, и по выпускам ежемесячного информационного указателя «Национальные стандарты» за текущий год. Если заменен ссылочный стандарт, на который дана недатированная ссылка, то рекомендуется использовать действующую версию этого стандарта с учетом всех внесенных в данную версию изменений. Если заменен ссылочный стандарт, на который дана датированная ссылка, то рекомендуется использовать версию этого стандарта с указанным выше годом утверждения (принятия). Если после утверждения настоящего стандарта в ссылочный стандарт, на который дана датированная ссылка, внесено изменение, затрагивающее положение, на которое дана ссылка, то это положение рекомендуется применять без учета данного изменения. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, рекомендуется применять в части, не затрагивающей эту ссылку.

3 Термины и определения

В настоящем стандарте применены термины по ГОСТ 30813, а также следующие термины с соответствующими определениями:

3.1 бокс (боксированное помещение): Специальным образом устроенное изолированное помещение, состоящее из собственно бокса и предбокса, предназначенное для создания асептических условий при проведении исследований, а также для предотвращения микробного загрязнения внешней среды.

3.2 бокс биологической безопасности (ламинарное укрытие, ламинарный шкаф): Конструкция, используемая для физической изоляции (удержания и контролируемого удаления из рабочей зоны) микроорганизмов с целью предотвращения возможности заражения персонала и контаминации воздуха рабочей зоны и окружающей среды.

3.3 запас рабочей культуры: Культура эталонного штамма в условиях временного хранения в полужидком агаре при температуре от 4°С до 8°С.

3.4 запас эталонного штамма: Штамм, находящийся в условиях длительного хранения при температуре минус (70±10)°С или в жидком азоте.

3.5 лиофилизированная культура: Высушенная под вакуумом из замороженного состояния культура эталонного штамма.

3.6 культура для целевого использования: Культура эталонного штамма, прошедшая не более 2 пассажей после высева со среды временного хранения (из запасов рабочей культуры), предназначенная для использования в анализе.

3.7 контрольные процедуры: Действия и мероприятия, направленные на минимизацию рисков на всех этапах выполнения микробиологического и паразитологического анализа.

3.8 патогенные биологические агенты; ПБА: Патогенные для человека микроорганизмы, генно-инженерно-модифицированные микроорганизмы, яды биологического происхождения (токсины), гельминты, а также материал, подозрительный на содержание перечисленных агентов (включая биологические жидкости и объекты окружающей среды).

3.9 посевная: Рабочее помещение, предназначенное для выполнения первого этапа санитарно-микробиологического исследования воды: концентрирования, разведения и/или посева в питательные среды.

3.10 посевная доза: Объем конкретного разведения, содержащий необходимое для посева количество жизнеспособных клеток тестового микроорганизма.

3.11 разбавитель: Жидкость определенного состава, служащая для приготовления серийных разведений исследуемой воды или модельных бактериальных культур.

3.12 субкультура: Культура бактерий, полученная путем пассажа через полноценные питательные среды.

3.13 испытательное оборудование: Средство испытаний, представляющее собой техническое устройство для воспроизведения условий испытаний.

3.14 вспомогательное оборудование: Оборудование, предназначенное для обеспечения работоспособности основного оборудования, не участвующее в исследованиях.

3.15 измерительное оборудование: Средства измерений, в том числе эталоны единиц физических величин, стандартные образцы, программное обеспечение (кроме входящего в состав средств измерений) и вспомогательная аппаратура или их комбинации, необходимые для реализации процесса измерений.

4 Организация внутреннего контроля качества на всех этапах выполнения микробиологического и паразитологического анализа

4.1 Основными направлениями организации внутреннего контроля качества являются:

— контроль за соблюдением требований к условиям проведения анализа (лабораторные помещения, воздушная среда, температурные режимы инкубации и хранения, режимы дезинфекции и стерилизации и т.д.);

— выполнение регламентированных процедур ведения тестовых культур;

— контроль качества питательных сред;

— контроль качества мембранных фильтров и фильтрующих материалов для микробиологического анализа;

— контроль качества дистиллированной воды;

— систематическая оценка результатов контрольных процедур, выполняемых в соответствии с планом внутрилабораторного контроля.

4.2 Описание процедур контроля соблюдения требований к условиям проведения анализа, ведения эталонных бактериальных культур, контроля качества питательных сред и мембранных фильтров, постановки положительных и отрицательных контролей представлены в настоящем стандарте.

4.3 Документальное оформление результатов проведенных контрольных процедур осуществляется в произвольной форме, удобной исполнителю и наглядной для других специалистов, привлекаемых к участию в различных комиссиях по проверке работы лаборатории (по аттестации, аккредитации и др.). При этом могут быть использованы журнальные формы учета или формы отдельных контрольных листов, которые впоследствии брошюруются за определенный период времени (месяц, квартал, год) в зависимости от кратности и вида контроля. Примеры формуляров для записи результатов внутреннего контроля качества приведены в приложении А.

4.4 Регистрация и хранение контрольных результатов могут осуществляться на электронных носителях.

4.5 Обязательным разделом внутреннего контроля качества является проведение периодического, но не реже 1 раза в год, анализа результатов выполненных контрольных процедур, с учетом которого осуществляется корректировка мероприятий, направленных на повышение качества внутрилабораторного контроля.

4.6 Обеспечение качества выполняемых исследований возможно только при наличии квалифицированного персонала. К выполнению всех технологических операций (подготовка проб, исследование и обработка результатов) допускаются лица с высшим или средним специальным образованием, прошедшие подготовку (обучение) периодичностью один раз в пять лет по специальностям, отвечающим требованиям и характеру работ, в области микробиологии (бактериологии, вирусологии, микологии) и паразитологии, а также один раз в пять лет курс повышения квалификации кадров по безопасности работы с ПБА III-IV группы патогенности (опасности) в соответствии с действующими на территории Российской Федерации санитарными правилами и нормами. Проверку квалификации работающего персонала необходимо проводить в соответствии с разработанным в лаборатории и утвержденным в организации планом производственного контроля.

4.7 Требования к набору помещений и их размещению, организации и безопасности работ микробиологических лабораторий с патогенными биологическими агентами изложены в [1].

4.8 Во избежание загрязнения проб и питательных сред, а также риска инфицирования персонала в лаборатории следует соблюдать меры личной гигиены:

— лабораторная одежда должна быть застегнутой надлежащим способом, чистой, в хорошем состоянии, изготовленной из ткани, ограничивающей риск воспламенения. Эту одежду не следует носить вне рабочей зоны и, в частности, в ней нельзя выходить в туалет;

— на волосяной покров головы следует надевать медицинскую шапочку из хлопчатобумажной ткани или одноразовую из нетканого материала. На лицо, при необходимости, надеть маску или защитный экран/очки;

— ногти следует содержать в чистоте и желательно короткими;

— необходимо мыть руки теплой водой желательно в раковине, оснащенной не регулируемым вручную смесителем (например, с локтевым, ножным или сенсорным управлением), до и после микробиологических исследований, а также после посещения туалета. Рекомендуется использовать жидкое или порошковое мыло, или другое дезинфицирующее средство, поступающее из дозатора, поддерживаемого в чистом состоянии. Для сушки рук следует использовать одноразовые бумажные или матерчатые салфетки или полотенца;

— при работе с открытыми пробами, питательными средами и при посеве материала не допускается разговаривать, кашлять и т.д.;

— люди, имеющие инфекционные заболевания кожи или страдающие заболеваниями кожи, должны предпринимать меры предосторожности, если микроорганизмы от них способны инфицировать пробы, что может отразиться на результатах исследований;

— в лаборатории нельзя принимать пищу, пить, оставлять пищевые продукты для личного потребления в лабораторных холодильниках или морозильных камерах;

— недопустимо осуществлять пипетирование ртом.

5 Контроль физических параметров окружающей среды

5.1 Условия окружающей среды помещений лаборатории не должны оказывать негативного воздействия на достоверность результатов, полученных в результате исследований. Лабораторные помещения содержать в состоянии, пригодном для проведения исследований, уборку и дезинфекцию следует выполнять постоянно. Загрязненные или потенциально зараженные поверхности следует продезинфицировать, для чего необходимо использовать дезинфицирующие средства, обладающие способностью уничтожать бактерии, вирусы, паразитарные агенты и грибы.

Примечание — Комнаты и оборудование могут быть продезинфицированы с использованием «холодного тумана» — путем распыления воздуха со взвешенными в нем частичками дезинфицирующей жидкости, при этом дезинфекционное облако распространяется по обрабатываемой площади, проникая в щели и труднодоступные места.

Обеззараживание системы вентиляции с фильтрами следует проводить 2 раза в год.

Техническое обслуживание системы вентиляции следует проводить 1 раз в год, при необходимости, с заменой фильтров на новые.

5.2 В лаборатории должен осуществляться мониторинг физических параметров условий окружающей среды (температуры, влажности).

Перечень параметров определяется индивидуально каждой лабораторией и зависит от технических требований к эксплуатируемому оборудованию и применяемых методов. Данные параметры измеряются приборами, зарегистрированными в Госреестре, которые должны проходить ежегодную поверку в аккредитованных организациях.

Проводить измерения физических параметров (температура, влажность) должен подготовленный сотрудник, который прошел соответствующее обучение. Возможно привлечение сотрудников не из штата лаборатории, допуск которого оформляется приказом по организации. Измерения проводят в начале рабочего дня в посевных, комнате приготовления питательных сред и в помещениях, где хранятся сухие среды, и где этого требуют технические условия применяемых методов и методик.

Результаты мониторинга должны быть задокументированы в журналах (формулярах) и подписаны сотрудником, проводившим измерения.

5.3 В лабораториях должны осуществлять мониторинг источников УФ излучения и оценки эффективности УФ бактерицидного излучения. Мощность бактерицидного излучения определяет качество обеззараживания воздуха. Количество облучателей и эффективность их функционирования определяют мощность бактерицидного излучения [2].

Бактерицидным действием обладает ультрафиолетовое излучение с диапазоном длин волн 205-315 нм и УФ-дозы от 28 мДж/см

и выше, обеспечивающие снижение концентрации общего микробного числа (ОМЧ), Staphylococcus aureus, плесневых и дрожжевых грибов.

Количество облучателей определяется при организации лаборатории для каждого помещения в соответствии с Паспортом облучателя, объемом помещения и требованиями актуальной нормативной документации, действующей на территории РФ.

В каждом помещении, где используются УФ облучатели, должен вестись журнал (формуляр), в котором фиксируют паспортные данные лампы, ее ресурс, объем облучаемого помещения, дату начала эксплуатации, учет времени работы лампы. Осуществляют замену после выработки ресурса лампы. Отмечают также дату протирки лампы, проводимую не менее 1 раза в месяц только при отключенной сети.

Методика оценки эффективности применения ультрафиолетового бактерицидного излучения для обеззараживания воздуха в помещениях осуществляется путем проверки микробной обсемененности помещений, описанной в 7.2.

Если после облучения помещения на чашке МПА при седиментационном методе, вырастает не более 3 колоний, а при использовании аспирационного метода — не выше 500 КОЕ/м

— ультрафиолетовое облучение помещения считают эффективным.

Если нормативы превышены, то выполняют генеральную уборку помещения с обработкой всех поверхностей дезинфицирующими средствами и повторно обеззараживают воздух УФ облучением.

Затем проводят повторное исследование микробной обсемененности воздуха.

При получении неудовлетворительных результатов контроля ставят в известность руководителя лаборатории и принимают меры по выяснению причин недостаточной эффективности обеззараживания.

Если при повторном определении уровень обсемененности воздуха снова превышает нормативы, определяют бактерицидную эффективность облучения.

Результативность облучения микроорганизмов или бактериальная эффективность облучения

оценивается в процентах по формуле:

, (1)

где

— число погибших микроорганизмов;

— число микроорганизмов до облучения.

Применение ультрафиолетового бактерицидного излучения для обеззараживания воздуха считают эффективным, если бактерицидная эффективность составляет не менее 99%.

5.4 Контроль температуры в термостате (испытательном оборудовании) осуществляют с помощью одного термометра или с помощью записывающих тонкопроволочных термопар, позволяющих фиксировать выход температуры инкубации за границы допустимого отклонения. Контроль температуры в термостатах проводят ежедневно до начала работы поверенными термометрами и результаты фиксируются в журнале (формуляре). С этой целью каждый термостат должен включать не менее одного термометра, шарик которого погружен в глицерин (или в другую подходящую теплопоглощающую жидкость). Можно использовать другие системы проверки работы с равноценными характеристиками. Цена деления термометра не должна превышать четверти величины допустимого отклонения температуры инкубации. Так, для контроля температуры (36±2)°С необходимо использовать термометр с ценой деления не более 0,5°С. Термометр размещают в центре камеры термостата. Если в процессе аттестации были выявлены экстремальные точки, то термометры размещают в этих точках. В журнале (формуляре) для каждого термостата должно быть указано помещение, в котором находится оборудование, номер термостата, номер термометра, требуемый температурный режим и допустимые отклонения. В журнале (формуляре) отмечается дата учета и обработка термостата. Все записи заверяются подписью исполнителя.

Раз в месяц термостаты очищают и проводят санитарную обработку внешних и внутренних стенок термостата и, если необходимо, удаляют пыль из системы вентиляции или по инструкции производителя.

5.5 Проверка температуры в холодильниках проводится поверенными средствами измерения — термометрами ежедневно в каждой камере, используя термометр или постоянно установленный датчик. Результаты фиксируются в журнале (формуляре) и заверяются подписью исполнителя. Там же фиксируются даты санитарной обработки внутренних поверхностей холодильника. Точность, требуемая для контролирующего температуру устройства, зависит от цели, с которой эта камера используется.

При загрузке холодильных камер для поддержания циркуляции воздуха и во избежание перекрестного загрязнения используют разные камеры, контейнеры.

Примечание — Стоит обратить внимание, что в холодильниках, оснащенных электронным табло, бывает, что температура на табло и внутри камеры по показаниям термометра отличаются.

5.6 Температуру каждой морозильной камеры и установки для глубокого замораживания проверяют утром и вечером, используя подходящие устройства, контролирующие температуру, 1 раз в месяц — удаляют пыль с лопастей мотора и с внешних пластин термообменника (если возможно). Если морозильные камеры и установки для глубокого замораживания имеют встроенные устройства измерения температуры, информация с которых выводится на лицевую панель устройства, то достаточно контролировать температуру внешним термометром 2 раза в год и после разморозки и очистки холодильника для контроля работы встроенного термометра.

5.7 Контроль бани с терморегулятором требуется для поддержания необходимой температуры, обеспечивающей максимально допустимое отклонение, устанавливающегося для каждого используемого метода.

Перед началом работы баню необходимо заполнить жидкостью, предпочтительно следует использовать дистиллированную или деионизированную воду. Регулярно проверяют уровень жидкости, чтобы обеспечить правильное функционирование бани и надлежащее погружение помещенных в нее проб. Уровень жидкости должен всегда закрывать нагревательные элементы. Следует регулярно выливать жидкость из бани, очищать, санировать и снова заполнять баню жидкостью, в зависимости от частоты использования, а также после того, когда происходит разбрызгивание или протекание бани.

5.8 Микроволновая печь применяется для подогрева и плавления питательных сред и различных гелей, должна обеспечивать нагревание жидкостей и питательных сред в контролируемых условиях с помощью цикла микроволнового излучения.

Примечание — Не допускается нагревание сред, содержащих чувствительные к высокой температуре компоненты, если не проверено, что этот способ нагревания не оказывает влияния на свойства среды. Не допускается использовать микроволновые печи для стерилизации питательных сред. Не допускается использовать металлическое оборудование, включая металлические крышки.

5.9 Весы, используемые в микробиологической лаборатории для взвешивания, должны быть требуемого диапазона, зарегистрированные в установленном порядке на территории РФ, должны проходить ежегодную поверку каксредство измерения. Если нет других указаний, разрешающая способность весов должна быть не более 1%, чтобы обеспечить максимальную допустимую погрешность 5% по массе.

Оборудование устанавливают на устойчивую горизонтальную поверхность с защитой от вибраций.

Оборудование очищают и дезинфицируют после каждого использования или после проливания (рассыпания) при взвешивании с помощью подходящего не коррозирующего дезинфицирующего средства.

Обученный оператор должен проводить калибровку весов в соответствии с технической документацией на них.

5.10 pH-метр должен обеспечивать считывание показаний до ±0,01 ед. pH, а погрешность измерений должна составлять 0,1 ед. pH. Он должен быть оснащен ручным или автоматическим определителем температуры.

pH-метр регулируют в соответствии с инструкцией изготовителя для измерения значения pH при стандартизированной температуре, например 25°С. Значение pH считывают после того, как стабилизируется показание. Калибровку pH-метра проводят в соответствии с инструкцией производителя, используя не менее двух, а лучше трех стандартных буферных растворов перед началом работы. При этой проверке определяют максимально допустимые погрешности, которые должны быть более строгими, чем погрешность, допустимая при обычном использовании. Буферные растворы должны быть прослеживаемыми и иметь значения pH, определяемые с точностью до двух знаков после запятой при температуре измерения (как правило, pH 7,00, pH 4,00 и/или pH 9,00 при 25°С, в соответствии с инструкцией изготовителя).

Измеряемое значение pH должно находиться между значениями pH стандартных растворов.

Значение pH записывают с точностью до двух знаков после запятой в соответствующий журнал (формуляр).

Значение водородного показателя измеряют у стерилизованной среды, а при работе с плотной средой — измеряют у стерилизованной среды после ее отвердения. При измерении pH для контроля питательных сред применяют индикаторную бумагу с шагом 0,3 ед.

Отклонение pH среды за пределы диапазона, указанного в паспорте, приводит к ухудшению ее биологических свойств, вплоть до полной непригодности. Отклонения водородного показателя или другие проблемы с pH могут быть вызваны: перегревом; недостаточным перемешиванием; чрезмерной стерилизацией; использованием щелочного стекла; загрязнением емкостей, в которых готовилась среда; дистиллированной водой низкого качества.

5.11 Процедура подготовки к работе и контроля стерильности фильтровальных установок при проведении микробиологических исследований воды

5.11.1 Процедура подготовки к работе и контроля стерильности фильтровальных установок при проведении бактериологических исследований воды

Воронки и фритты обжигают фламбированием с применением пинцета с ватой или марлей, смоченной 96%-ным спиртом и отжатой, или с применением ручной горелки.

Обеззараживание фильтровальной установки проводится после каждого проведения концентрирования пробы воды.

Контроль стерильности фильтровальных установок проводят перед началом посева методом мембранной фильтрации.

Подготовительный этап

Для контроля используют:

— плотную полноценную неселективную среду (питательный агар, ГРМ-агар и др.) проверенной ранее серии (раздел 11);

— стерильные мембранные фильтры (нитрат- или ацетат-целлюлозные) для микробиологических целей с диаметром пор 0,45 мкм, проверенной ранее партии (5.12);

— стерильную водопроводную воду;

— спирт-ректификат 96%-ный.

Накануне исследования питательный агар проверенной серии разливают в чашки Петри слоем не менее 2 мм и проверяют на стерильность. Для этого одну чашку из приготовленной среды инкубируют при температуре (37±1)°С в течение 24 ч. При наличии роста микроорганизмов приготовленную среду выбраковывают.

Методика контроля

На воронках должны быть нанесены риски, определяющие объем фильтруемой жидкости. Внутренние поверхности воронки и фильтровальный столик смачивают 96%-ным спиртом и фламбируют. После сгорания спирта и остывания воронок с помощью стерильного пинцета помещают мембранный фильтр на основание держателя фильтра, затем устанавливают фильтровальную воронку в гнездо фильтровального столика. Допускается фламбирование фильтровального столика и внутренней поверхности воронки газовым пистолетом.

При отключенном вакууме воронку заполняют стерильной водой таким образом, чтобы вода обмыла внутренние стенки воронки. Объем стерильной воды должен составлять не менее половины максимального объема воронки.

Включают вакуум и отфильтровывают содержимое воронки. Вакуум отключают, снимают фильтровальную воронку и стерильным пинцетом переносят мембранный фильтр с основания на чашку со средой. Между мембранным фильтром и поверхностью агара не должно быть пузырьков воздуха. Чашки с посевами переворачивают и инкубируют в термостате при (36±2)°С в течение (24±2) ч.

Рост микроорганизмов свидетельствует о неэффективной обработке фильтровальной установки. Результаты заносят в журнал контроля стерильности фильтровальных установок и визируют подписью сотрудника, выполнившего контроль. Обо всех случаях нестерильности фильтровальных установок ставят в известность руководителя подразделения.

5.11.2 Процедура подготовки к работе и контроля стерильности фильтровальных установок при проведении вирусологических исследований воды

Обработка фильтровальной установки

Обеззараживание фильтровальной установки проводится после каждого проведения концентрирования пробы воды.

Для контроля полноты обеззараживая через шланги и установку предварительно пропускают 10 см

суспензии непатогенного биологического трейсера — РНК-содержащего колифага MS-2 в концентрации 103 БОЕ/см

Обеззараживание фильтровальной установки проводится следующим способом: через шланги и фильтровальную установку пропускают 1 л 10%-ного раствора перекиси водорода, затем 500 см

стерильной дистиллированной воды, которой производится смыв остаточного раствора перекиси водорода. После этого производится фломбирование фильтродержателя.

Контроль стерильности фильтровальных установок проводят перед началом концентрирования методом смыва непатогенного биологического трейсера дистиллированной водой.

Подготовительный этап

Для контроля используют:

— плотную полноценную неселективную среду МПА проверенной ранее серии (раздел 11);

— культуру Е. coli

;

— стерильную дистиллированную воду.

Накануне исследования питательный агар проверенной серии разливают в чашки Петри слоем не менее 2 мм и проверяют на стерильность. Для этого одну чашку из приготовленной среды инкубируют при температуре 37°С в течение 24 ч. При наличии роста микроорганизмов приготовленную среду выбраковывают.

Методика контроля

Для оценки стерильности фильтровальной установки и ее готовности для концентрирования новой пробы воды, производится пропускание 1 л стерильной дистиллированной воды через установку и шланги с последующим посевом 10 см

в 3-х повторностях на наличие фага MS-2 титрационным методом определения колифагов.

Обнаружение в пробе колифагов свидетельствует о неэффективной обработке фильтровальной установки. В случае обнаружения фагов обеззараживание фильтродержателя производятся повторно с последующим контролем. Результаты заносят в журнал контроля стерильности фильтровальных установок и визируют подписью сотрудника, выполнившего контроль. В случаях выявления нестерильности фильтровальных установок ставят в известность руководителя подразделения, и результаты проведенных исследований, проведенные с использованием данной нестерильной фильтровальной установки, считаются не действительными.

5.11.3 Процедура подготовки к работе и фильтровальных установок при проведении паразитологических исследований воды проводится согласно рекомендациям производителя.

Пример — При проведении паразитологических исследований могут использоваться вакуумные фильтровальные установки типа ПВФ-142, ПВФ-142Б, ПВФ-142Б(К), ПВФ-35, ПВФ-47, ПВФ-142П, установки напорного фильтрования типа ПНФ-70, УППВ.

5.12 Контроль эффективности фильтрующих материалов для проведения санитарно-микробиологических и санитарно-паразитологических исследований

В практике лабораторий, проводящих санитарно-вирусологический контроль воды, используются позитивно-заряженная микропористая капроновая мембрана с диаметром пор 0,2 мкм, подготовленная к использованию согласно с указаниями организации-изготовителя (листовка-аннотация, сопровождающая фильтры).

В практике лабораторий, проводящих санитарно-паразитологический контроль воды, используют трековую мембрану, на основе ацетатов целлюлозы типа МФАС-СПА с размерами пор от 2,5 до 3,0 мкм, МФАС-СПА-4 с размерами пор от 2,5 до 4,5 мкм или прозрачные аналитические трековые мембраны ATM на основе полиэтилентерефталата с размерами пор от 1,5 до 4,5 и более мкм. Диаметр фильтровальных дисков 25, 35, 47, 70 и до 142 мкм, в зависимости от диаметра фритты фильтродержателя используемого фильтровального оборудования. Специальная подготовка для трековых мембран не требуется, так как трековая мембрана находится между бумажными прокладочными дисками, изготовленными из силиконизированной бумаги. Трековые мембраны извлекают пинцетом из заводской упаковки и помещают на фритту фильтродержателя прибора для фильтрования (диаметр диска трековой мембраны подбирают в зависимости от имеющейся в лаборатории фильтровальной установки).

В практике лабораторий, проводящих санитарно-бактериологический контроль воды, используются фильтрующие материалы диаметром 47 или 35 мм и средним размером пор 0,45 мкм.

Фильтрующие материалы применяются при определении санитарно-бактериологических показателей, определяемых при контроле качества различных вод в соответствии с [3] с применением методов по ГОСТ 31955.1, ГОСТ 34786 и 6.4.1 настоящего стандарта:

— обобщенные колиформные бактерии;

— E. coli;

— энтерококки;

— P. aeruginosa;

— споры сульфитредуцирующих клостридий.

Качество используемых фильтрующих материалов может оказать существенное влияние на результаты анализа. При этом качество фильтрующих материалов одного производителя может меняться от партии к партии. При поступлении каждой новой партии фильтров, а также при необходимости принятия решения о возможности продления сроков годности осуществляется контроль эффективности фильтрующих материалов.

При наличии в поступившей партии нескольких серий фильтров контроль проводится для каждой серии.

Фильтрующие материалы, допущенные к проведению анализа, используются однократно. Повторное применение фильтрующих материалов запрещается.

Принцип метода

Эффективность фильтрующих материалов определяется путем сравнения числа колоний микроорганизмов, выросших на полноценной питательной среде в результате прямого поверхностного посева суспензии культуры контрольного микроорганизма, и числа колоний, выросших на этой же среде в результате посева способом мембранной фильтрации.

Оценка эффективности фильтрующих материалов осуществляется по показателю «процент извлекаемости». Фильтрующие материалы считаются пригодными, если при посеве способом мембранной фильтрации вырастает не менее 80% от числа колоний, полученных при прямом посеве.

Отбор фильтров для контрольного исследования должен проводиться «слепым» методом, т.е. фильтры для контроля необходимо отбирать произвольно из разных упаковок анализируемой партии.

5.13 Все автоматические дозаторы должны проходить ежегодную поверку в соответствии с описанием типа СИ.

5.14 Центрифуги, используемые для микробиологических и паразитологических исследований в качестве испытательного оборудования, аттестуют один раз в два года на скорость вращения, таймер, температуру для центрифуг с охлаждением, а также после ремонта проводят повторную аттестацию. Центрифугам, используемым в качестве вспомогательного оборудования, проводят техническое обслуживание, согласно рекомендациям производителя. Каждая лаборатория самостоятельно определяет принадлежность оборудования к испытательному и вспомогательному исходя из методов, которые в ней реализуются.

5.15 Аппарат для приготовления питательных сред разработан для стерилизации больших объемов сред (более 1 дм

). Для контроля необходимо проверять температуру и продолжительность каждого цикла с фиксацией в журнале, возможно прикрепление чека с автоматическим считыванием параметров.

5.16 Проведение контроля в боксах биологической безопасности для микробиологических исследований

5.16.1 Бокс биологической безопасности для микробиологических исследований — это рабочее помещение, оснащенное установкой для горизонтального и вертикального ламинарных потоков воздуха, предназначенной для удаления пыли и других частиц из воздуха, в том числе микроорганизмов. Максимально допустимое количество частиц в кубическом метре с размером не менее или равным 0,5 мкм представляет класс устранения пыли из защитного бокса с очисткой воздуха. Для боксов, используемых в микробиологии пищевых продуктов, количество частиц должно быть не более 4000 в кубическом метре.

5.16.2 Для проведения микробиологических исследований допускаются боксы биологической безопасности не ниже II класса. Если это определено национальными регламентами, боксы биологической безопасности используют для любых видов работы с патогенными микроорганизмами. Боксы не должны загромождаться оборудованием. Все необходимое размещают до начала работы внутри бокса, чтобы свести к минимуму количество движений рук внутри и вне рабочей зоны. Расположение оборудования и материалов должно быть таким, чтобы свести к минимуму нарушение потока воздуха в рабочей зоне. Операторы должны быть обучены правильному использованию боксов, чтобы обеспечивать как их безопасность, так и сохранность пробы или культуры микроорганизмов.

5.16.3 После использования рабочую зону бокса очищают и обеззараживают с помощью соответствующего, не обладающего коррозийными свойствами, дезинфицирующего средства.

Боксы биологической безопасности следует дезинфицировать перед заменой фильтра или плановым обслуживанием.

После очистки бокса для обеззараживания можно использовать ультрафиолетовые (УФ) лампы. УФ лампы раз в месяц протирают 70%-ным спиртом или заменяют в соответствии с инструкциями изготовителя.

5.16.4 В процессе эксплуатации бокса биологической безопасности необходимо проверять эффективность бокса на биологическую безопасность при закупке и затем в соответствии с рекомендациями изготовителя, но не реже 1 раза в год, а также после любого ремонта или модификации. Проверку чистоты рабочей поверхности и стен бокса от любого микробиологического загрязнения следует проверять не реже 1 раза в месяц с соответствующей записью в лабораторном журнале, необходимо осуществлять перед каждой работой в боксе проверку числа микроорганизмов, циркулирующих в воздухе во время работы фильтров, используя метод седиментации.

6 Требования к подготовке лабораторной посуды

6.1 Процедура подготовки лабораторной посуды к работе

В настоящем стандарте устанавливается порядок проведения и контроля подготовки стеклянной посуды многоразового использования в соответствии с требованиями ГОСТ 31942.

Стерилизованная посуда должна иметь маркировку с указанием даты стерилизации для последующего учета срока хранения.

Емкости для отбора проб питьевой воды, обеззараженной хлорированием или другими окислителями, должны быть стерилизованы с тиосульфатом натрия и соответствующим способом маркированы в соответствии с ГОСТ 24849.

Подготовка лабораторной посуды проводится в моечной, расположенной в «чистой» зоне.

Процесс подготовки дает возможность получить чистые и стерильные флаконы, бутылки, пипетки, чашки Петри и др.

Одним из факторов, оказывающих влияние на результаты проводимых исследований воды, является недостаточная чистота посуды, поэтому вся посуда должна быть перед стерилизацией тщательно вымыта и высушена в соответствии с ГОСТ 18963.

Под механическими включениями подразумеваются посторонние нерастворимые частицы или волокна, видимые невооруженным глазом в смывах с внутренней поверхности стерильной лабораторной посуды.

Под стерильностью посуды подразумевается отсутствие микроорганизмов на их поверхностях после стерилизации.

Вся лабораторная посуда, вышедшая после проведения исследования (чашки, колбы, пробирки со средами), помещается в специальные биксы или ведра с крышками и обеззараживается автоклавированием при температуре (126±2)°С и давлении 0,15 МПа в течение 60 мин или при температуре (132±2)°С и давлении 0,2 МПа в течение 20 мин с момента достижения указанной температуры; при росте споровой микрофлоры — при температуре (132±2)°С и давлении 0,2 МПа в течение 90 мин с момента достижения указанной температуры. Категорически запрещается освобождать использованную посуду от содержимого (питательных сред, растворов с посевами) до обеззараживания.

Перед стерилизацией посуда для микробиологического анализа должна быть тщательно вымыта и высушена. Посуду стерилизуют в сушильном шкафу сухим жаром одним из способов:

— при температуре (180±3)°С — в течение 1 ч с момента достижения указанной температуры;

— при температуре (160±5)°С — в течение 2,5 ч с момента достижения указанной температуры.

Материалы и лабораторную посуду, разрушающиеся при температуре от 160°С до 180°С (резина и т.п.), следует стерилизовать в паровом стерилизаторе при температуре (121±3)°С в течение 20 мин.

В исключительных случаях допускается обеззараживание кипячением в 2%-ном растворе пищевой соды или 0,5%-ном растворе нейтрального моющего средства в течение 60 мин с момента закипания. Кипячение должно происходить в закрытой емкости с полным погружением в раствор.

Отработанные пипетки обеззараживают с полным погружением в дезраствор. Продолжительность обеззараживания зависит от применяемого дезсредства.

Методика проверки эффективности обработки стеклянной лабораторной посуды: качество промывки лабораторной посуды от моющих средств и подбора режима мытья посуды при использовании нового моющего средства оценивают посредством визуального осмотра и по оценке наличия щелочных и кислых остатков, проверяемых посредством определения pH, которое должно быть в пределах диапазона 5,0-7,3.

Лабораторную посуду (флаконы, пробирки, бутылки, колбы) закрывают силиконовыми пробками. Поверх пробки (кроме пробирок) надевают бумажный (из фольги) колпачок.

Бумажный колпачок обвязывают вокруг горлышка ниткой или закрепляют резиновым кольцом.

Чашки Петри, пипетки стерилизуют завернутыми в плотную оберточную бумагу или в пеналах.

При использовании специальной лабораторной посуды и расходных материалов (флаконов с завинчивающимися пробками, металлических или силиконовых колпачков, выдерживающих автоклавирование, микробиологических пробок многоразового использования и других материалов) следует руководствоваться рекомендациями производителя.

После стерилизации посуду хранят до использования в закрытом шкафу или ящиках с крышками не более 10 сут при ненарушенной упаковке или невскрытом пенале.

Пробирки и другую лабораторную посуду до стерилизации следует хранить в чистых коробках или ящиках столов, выложенных чистой фильтровальной бумагой. Сверху подготовленную посуду также следует прикрыть фильтровальной бумагой от пыли и случайной грязи.

Вымытые предметные стекла вытирают чистой салфеткой и помещают в склянку с притертой пробкой с 96%-ным спиртом или со смесью Никифорова (смесь этилового спирта и эфира в соотношении 1:1).

6.2 Подготовка и обработка емкостей для отбора проб при санитарно-вирусологическом анализе воды различного вида водопользования

Для отбора проб воды используют специально предназначенную для этих целей одноразовую стерильную посуду или стерильные емкости многократного применения с притертыми или завинчивающимися крышками, изготовленными из материалов, не влияющих на жизнедеятельность, не оказывающих инактивирующего действия на микроорганизмы и обеспечивающих неизменность состава пробы. Посуда (емкости) многократного использования должна быть изготовлена из материалов, выдерживающих стерилизацию паром и давлением (например, стеклянные бутыли объемом 1 л или пластиковые канистры объемом 10-20 л), а также обработку химическими и/или физическими методами.

Для отбора проб различного вида вод водопользования при санитарно-вирусологическом исследовании используются стерильные емкости:

— для анализа хозяйственно-бытовых сточных вод — стерильные емкости объемом 1 дм

;

— для анализа воды поверхностных водоемов, подземных вод, также питьевой воды централизованного и нецентрализованного водоснабжения — стерильные емкости объемом 10-20 дм

Стерилизацию лабораторной посуды сухим жаром проводят в суховоздушном шкафу одним из способов:

— при температуре (180±3)°С — в течение 1 ч с момента достижения указанной температуры;

— при температуре (160±5)°С — в течение 2,5 ч с момента достижения указанной температуры.

Материалы и лабораторную посуду (емкости), разрушающиеся при температуре от 160°С до 180°С (резина и т.п.), следует стерилизовать в паровом стерилизаторе при температуре (121±3)°С в течение 20 мин. После окончания анализа использованную лабораторную посуду (емкости) с содержимым обеззараживают автоклавированием при температуре (126±2)°С и давлении 0,15 МПа в течение 60 мин с момента достижения указанной температуры; при росте споровой микрофлоры — при температуре (132±2)°С и давлении 0,2 МПа в течение 90 мин с момента достижения указанной температуры.

При автоклавировании завинчивающиеся крышки не закручивают до конца, чтобы обеспечить замещение воздуха в бутыли паром во время повышения температуры. После стерилизации бутыли плотно закрывают завинчивающимися крышками.

После высушивания вирусологическую посуду многократного применения укладывают в металлические пеналы или заворачивают в бумагу. Бумага, используемая для обертывания лабораторной посуды, не должна разрушаться при стерилизации (например, пакеты из крафт-бумаги самоклеящиеся для паровой, воздушной, пароформальдегидной, этиленоксидной и радиационной стерилизации).

После окончания стерилизации лабораторная посуда маркируется с указанием даты стерилизации.

Срок хранения стерильной лабораторной посуды, укупоренной в бумагу или металлические пеналы, составляет не более 30 дней.

6.3 Обработка силиконовых пробок

Новые пробки кипятят в течение 30 мин в 2%-ном растворе бикарбоната натрия, многократно промывают горячей проточной водопроводной водой (кипячение и промывание повторяют дважды). Затем пробки кипятят 30 мин в дистиллированной воде, промывают и высушивают.

Пробки, бывшие в употреблении, после кипячения в 2%-ном растворе бикарбоната натрия ополаскивают проточной водопроводной водой, кипятят 30 мин в дистиллированной воде, ополаскивают дистиллированной водой, высушивают.

Резиновые пробки для флаконов заворачивают в бумагу или фольгу и стерилизуют автоклавированием по 6.1.

6.4 Порядок проведения контроля обсемененности флаконов, предназначенных для отбора проб

Контролю подвергаются все виды флаконов, используемые для отбора проб: стеклянные многоразового использования после стерилизации и пластиковые одноразового использования, поступающие стерильными от производителя.

Анализ проводят в боксе для разливки сред или в посевных комнатах (боксах) для посева питьевой воды.

Непосредственно перед исследованием проводят дезинфекционную обработку помещения (мытье бокса). После дезобработки включают дополнительно бактерицидные лампы в соответствии с 5.3.

Спецодежду для проведения анализа (халат, шапочку, четырехслойную марлевую маску) стерилизуют. Режим стерилизации спецодежды: автоклавирование при температуре (120±2)°С в течение 45 мин, (126±1)°С в течение 30 мин или при температуре (132±2)°С в течение 20 мин.

Перед входом в бокс сотрудник, проводящий испытания, тщательно моет руки теплой водой с мылом и щеткой, вытирает стерильно полотенцем, одевается в стерильный халат, шапочку, маску, надевает перчатки, обрабатывает их 70%-ным этиловым спиртом.

При наличии ламинарного укрытия исследование выполняют в спецодежде с использованием стерильных перчаток.

Во время испытаний проводят контроль воздуха на обсемененность в соответствии с процедурой, описанной в разделе 7. Результаты контроля заносят в протокол испытания.

6.4.1 Контроль обсемененности стеклянных флаконов для отбора проб при санитарно-бактериологическом анализе воды различного вида водопользования

Проводится контроль на общую обсемененность, контроль на наличие спор сульфитредуцирующих клостридий (кроме флаконов для отбора проб сточных вод).

При проведении контроля режимов суховоздушной стерилизации в полном объеме (биологический, термический, химический) с рекомендуемой периодичностью, контроль обсемененности стеклянных флаконов для отбора проб проводят не реже 1 раз в квартал.

Для каждого вида анализа отбирают флаконы в количестве 1%, но не менее 3 от общего количества партии стерилизованной посуды. Партией флаконов считают все флаконы, прошедшие стерилизацию за один цикл работы одного стерилизатора.

В случае получения результата, свидетельствующего о нестерильности хотя бы одного флакона, все партии флаконов, прошедшие обработку в данном стерилизаторе, бракуют. Забракованные партии флаконов подлежат повторной стерилизации. Выясняют возможные причины нарушения стерильности. Проводят комплексную проверку стерилизатора с одновременным использованием химического, термического (в 5 точках) и биологического контроля согласно 10.3.

Подготовительный этап

Для контроля используют:

— жидкую полноценную неселективную среду (питательный бульон, ГРМ-бульон и др.), проверенной ранее серии (раздел 11);

— плотную полноценную неселективную среду (питательный агар, ГРМ-агар и др.), проверенной ранее серии (раздел 11);

— железосульфитный агар, приготовленный согласно инструкции производителя отечественного или зарубежного производства, предназначенный для определения сульфитредуцирующих клостридий в воде;

— стерильные мембранные фильтры (нитрат- или ацетат-целлюлозные) для микробиологических целей с диаметром пор 0,45 мкм, проверенной ранее партии;

— стерильные чашки Петри диаметром 90 мм;

— стерильную водопроводную воду;

— спирт-ректификат 96%-ный для фламбирования;

— спирт-ректификат 70%-ный для дезинфекции.

Питательный бульон предварительно проверяют на стерильность. Для этого 2 пробирки от приготовленной партии среды инкубируют при температуре 37°С в течение 48 ч — учитывают наличие (отсутствие) пророста среды. При наличии пророста партию бульона выбраковывают. Контроль стерильности питательного агара и железосульфитного агара проводят в процессе исследования путем постановки отрицательного контроля.

Контроль на общую обсемененность проводят внося в исследуемые флаконы питательный бульон в количестве 20% от объема флакона (например, во флакон 500 см

вносят 100 см

питательного бульона). Флаконы закрывают стерильными резиновыми силиконовыми пробками и путем трехкратного покачивания или встряхивания обмывают всю внутреннюю поверхность флакона, включая пробку. Инкубацию посевов проводят при температуре (37±1)°С в течение (48±2) ч. При помутнении бульона во флаконе результат учитывают как «нестерильно». При сохранении прозрачности питательного бульона из каждого флакона отбирают по 1 см

и вносят в 2 стерильные чашки Петри, заливают питательным агаром при аккуратном покачивании и еще одну пустую стерильную чашку Петри с целью контроля среды заливают питательным агаром. Чашки с посевами инкубируют при температуре (37±1)°С в течение (48±2) ч. Наличие бактериального роста при условии отсутствия роста микроорганизмов в отрицательном контроле свидетельствует о нестерильности флакона. Результаты заносятся в протокол исследования.

Для контроля на наличие спор сульфитредуцирующих клостридий в исследуемые флаконы вносят 20% от объема емкости стерильную водопроводную воду (например, во флакон 500 см

вносят 100 см

воды). Флаконы закрывают стерильными резиновыми пробками и путем трехкратного покачивания или встряхивания обмывают всю внутреннюю поверхность флакона, включая пробку. Фильтровальную установку готовят по 5.11 и используют фильтрующие материалы по 5.12. В качестве отрицательного контроля проводят фильтрацию 100 см

стерильной водопроводной воды и затем через другой мембранный фильтр без дополнительного обжига установки фильтруют весь объем смыва с флакона. Стерильным пинцетом берут фильтр за два противоположных края и, согнув в виде трубочки, помещают в пробирку с горячим агаром, при этом сторона фильтра с осевшими бактериями должна быть обращена внутрь, а фильтр распрямляется и располагается по стенке пробирки. Сразу же после посева пробирку с агаром и фильтром для создания анаэробных условий быстро охлаждают, помещая в емкость схолодной водой. Культивируют посевы при (44±1)°С в течение 16-18 ч. При обнаружении черных колоний результат учитывают как «нестерильно».

6.5 Дистиллированная вода, применяемая в микробиологических лабораториях, и периодичность ее контроля должны соответствовать требованиям ГОСТ Р 58144.

Хранить дистиллированную воду следует в стеклянных или пластиковых бутылях, желательно с нижним сливом, закрытых крышками или пробками.

7 Санитарно-микробиологический контроль воздуха

7.1 Санитарно-микробиологический контроль воздуха в микробиологической и паразитологической лабораториях

7.1.1 Отбор проб

Санитарно-микробиологический контроль воздуха в микробиологической лаборатории.

Лабораторные исследования воздуха в помещениях на общее микробное число (ОМЧ) проводят ежедневно с целью получения оперативной информации о санитарном состоянии воздушной среды. Контроль воздуха осуществляют аспирационным или седиментационным методами.

При получении неудовлетворительных результатов контроля исследования воздуха в помещениях лабораторий, проводят исследование качественного и количественного состава микрофлоры, с которой работает лаборатория, в соответствии с проверяемыми объектами. После анализа полученных результатов проводят мероприятия, исключающие обсеменение воздуха и поверхностей, в том числе обработку поверхностей растворами дезинфицирующих средств, активных в отношении выявленной микрофлоры, и обработку воздуха и поверхностей ультрафиолетовым облучением.

7.1.2 Аспирационный метод

Отбор проб проводят в посевных комнатах лаборатории с помощью пробоотборных устройств воздуха для бактериологического анализа, разрешенных к применению в установленном порядке и поверяемых ежегодно аккредитованной организацией.

При переносе аппаратов и устройств для отбора проб воздуха из одного помещения в другое их поверхность обрабатывают раствором дезинфицирующего средства. Столик, внутренние стыки, крышку и прочие части прибора с внутренней и внешней стороны протирают 70%-ным спиртом. Аспирационный метод не применяется для контроля воздуха укрытий с ламинарным потоком.

7.1.3 Седиментационный метод

Контроль данным методом проводят в боксах и ламинарных шкафах. Две открытые чашки Петри с питательным агаром расставляют в боксах и ламинарных шкафах на 15 мин. После экспозиции чашки закрывают, переворачивают и помещают в термостат. Инкубируют при температуре (36±2)°С. Через (24±2) ч проводят учет количества выросших колоний.

7.2 Исследования бактериальной обсемененности воздушной среды

7.2.1 Исследования бактериальной обсемененности воздушной среды проводят в помещениях лаборатории на санитарно-микробиологические показатели: общее количество микроорганизмов; количество колоний S. aureus; количество плесневых и дрожжевых грибов. Количество колоний, выросших на чашках, подсчитывают и проводят пересчет на 1 м

воздуха (КОЕ/м

) по каждому показателю.

7.2.2 Количество пропущенного воздуха должно составлять 100 дм

для определения общего количества микроорганизмов, для определения дрожжевых и плесневых грибов и S. aureus — 250 дм

. Исследование воздуха седиментационным методом не допускается.

7.2.3 Для определения общего количества микроорганизмов в 1 м

воздуха забор проб проводят на питательный агар типа МПА, СПА, ГРМ-агар и др., приготовленные согласно инструкциям по применению. Посевы инкубируют при температуре (37±1)°С в течение (48±2) ч, подсчитывают количество выросших колоний и производят перерасчет на 1 м

воздуха. При наличии роста на этих чашках колоний дрожжевых и плесневых грибов их подсчитывают и делают перерасчет на 1 м

воздуха. В протоколе количество дрожжевых и плесневых грибов указывают отдельно.

7.2.4 Схема бактериологического исследования на стафилококк

Первый день

Для определения наличия S. aureus забор проб проводят на желточно-солевые среды на основе сред: элективно-солевой агар, стафилококк-агар, маннитолагар или среда N 10 по ГФ XII, агар Байд-Паркер. Чашки с посевами инкубируют в термостате при (36±2)°С в течение (48±2) ч.

Второй-третий день

На вышеуказанных средах стафилококк растет в виде круглых, блестящих, маслянистых, выпуклых, пигментированных колоний. Следует учитывать, что стафилококки, выделенные от человека, дают положительную лецитовителазную реакцию в 60-70% случаев. Снимают на скошенный агар для дальнейшего исследования не менее 2 колоний, подозрительных на стафилококк. Для исследования пересевают прежде всего колонии, дающие положительную лецитовителазную реакцию (образование радужного венчика). При отсутствии на чашкахтаких колоний дальнейшему исследованию подвергаются пигментированные колонии, схожие по морфологии со стафилококком. При одновременном наличии на чашках колоний стафилококка, отличающихся по пигменту, следует отвивать не менее двух колоний различного вида. Пробирки с посевом помещают в термостат при (36±2)°С на (24±2) ч.

Четвертый день

После инкубации у выделенных штаммов проверяют морфологию, тинкториальные свойства (окраска по Граму) и наличие плазмокоагулирующей активности в реакции плазмокоагуляции (РПК). Окраску по Граму проводят общепринятым методом. Если культура обладает только плазмокоагулирующей или только лецитовителазной активностью, то для окончательного ответа требуется учитывать другие признаки, позволяющие определить принадлежность штамма к виду S. aureus (ферментация маннита). При необходимости, после выделения чистой культуры, проводят определение чувствительности/устойчивости к антибиотикам, дезинфицирующим средствам, бактериофагам.

Пятый день

Учет результатов дополнительных тестов. Окончательная выдача ответа.

Исследования и учет результатов проводят по действующим нормативным документам. Полученные результаты должны регистрироваться в утвержденных по форме журналах (формулярах). В случаях превышения верхних лимитов бактериальной нагрузки в контролируемых помещениях, работы приостанавливаются. Проводят внеплановую генеральную уборку помещения с обработкой всех поверхностей дезинфицирующими средствами и обеззараживанием воздуха ультрафиолетовым облучением. Отбор повторяют после окончания проведенных мероприятий. Результаты регистрируются.

7.2.5 Для определения дрожжевых и плесневых грибов в воздухе используют отбор проб воздуха на среду Сабуро. Чашки с посевами термостатируют при температуре (24±1)°С в течение 5 сут дном вверх.

Через 3 сут термостатирования проводят предварительный учет типичных колоний или появления характерных признаков роста на жидких питательных средах.

Если в посевах на агаризованных средах присутствуют мукоровые, очень быстро растущие грибы, то снятие предварительных результатов необходимо проводить очень осторожно, не допуская того, чтобы споры этих грибов осыпались и дали рост вторичных колоний. Через 5 сут проводят окончательный учет результатов термостатирования посевов. Колонии дрожжей и плесневых грибов разделяют визуально.

Рост дрожжей на агаризованных средах сопровождается образованием крупных, выпуклых, блестящих, серовато-белых колоний с гладкой поверхностью и ровным краем. Развитие дрожжей в жидкой среде сопровождается появлением мути, запаха брожения и газа.

Развитие плесневых грибов на питательных средах сопровождается появлением мицелия различной окраски.

Для количественного подсчета отбирают чашки, на которых выросло от 15 до 150 колоний дрожжей и/или от 5 до 50 колоний плесневых грибов.

При необходимости для разделения колоний дрожжей и плесневых грибов проводят микроскопические исследования. Для этого из отдельных колоний или из посевов на жидкую среду готовят препараты методом раздавленной капли. На предметное стекло наносят каплю стерильной водопроводной воды. Затем в эту каплю прокаленной иглой вносится часть колонии или петлей наносят каплю культуральной жидкости. Полученная суспензия покрывается покровным стеклом.

Если при исследовании на питательных средах обнаружен рост дрожжей и плесневых грибов и их присутствие подтверждено микроскопированием, то данные фиксируют в журнале (формуляре) и проводят мероприятия, исключающие обсеменение воздуха и поверхностей плесневыми грибами. Затем проводят повторный отбор воздуха.

8 Санитарно-паразитологический контроль воздуха в паразитологической лаборатории

8.1 При получении неудовлетворительных результатов проб при осуществлении контроля проверяемых объектов каждая лаборатория самостоятельно определяет номенклатуру паразитологических показателей для контроля воздуха. Исследования обсемененности воздушной среды на яйца гельминтов и цисты простейших проводят в помещениях в зависимости от их функционального назначения, в соответствии с планом производственного контроля в паразитологических лабораториях, в которых возникает необходимость контроля воздушной среды по паразитологическим показателям.

8.2 Для сбора воздуха и пыли в лабораторных помещениях используют камеру, представляющую собой металлический цилиндр длиной 110-120 мм с внутренним диаметром 27 мм (по ширине стандартного предметного стекла). В стенке цилиндра имеется всасывающее отверстие размером 2

25 мм. Внутри цилиндра укреплены 2 стержня, фиксирующие предметное стекло в диаметральной плоскости и продольном направлении. С одного конца цилиндр закрывают съемной крышкой, а открытым концом присоединяют к патрубку пылесоса или другого всасывающего устройства (аспиратор, воздуходувка и т.п.).

На одну сторону чистого предметного стекла наносят тонкий слой 50% раствора глицерина в виде полоски шириной 1,5-2,0 см и длиной 4-5 см. Стекло вставляют в камеру так, чтобы смазанная глицерином поверхность была обращена к всасывающему отверстию камеры. Камеру закрывают крышкой. Затем включают пылесос или другое всасывающее устройство и производят отбор пыли. При отборе проб воздуха всасывающее отверстие камеры должно быть обращено к исследуемой поверхности на расстоянии 2-3 мм. Перемещать всасывающее устройство во время работы над поверхностью следует равномерно. На одну пробу собирают воздух и пыль с площади не менее 0,25 м

в течение 20 сек, воздуха — 60 сек. После отбора пробы пылесос или другое всасывающее устройство выключают, открывают камеру и извлекают предметное стекло. На смазанной стороне стекла будет отчетливо виден пылевой след, представляющий собой готовый препарат, который микроскопируют (при увеличении в 56-80 раз).

8.3 Если препарат получился плотным, его просветляют 1-2 каплями воды или 50% раствора глицерина. Под микроскопом среди пылевых частиц хорошо видны яйца гельминтов. Микроскопирование препаратов может производиться на обследуемом объекте сразу после отбора проб. Сбор проб пыли и воздуха непосредственно на предметное стекло, покрытое клейкой смазкой, исключает использование фильтров, центрифугирование, приготовление мазков и другие действия, во время которых могут быть потери яиц гельминтов или нарушение их целостности. Кроме того, использование клейких стекол ускоряет время отбора проб и позволяет сразу составить план мероприятий по предупреждению загрязнения и дегельминтизации внешней среды, если такие загрязнения будут выявлены.

9 Методы исследования микробной и паразитарной обсемененности поверхностей

9.1 Для контроля микробной контаминации рабочих поверхностей используется метод смывов.

9.1.1 Смывы берут перед работой не реже 1 раза в месяц на стафилококк и микроорганизмы, с которыми работает данная лаборатория. В лабораториях, проводящих паразитологические исследования, дополнительно берут смывы на наличие яиц гельминтов, цист и ооцист патогенных простейших и т.д. Пробы отбирают с поверхности рабочих столов, ручек ящиков на каждом рабочем месте, ручек и полок холодильников, термостатов, наружных деталей приборов, со стен бокса, с дверных ручек и т.д., определяя потенциально критические точки. Методы санитарно-паразитологического исследования смывов с поверхностей приведены в приложении Б.

9.1.2 Для контроля используют пробирки с 0,1%-ной пептонной водой, допускается стерильный физиологический раствор 0,85% или другая разрешенная транспортная среда с вмонтированными стерильными палочками с ватными тампонами на конце. Возможно использование стерильных зонд-тампонов (свабов, тупферов и т.д.) промышленного производства.

9.1.3 Тампоны смачиваются непосредственно перед взятием смыва. Затем смоченным тампоном протирают исследуемую поверхность. При контроле предметов с большой поверхностью смывы проводят с площади не менее 100 см

9.1.4 При применении дезинфицирующего агента используется нейтрализатор — стерильный раствор, химический состав которого зависит от действующих веществ дезинфицирующих средств:

— для галоидоактивных (хлор-, бром- и йодактивные) и кислородактивных (перекись водорода, ее комплексы солями, надуксусная кислота, озон) — 0,1-1%-е растворы тиосульфата натрия;

— для четвертичных аммониевых солей (алкилдиметилбензиламмоний хлорид, дидецилдиметиламмоний хлорид и др.), аминов производных гуанидина (полигексаметиленгуанидин гидрохлорид, хлоргексидин биглюконат и др.) — универсальный нейтрализатор, содержащий Твин 80 (3%), сапонин (0,3-3%), гистидин (0,1%), цистеин (0,1%);

— для альдегидов (глутаровый альдегид, глиоксаль, формальдегид, ортофалевый альдегид) — 1%-ный раствор пиросульфита (метабисульфита) натрия или указанный выше универсальный нейтрализатор;

— для кислот — щелочи в эквивалентном количестве;

— для щелочей — кислоты в эквивалентном количестве;

— для спиртов — вода;

— для композиционных средств — универсальный нейтрализатор;

— в случае если в состав дезсредства входят окислители, в нейтрализатор добавляют тиосульфат натрия (0,1-1%).

Пробы с отобранными смывами с поверхностей помещают в термостат и термостатируют при температуре (36±2)°С в течение 18-24 ч. Проросшие чашки не используют. Через сутки тампоном из пробирки со смывом пробы проводят несколько раз по поверхности питательной среды на двух параллельных чашках Петри, затем чашки Петри помещают в термостат для инкубации и проводят исследования.

9.2 Методика исследования смывов на бактериальную обсемененность поверхностей бактериями группы кишечной палочки (БГКП)

9.2.1 В пробирку с 5 см

среды Кесслер или Кода переносят 0,2-0,3 см

смывной жидкости. Посевы инкубируют при (36±2)°С в течение 24±2 ч. При использовании среды Кесслер высев со всех пробирок проводят на сектора со средой Эндо, а при использовании среды Кода высев на Эндо только с пробирок с изменившимся цветом среды. Посевы инкубируют при (36±2)°С в течение 24±2 ч. Выросшие колонии окрашивают по Граму или ставят тест Грегерсена, определяют отношение к оксидазе. Грамотрицательные, оксидазотрицательные культуры (проводят в соответствии с ГОСТ 31955.1) отсевают на глюкозопептонную среду с поплавком (ватой) или полужидкий агар Гисса с глюкозой. Инкубируют при (36±2)°С в течение 24±2 ч. Учет проводят по ферментации глюкозы до кислоты и газа, в результате записывают — «БГКП обнаружены».

9.3 Методика исследования смывов для обнаружения стафилококков

9.3.1 Объем 0,2-0,3 см

смывной жидкости засевают в пробирку с 5,0 см

6,5%-ного солевого бульона. Инкубируют при (36±2)°С в течение 24±2 ч. Из каждой пробирки делают высев на сектора чашки Петри с одной из сред, разрешенных к применению в установленном порядке для выращивания стафилококка (ЖСА, агар Байд-Паркер и другие). Инкубируют в термостате при (36±2)°С в течение 48±2 ч.

9.3.2 У выросших микроорганизмов определяют отношение к окраске по Граму, способность коагулировать плазму крови кроликов, образовывать каталазу, ацетон, ферментировать мальтозу в аэробных условиях. Вместо мальтозы можно использовать маннит.

9.3.3 Если в посеве обнаружены характерные колонии микроорганизмов, являющиеся грамположительными кокками, обладающими лецитиновой и плазмокоагулирующей активностью, образующими каталазу, ферментирующими мальтозу (или маннит) в аэробных условиях, выдается ответ: «Staphylococcus aureus обнаружен». Если из вышеперечисленных признаков отсутствует лецитиназная или плазмокоагулирующая способность, в ответе следует указать: «Обнаружен коагулазоположительный стафилококк, не обладающий лецитиназной активностью» или «Обнаружен лецитиназоположительный стафилококк, не обладающий плазмокоагулирующей активностью».

9.4 Методика исследования смывов для обнаружения синегнойной палочки

Объем 0,2-0,3 см

смывной жидкости засевают в пробирку с 5,0 см

с накопительной средой для синегнойной палочки и стафилококков N 9, средой Бонде и другими разрешенными к применению в установленном порядке средами для выращивания синегнойной палочки. Инкубируют при (36±2)°С в течение 24±2 ч. Высев на сектора одной из сред, разрешенных к применению в установленном порядке для выращивания синегнойной палочки, инкубируют при (36±2)°С 24±2 ч:

— на среде N 9 — обнаруживается пигмент синегнойной палочки пиоцианин;

— на среде «Блеск» — колонии сплошь покрыты золотистым налетом или имеют золотистые вкрапления, максимально проявляется пигмент через 42±2 ч;

— на агаре стриклозаном бактерии вида Pseudomonas aeruginosa образуют колонии синие, сине-зеленые, желто-зеленые или зеленые;

— на агаре с цетримидом бактерии вида Pseudomonas aeruginosa образуют колонии голубого, сине-зеленого, желто-зеленого цвета или могут быть непигментированными.

Для последующей идентификации подозрительные колонии пересевают на скошенный агар.

9.5 Методика исследования смывов для обнаружения плесневых и дрожжеподобных грибов

Исследования и учет результатов проводят по 7.2.5.

9.6 Методы исследования паразитарного загрязнения поверхностей

9.6.1 Определение загрязнения возбудителями паразитарных болезней лабораторных поверхностей (стены, столы, поверхности микроскопа, лабораторное оборудование, ручки кранов, рабочие поверхности вытяжных шкафов, халатов, спецодежды, рук персонала и т.д.) проводится не реже 1 раза в месяц, отбирается не менее 10 проб смывов с поверхностей на 1 помещение, в котором проводятся паразитологические исследования в соответствии приложением Б. При взятии проб необходимо соблюдать определенную очередность. Например, пробы вначале берут в комнатах с рабочих поверхностей, оборудования, столов, рук персонала, затем с кранов раковин, дверных ручек и в санузле лаборатории.

9.6.2 Для отбора смывов применяют кисточки из плотной щетины (типа беличьих), смоченные в 1%-ном растворе едкого натра, или в 10%-ном растворе глицерина, или 1%-ном растворе стирального порошка. В центрифужные пробирки наливают до половины объема 10%-ный раствор глицерина.

9.6.3 Для каждой группы лабораторных предметов или поверхностей берут отдельную промаркированную центрифужную пробирку и кисточку, которые нумеруются (номер кисточки и пробирки должны совпадать). В одну пробу, т.е. в пробирку, рекомендуется собирать смывы с нескольких однородных предметов.

9.6.4 Смывы с рук персонала берут у каждого отдельно, чтобы при обнаружении яиц гельминтов или/и цист/ооцист кишечных простейших можно было знать, какой именно сотрудник нарушает правила гигиены.

Для снятия яиц гельминтов с рук рекомендуется мыть их раствором питьевой соды или 1%-ным раствором едкого натра; смывные воды центрифугируют, осадок можно также профильтровать в аппарате Гольдмана и затем исследовать фильтры.

При взятии смывов с поверхностей кисточкой, смоченной в растворе, многократно и с нажимом проводят по поверхности однородных предметов обследуемого объекта (поверхности микроскопов, столы рабочие, подоконники, ручки дверей и др.). Причем кисточку в процессе отбора часто и тщательно ополаскивают в пробирке и вновь делают смывы с поверхности предметов. Площадь исследуемой поверхности для одной пробы смывов составляет не менее 0,25 м

(0,5

0,5 м). После отбора проб пробирки с вложенными в них кисточками в штативах доставляются на исследование.

9.6.5 Исследование смывов на яйца гельминтов. Метод центрифугирования

Ход исследования

Кисточки со смывами ополаскивают в жидкости пробирки. Центрифугируют полученные пробы в этих же пробирках, надосадочную жидкость сливают. Осадок помещают на предметное стекло и микро-скопируют. Плотный осадок делят на несколько предметных стекол.

9.6.5.1 Исследование смывов на яйца гельминтов

Ход исследования

В пробирку со смывом добавляют 5-6 см

флотационного раствора, в котором тщательно и многократно промывают кисточку в течение 3-5 мин вертикальными и круговыми движениями, после чего кисточку сразу удаляют из пробирки.

В пробирку доливают флотационный раствор до образования выпуклого мениска, накрывают ее обезжиренным покровным стеклом до полного соприкосновения с поверхностной пленкой раствора. Время экспозиции 12-15 мин. При использовании флотационного раствора хлорида натрия — 20-25 мин. Затем покровное стекло снимают пинцетом и полученную висячую каплю на покровном стекле аккуратно переносят на предметное стекло в каплю 50%-ного раствора глицерина. Полученный препарат микроскопируют при 80-150-кратном увеличении.

Готовить пробы к исследованию одновременно следует партиями не более 5-6 пробирок, так как при большом количестве пробирок увеличивается время экспозиции, и яйца, поднявшиеся в поверхностную пленку, покрываются кристаллами соли, что затрудняет их обнаружение.

Методы исследования смывов на цисты/ооцисты простейших представлены в приложении Б.

9.7 Санитарно-вирусологический методы исследования поверхностей в вирусологических лабораториях

Взятие смывов с объектов окружающей среды на предприятиях, тары, упаковки пищевых продуктов проводят в соответствии с методическими указаниями, используя стерильные зонды (коттоны). Зонд осторожно смачивают в фосфатно-солевом буфере (PBS), налитом в микроцентрифужные пробирки по (490±5) мкл, отжимают о край пробирки для удаления излишков фосфатно-солевого буфера (PBS) и отбирают смыв с обследуемой поверхности площадью 100 см

, используя один или несколько трафаретов, слегка нажимая на зонд для лучшего сбора вирусных частиц. Сразу после забора смыва зонд помещают обратно в пробирку, интенсивно вращают в пробирке и вновь отжимают об ее край для максимального удаления раствора из зонда. Данная процедура повторяется трехкратно.

Смывы в микроцентрифужных пробирках в фосфатно-солевом буфере (PBS) готовы для экстракции рибонуклеиновой кислоты (РНК) (выделение из 200 мкл образца). Смывы хранению не подлежат и сразу направляются на исследование с использованием методов амплификации нуклеиновых кислот на наличие энтеровирусов человека, вирусов гепатита А, ротавирусов, норовирусов.

10 Порядок проведения контроля качества осуществления стерилизации и обеззараживания

Плановый контроль работы всех стерилизаторов в объектах надзора проводят в порядке государственного санитарного надзора не реже 2 раз в год. Самоконтроль работы стерилизатора проводят при каждой загрузке аппарата.

Критическими параметрами, существенными для достижения надежной стерилизации и требующими контроля, являются:

— для паровой стерилизации — температура стерилизации, время стерилизационной выдержки и наличие насыщенного водяного пара;

— для воздушной стерилизации — температура стерилизации и время стерилизационной выдержки.

Контроль температурного параметра режимов работы паровых стерилизаторов осуществляют с использованием термометра ртутного стеклянного максимального с диапазоном измерения от 0 до 150°С (ТП-7). Погрешность измерения не должна превышать ±1°С.

Упакованные термометры нумеруют и размещают в контрольные точки 1 и 2 камеры паровых стерилизаторов в соответствии с 10.1.

По окончании цикла стерилизации регистрируют показания термометров и сопоставляют их между собой, а также с номинальной температурой стерилизации, и фиксируют показания в журнале.

Давление в стерилизационной камере парового стерилизатора измеряют при помощи мановакуумметра. Класс точности мановакуумметра должен быть не ниже 2,5. Предел измерения от 0,1 до 0,5 МПа (от 1 до 5 кгс/см

Ежедневно перед началом рабочей смены проводят визуальный контроль состояния уплотнителей камеры стерилизатора. При работе стерилизатора осуществляют контроль за отсутствием выпуска пара из-под уплотнителя и установку давления на манометре парового стерилизатора.

Не допускается использование одного стерилизатора для режимов стерилизации лабораторной посуды, одежды и питательных сред и обеззараживания патогенного материала.

10.1 Химический тестовый контроль режимов паровой стерилизации

Химический контроль проводят каждый цикл. Для контроля используют бумажные индикаторы стерилизации 4-5 класса (НПФ «Винар» или аналог) в соответствии с ГОСТ Р ИСО 15882 или запаянную ампулу или трубку, заполненную смесью химического соединения с органическим красителем или только химическим соединением (веществом), изменяющим цвет при достижении определенной для него температуры, позволяющие обнаружить несоблюдение условий стерилизации, обусловленное технической неисправностью стерилизаторов, нарушением правил их загрузки и упаковывания изделий, ошибкой в установке параметров режимов или их сбоем.

Методика контроля паровой стерилизации

В контрольных точках рабочей камеры укладывают индикаторные полоски или ампулы, которые прикрепляются снаружи стерилизационной упаковки или на бирке стерилизационной коробки во всех контрольных точках (см. таблицу 1) или внутри стерилизуемых изделий.

Таблица 1 — Число контрольных точек в зависимости от емкости камеры


Емкость камеры парового стерилизатора (дм )	Число контрольных точек в стерилизационной камере
100	5
100-750	15
Св. 750	20

Для паровых стерилизаторов с камерой емкостью до 100 дм

контрольные точки для размещения индикаторных полосок или ампул располагают:

— в горизонтальном паровом стерилизаторе точка 1 должна находиться у загрузочной двери, точка 2 — у противоположной стенки, точки 3-5 должны быть равномерно распределены по длине;

— в вертикальном паровом стерилизаторе точка 1 должна находиться в верхней части камеры, точка 2 — в нижней части камеры, точки 3-5 должны быть равномерно распределены по высоте камеры.

В точках 1 и 2 индикаторные полоски или ампулы располагают вне стерилизуемых изделий. В остальных точках индикаторные полоски или ампулы располагают в центре и прикрепляют к изделиям, подготовленным для стерилизации.

Для паровых стерилизаторов с камерой емкостью свыше 100 дм

точки 1 и 2 располагают, как указано выше, а остальные — равномерно распределяют по длине (высоте) горизонтального (вертикального) парового стерилизатора.

Методика контроля суховоздушной стерилизации

В контрольных точках рабочей камеры укладывают герметично запаянные ампулы-флаконы с химическим тестовым веществом или индикаторные полоски (см. таблицу 2), которые прикрепляют к упаковкам или стерилизуемым изделиям.

Таблица 2 — Число контрольных точек в зависимости от емкости камеры


Емкость камеры воздушного стерилизатора (дм )	Число контрольных точек в стерилизационной камере
До 80	5
Св. 80 однокамерные	15
Св. 80 двухкамерные	30

В случае 5 точек — точка 1 располагается в центре камеры, а точки 2, 3, 4 и 5 располагаются в нижней части камеры по углам. Точки 2 и 5 находятся перед загрузочной дверью справа и слева (соответственно), а точки 3 и 4 в глубине камеры у задней стенки также справа и слева.

В случае 15 точек — точки 1, 2 и 3 располагаются в центре камеры на трех уровнях (полках) сверху вниз соответственно, а точки 4-15 по углам также на трех уровнях (точки 4-7 — низ; точки 8-11 — середина; точки 12-15 — верх). Угловые точки нумеруются против часовой стрелки, начиная с правого ближнего угла.

В случае 30 точек — расположение как для 15 точек повторяется для каждой камеры.

Каждая контрольная точка должна быть расположена на расстоянии не ближе 5 см от стенок камеры.

Учет результатов

По окончании цикла стерилизации цвет индикаторной метки индикаторов сравнивают с цветом эталона. При соблюдении условий паровой и суховоздушной стерилизации в точке размещения индикатора индикаторная метка изменяет свой цвет на темно-фиолетовый, соответствующий цвету эталона (конечный цвет) или темнее его. Если индикаторная метка полностью или частично сохранила красно-оранжевый цвет или в пробирке остался нерасплавленный химический тест в какой-либо точке, то указывают на неэффективную стерилизацию. При обнаружении неудовлетворительной работы стерилизатора партию стерилизуемых объектов считают непростерилизованной.

«Наружные» индикаторы подлежат осмотру непосредственно после завершения цикла стерилизации с последующим подклеиванием в журнал контроля работы стерилизаторов.

«Внутренние» индикаторы подлежат осмотру после вскрытия стерилизационной упаковки/стерилизационной коробки перед применением стерилизованных изделий. Эти индикаторы подклеивают в журнал контроля после использования стерильных упаковок.

10.2 Термический контроль

Термический контроль проводят 2 раза в месяц. Для контроля используют поверенный максимальный термометр с ценой деления не более 1°С и диапазоном измерений, превышающим контролируемую температуру. Термометр размещают в середине стерилизационной камеры. После окончания цикла стерилизации и остывания снимают показания термометра. Для определения истинного значения максимальной температуры цикла стерилизации к снятому с термометра показанию прибавляют соответствующую поправку, указанную в паспорте на данный термометр.

Результаты заносят в журнал по регистрации режимов стерилизации и заверяют подписями исполнителя.

10.3 Биологический контроль

Биологический контроль осуществляется 2 раза в год. При выполнении биологического контроля используют биотесты, предназначенные для конкретного вида паровой или суховоздушной стерилизации, разрешенные к применению на территории РФ. Бактериологический метод контроля предназначен для контроля эффективности работы стерилизаторов на основании выявления гибели спор тест-культур.

Процедуру контроля осуществляют в соответствии с паспортом биотеста. Пронумерованные пакеты с биотестами размещают в контрольных точках стерилизатора. Количество контрольных точек и правила размещения тестов указаны в 10.1. После завершения процесса стерилизации в пробирки с биотестами асептически вносят 0,5 см

прилагаемой к набору питательной среды, начиная со стерильной пробирки для контроля питательной среды и заканчивая контрольным тестом, не подвергавшимся стерилизации (контроль культуры). Далее осуществляют инкубацию пробирок согласно паспорту на набор.

После термостатирования проводят учет изменения цвета питательной среды. В отрицательном контроле (стерильная пробирка) цвет среды не должен измениться. В пробирке с контролем культуры цвет среды должен измениться на цвет, указанный в паспорте, что свидетельствует о наличии жизнеспособных спор.

Работа парового стерилизатора считается удовлетворительной, если цвет питательной среды во всех биотестах, подвергавшихся стерилизации, остался неизменным. Если цвет изменился хотя бы в одном тесте, стерилизация признается неэффективной.

Результаты заносят в журнал по регистрации режимов стерилизации и заверяют подписью исполнителя.

10.4 Обеззараживание отходов с применением СВЧ-установки

Отходы в микробиологических лабораториях, соответствующие классу опасности Б, собираются непосредственно на местах их образования в одноразовые полимерные термостойкие пакеты с красной или желтой маркировкой, которые предварительно помещают внутрь стандартных жестких, термостойких, герметично закрывающихся полимерных баков (контейнеров) многоразового использования (поставляются в комплекте с СВЧ-установкой). Герметично закрытые в баках (контейнерах) отходы доставляются к месту их обеззараживания в СВЧ-установке. Предварительной дезинфекции отходов не требуется.

Кроме СВЧ-установки для обеззараживания отходов применяются методы в соответствии с [1].

Порядок работы на местах сбора медицинских отходов:

— термостойкие пакеты с красной или желтой маркировкой расправляются и вкладываются внутрь стандартных термостойких контейнеров-баков;

— верхние кромки пакета отгибают наружу за края бака;

— готовится рабочий раствор сенсибилизатора: в отдельную емкость наливают 2 дм

воды и добавляют 1 столовую ложку концентрата сенсибилизатора;

— на дно пакета наливают 300-500 см

рабочего раствора сенсибилизатора;

— производят сбор инфицированных отходов и укладку их (без уплотнения) в приготовленный пакет (бак).

10.4.1 Контроль эффективности обеззараживания отходов осуществляется термохимическим и бактериологическим методами. Для контроля применяются в установке одноразовые индикаторы с липким слоем с нанесенными на них двумя цветными метками — индикаторной меткой и эталоном сравнения.

Пример — В качестве индикаторов может быть использован СанИС-3 132/90 (134/60) или аналоги.

Красно-оранжевый цвет индикаторной метки необратимо меняется в зависимости от соблюдения или несоблюдения требуемых условий дезинфекции.

Темно-фиолетовый эталон сравнения показывает конечный цвет индикаторной метки при соблюдении условий дезинфекции.

При соблюдении условий дезинфекции в точке размещения индикатора индикаторная метка изменяет свой цвет на темно-фиолетовый, соответствующий цвету эталона (конечный цвет) или темнее его.

Если индикаторная метка полностью или частично сохранила красно-оранжевый цвет, то условия дезинфекции не были соблюдены.

При получении неудовлетворительного результата контроля проверяют правильность установки параметров и соблюдение правил и норм загрузки в соответствии с инструкцией по эксплуатации. Установку разрешается использовать после устранения причин неудовлетворительной работы и получения положительных результатов контроля. Использованные индикаторы подклеиваются в журнал контроля работы СВЧ-установки в выделенные для этого колонки.

Контроль обеззараживания отходов в установке с помощью термохимических индикаторов осуществляется при каждой закладке с дальнейшей регистрацией результатов в журнале (формуляре).

Бактериологический метод контроля работы установки осуществляется с помощью типовых биотестов. Биотесты размещают в контрольные точки среди обеззараживаемого материала (3-5 точек на разных уровнях).

После окончания процесса обеззараживания биотесты высевают на питательные среды.

Контроль с помощью биотестов проводится не реже 2 раз в год, и результаты также регистрируются в установленном порядке.

11 Порядок проведения контроля за питательными средами

Контроль качества питательных сред должен осуществляться на всех этапах технологического процесса, начиная от момента закупки среды до непосредственного использования в анализе и включать следующие этапы:

— проверку документации и визуальный контроль питательных сред при их получении;

— контроль условий и сроков хранения питательных сред;

— контроль питательных сред на этапе приготовления;

— контроль биологических свойств питательных сред;

— контроль на этапе использования питательных сред.

Применение питательных сред без подтверждения их качества не допускается. Результаты выполнения процедур контроля качества должны быть документально зафиксированы.

11.1 Проверка документации и визуальный контроль питательных сред

Контроль осуществляют при каждом поступлении в лабораторию новых сред.

Обязательным условием поставки питательных сред является наличие следующих сопроводительных документов:

— регистрационного удостоверения;

— паспорта отдела контроля организации-изготовителя на реализуемую серию препарата;

— инструкций по применению на русском языке;

— этикеток на русском языке.

Среды импортного производства должны иметь сертификаты качества серии ИСО 9000.

При получении питательных сред необходимо проверить целостность упаковки (оценивается визуально) и наличие сопроводительной документации, которая должна содержать следующую информацию:

— название среды и ее назначение;

— название предприятия-изготовителя;

— номер серии;

— номер протокола контрольных испытаний;

— дату изготовления;

— срок годности;

— состав среды;

— условия хранения;

— рецептуру приготовления;

— описание внешнего вида и консистенции сухой и готовой среды;

— условия и длительность хранения готовой среды.

Обо всех обнаруженных отклонениях необходимо сообщить руководителю лаборатории.

11.2 Контроль условий и сроков хранения питательных сред

Данный этап контроля позволяет обеспечить правильность и постоянство условий хранения сред, а также своевременное пополнение их запаса.

Визуальный контроль питательных сред осуществляют 1 раз в неделю на отсутствие пророста, изменение цвета и прозрачности.

Сухие питательные среды и реактивы, если не указаны особые условия хранения, необходимо поместить в сухое, защищенное от света место, с температурой воздуха 10-25°С.

Материалы, требующие пониженной температуры хранения, необходимо поместить в холодильник с соответствующей степенью охлаждения.

Особое внимание следует уделить сохранению герметичности вскрытых упаковок со средами, так как повышение влажности и комкование сухой питательной среды существенно ухудшает ее качество. Если питательная среда упакована в пакет из ламинированной бумаги и весь объем среды не используется за 1 раз, то после вскрытия пакета оставшуюся часть среды желательно перенести в чистую сухую емкость оранжевого стекла (или другого светозащитного инертного материала) с плотно закрывающейся крышкой.

Готовые питательные среды хранят при температуре 2-8°С. Срок хранения готовой питательной среды определяется изготовителем.

Сухие питательные среды с истекшим сроком годности, но с не изменившимся цветом и консистенцией, подвергают количественным методам контроля питательных сред по биологическим показателям с целью принятия решения о продлении срока годности.

Все приготовленные среды следует промаркировать с указанием названия среды, а также даты приготовления и срока годности. Дату приготовления питательной среды заносят в журнал.

Параметры микроклимата в местах хранения питательных сред проверяют ежедневно и результаты проверки заносят в журнал (формуляр) и заверяют подписью исполнителя.

11.3 Контроль питательных сред на этапе приготовления

Для приготовления питательных сред и растворов, используемых в микробиологическом анализе, допускается применение химических веществ по степени чистоты не ниже ЧДА. Требования к качеству воды для приготовления питательных сред для микробиологических анализов изложены в ГОСТ Р 58144.

При условии, что приобретена продукция надлежащего качества, одним из основных факторов, определяющих качество и дальнейшую пригодность питательной среды, является правильность ее приготовления.

Приготовление сред должно осуществляться со строгим соблюдением рецептуры приготовления и условий стерилизации, определенных изготовителем.

Контроль питательных сред на этапе приготовления включает:

— оценку внешнего вида готовой среды;

— измерение pH готовой среды;

— определение стерильности (отсутствия контаминации) готовой среды;

— постановку качественного контроля биологических свойств среды (раздел 11).

Контроль питательных сред на этапе приготовления проводят при каждом приготовлении среды.

11.3.1 Оценка внешнего вида готовой среды (визуальный контроль)

Оценку внешнего вида питательной среды проводят визуально по ниже приведенным параметрам.

Цвет, прозрачность и консистенция сухой и приготовленной среды должны быть типичны для данного продукта и соответствовать описанию изготовителя. Несоответствие заявленным в паспорте параметрам среды свидетельствует о ее непригодности.

Некоторыми очевидными ошибками при приготовлении сред являются:

— потемнение среды вследствие перегревания и недостаточного перемешивания;

— неполное растворение порошкообразной среды;

— образование осадка.

В агаризованных средах осадок может образовываться вследствие продолжительной стерилизации, повторных плавлений твердого агара или длительного содержания расплавленного агара при высокой температуре. В этих случаях появление осадка свидетельствует о непригодности питательной среды.

Кроме того, агаризованные среды могут образовывать хлопьевидный осадок, если расплавленная среда остается в водяной бане при температуре от 43 до 45°С более 30 мин, вследствие начинающегося процесса застывания агара. Такой хлопьевидный осадок агара можно рассеять путем повторного нагревания среды до 60°С. Если осадок не рассеялся, это свидетельствует о непригодности питательной среды.

11.3.2 Измерение pH

Значение водородного показателя определяют с помощью pH-метра по 5.10. Возможно использование бумажной индикаторной системы с шагом измеряемого диапазона не более 0,3 единиц при промежуточных измерениях в ходе приготовления питательной среды.

В готовых жидких средах и гидролизатах определение pH проводят непосредственно в растворе.

В готовых плотных агаровых средах pH определяют после их охлаждения до 45-50°С. При этом необходимо особо тщательно отмывать электрод после измерения pH в агаризованных средах теплой дистиллированной водой.

11.3.3 Определение стерильности

Определение стерильности (для стерилизуемых сред) и отсутствия контаминации (для нестерилизуемых сред) проводят путем инкубации чашки или пробирки с исследуемой средой в термостате, при температуре и в течение времени, определенных для этих сред методическими документами по исследованию воды.

По истечении срока инкубации на (в) исследуемых питательных средах должны отсутствовать визуально определяемые признаки роста микроорганизмов. Результаты регистрируют в журнале.

11.4 Контроль биологических свойств питательных сред

Оценка биологических (ростовых) свойств питательных сред проводится по следующим показателям.

Чувствительность — максимальное разведение тестовой культуры, при котором на всех засеянных чашках (во всех пробирках) обнаруживается рост.

Скорость роста — минимальное время инкубации после посева культур, достаточное для визуального выявления роста (выражается в часах).

Дифференцирующие свойства — оцениваются по выраженности основных отличительных признаков, характеризующих рост тестовых штаммов на данной питательной среде.

Кроме того, для дифференциальных сред необходимо определять ингибирующее действие среды. Ингибирующее действие среды определяется как в отношении основного тестового микроорганизма, так и по отношению к сопутствующим микроорганизмам.

Оценка ингибирующих свойств не проводится для жидких и полужидких сред (например, для полужидких сред Гисса, лактозопептонной среды, глюкозопептонной среды).

Оценка ингибирующих свойств проводится по двум показателям:

— процент извлекаемости — процентное соотношение среднего значения количества колоний, выросших на исследуемой среде, к среднему значению количества колоний, выросших на контрольной среде;

— показатель ингибиции — степень подавляющего воздействия на постороннюю микрофлору, выражается минимальным разведением, при котором полностью отсутствует рост посторонней флоры.

Основным тестовым микроорганизмом для оценки биологических свойств среды, используемых для текущего санитарно-бактериологического контроля воды, является E. coli. Дополнительно используются следующие тест-штаммы:

— для выявления дифференцирующих свойств среды — Salmonella typhimurium (на среде Эндо круглые, бледно-розовые колонии) или Shigella sonnei «S-form» (на среде Эндо круглые, прозрачные, бледно-розовые) в качестве вида, не ферментирующего лактозу; Enterococcus faecalis; Pseudomonas aeruginosa или Pseudomonas fluorescens; Staphylococcus aureus; Aspergillus brasiliensis; Candida albicans;

— при определении показателя ингибиции посторонней микрофлоры, например на среде Эндо — Staphylococcus aureus.

Контроль биологических свойств готовых питательных сред включает два этапа: качественный и количественный контроль, каждый из которых имеет свое целевое предназначение.

Задачей качественного контроля является выявление грубых нарушений технологии приготовления, приводящих к выраженному снижению ростовых и/или дифференцирующих свойств. Качественный контроль проводят после каждой варки среды.

Количественный контроль позволяет выявлять относительные изменения (ухудшение) ростовых свойств из-за ряда причин, возникающих на этапах транспортирования, хранения, приготовления, стерилизации, а также при изменении технологических требований в процессе производства питательных сред, в результате которых они оказываются менее эффективными.

Количественный контроль выполняется:

— при поступлении каждой новой партии среды;

— при необходимости решения вопроса о продлении срока годности среды либо возможности ее дальнейшего использования в случае выявления нарушений условий хранения.

Учитывая, что разные серии питательных сред одного производителя иногда имеют различие по качеству, контролю подлежит каждая серия среды поступившей партии.

Количественный контроль также может служить инструментом выбора более эффективной среды серии продукции, предлагаемой на современном рынке.

11.4.1 Качественный контроль

В процессе качественного контроля оценивают принципиальную способность основного тестового штамма расти на данной среде, а также наличие характерных дифференцирующих признаков для специфических сред.

Качественный контроль выполняется лабораторией после каждой варки питательной среды.

11.4.1.1 Методика исследования

Накануне исследования тестовую культуру готовят, как указано в 13.3.4.

Контроль выполняют путем посева тестового штамма в жидкие, полужидкие или на плотные питательные среды с помощью общепринятых методик. Для плотных сред метод посева должен обеспечивать получение изолированных колоний микроорганизмов (например, метода «штриха»). Пробирки и чашки с посевами инкубируют в термостате при (36±2)°С в течение 18-24 ч.

11.4.1.2 Оценка результатов качественного контроля

Среду считают пригодной, если по истечении срока инкубации тестовый штамм дает хорошо различаемый рост, со всеми типичными для него отличительными признаками, которые предполагается выявлять на данной среде.

Этими признаками могут быть: помутнение жидкой или полужидкой среды, изменение цвета, образование газа, отличительная форма, структура, окраска колоний, наличие и диаметр зоны изменения цвета и прозрачности среды вокруг колоний. Результаты качественного контроля заносят в журнал.

11.4.2 Количественный контроль

Выполнение количественного контроля должно осуществляться лабораторией, имеющей лицензию на работу с необходимыми патогенными микроорганизмами, аттестованной (аккредитованной) в этой области и располагающей персоналом соответствующей квалификации.

11.4.2.1 Подготовительный этап

11.4.2.1.1 Питательные среды

Для исследования следует использовать свежеприготовленные среды одной варки. Исследуемые и контрольные среды готовят согласно инструкции изготовителя.

Среды, предназначенные для прямого поверхностного посева, разливают в чашки Петри слоем не менее 2 мм и предварительно асептически подсушивают одним из следующих способов.

Перевернутые чашки Петри с открытыми крышками выдерживают в термостате или сушильном шкафу при температуре 25-50°С до исчезновения капель влаги с поверхности агара. Не пересушивать.

Закрытые неперевернутые чашки Петри выдерживают в ламинарном боксе в течение ночи.

Во избежание загрязнения и когда слои среды высушивают не в ламинарном боксе, среду всегда высушивают таким образом, чтобы поверхность среды, инокуляция которой будет проводиться, была перевернута вниз.

В качестве неселективной среды при определении ингибирующихи дифференцирующих свойств контролируемой среды, используют мясопептонный агар, питательный агар, ГРМ-агар, триптон-соевый агар или их аналоги.

11.4.2.1.2 Разбавитель

Для исследования необходимо использовать стерильный физиологический раствор, содержащий 0,1% (по массе) пептона. При невозможности приготовления данного разбавителя допускается использование стерильного физиологического раствора без пептона.

11.4.2.1.3 Подготовка инокулята

За 2 дня до исследования тестовую культуру микроорганизма пересевают со среды хранения на скошенный питательный агар согласно 13.3.4. На следующий день из полученной агаровой культуры с использованием стандарта мутности готовят суспензию тестового штамма в стерильном разбавителе с концентрацией 109 кл/см

и десятикратные серийные разведения (по 8-е разведение включительно), согласно разделу 12.

Для контроля разбавления из 6-го и 7-го разведений высевают по 0,1 см

(100 мкл) суспензии прямым поверхностным посевом на чашки с питательным агаром. Из каждого разведения делают по три таких посева. После высева пробирки с разведениями немедленно переносятся в холодильник. Чашки с посевами инкубируют в термостате при (36±2)°С в течение 18-24 ч.

В день исследования для каждой серии посевов подсчитывают среднее число колоний, выросшее на трех чашках. При правильно выполненном разведении среднее количество колоний, выросших при посеве 0,1 см

суспензии тестового микроорганизма из 6-го разведения, должно составлять около 100 КОЕ. Соотношение полученных средних значений при посеве из 6-го и 7-го разведений должно быть близко к 10:1.

В случае если концентрация микроорганизмов в разведениях значительно отклоняется от расчетной и/или не соблюдена кратность разведения, данный инокулят тестового штамма непригоден для дальнейшего использования. Подготовку инокулята необходимо повторить.

Для показателей, требующих определения количества внесенных микроорганизмов, рассчитывают посевную дозу. Посевная доза — объем конкретного разведения, содержащий необходимое для посева количество жизнеспособных клеток тестового микроорганизма. В контрольном посеве должно вырастать не менее 25 колоний. Расчет дозы выполняют основываясь на ранее определенных концентрациях тестового микроорганизма в 6-м и 7-м разведениях, исходя из требований, что посев на одну чашку не должен превышать 50-100 микробных клеток. При правильно выполненном разведении посевная доза составляет 50-100 мкл суспензии из 6-го разведения.

После расчета посевной дозы определяют необходимое количество повторов посевов (не менее 5) исходя из расчета, что суммарное количество колоний на всех чашках на одной среде должно составлять не менее 200 КОЕ.

Приготовленные суспензии можно использовать, если они были охлаждены сразу же после приготовления и произведения контрольных высевов, и не хранились более 24 ч. Перед исследованием инокулят следует тщательно перемешивать, чтобы добиться однородности суспензии микроорганизмов.

11.4.2.2 Методики посевов

11.4.2.2.1 Посев в жидкую питательную среду

Данный метод посева используется при количественном определении показателей ростовых и дифференцирующих свойств жидких и полужидких питательных сред. Суспензию нужного разведения тестовой культуры тщательно перемешивают, чтобы добиться ее однородности. Посевную дозу суспензии асептически помещают при помощи пипетки в пробирку с исследуемой питательной средой и перемешивают. Инкубируют в термостате при (36±2)°С в течение 18-24 ч.

11.4.2.2.2 Посев прямым поверхностным методом

Суспензию нужного разведения тестовой культуры тщательно перемешивают, чтобы добиться ее однородности. Посевную дозу суспензии асептически помещают при помощи пипетки, на поверхность заранее подготовленной питательной среды (11.4.2.1.1). Стерильным шпателем культуру распределяют по поверхности питательного агара, чтобы добиться равномерного распределения инокулята. После впитывания инокулята чашки переворачивают и инкубируют в термостате при (37±1)°С в течение 18-24 ч.

11.4.3 Определение показателей «чувствительности» и «скорости роста»

11.4.3.1 Методика исследования

При определении показателей чувствительности и скорости роста используют по 0,1 см

из 4, 5, 6, 7-го разведений для посева на плотные питательные среды и по 1,0 см

из 5, 6, 7 и 8-го разведений для посева в жидкие среды. Разведения готовят и контролируют, как указано в 11.4.2.1.3.

Посев каждой дозы инокулята выполняют не менее чем на 3 чашки или пробирки в соответствии с 11.4.2.1.3 Посевы инкубируют при (36±2)°С в течение 24 ч. Визуальный учет скорости роста культуры в каждом взятом в опыт разведении микробной взвеси производят для плотных сред через 12 и 24, а для жидких — через 3, 6 и т.д. часов инкубации.

11.4.3.2 Оценка результата

Чувствительностью среды считается наибольшее разведение исходной суспензии тестового штамма с исходной концентрацией около 10

КОЕ/см

, обеспечивающее формирование колоний на всех засеянных чашках или визуально видимый рост во всех пробирках с исследуемой средой.

Чувствительность среды должна соответствовать параметру, указанному изготовителем в паспорте данной среды. Если данный параметр изготовителем не указан, то чувствительность должна составлять не менее чем 0,1 см

суспензии из 6-го разведения для плотных и 1 см

суспензии из 7-го разведения для жидких питательных сред.

При отсутствии роста в одной пробирке или на одной чашке с посевом разведения, указанного в паспорте как чувствительность, опыт повторяется на удвоенном числе пробирок или чашек. Приемлемым считается наличие роста в 5-ти посевах оцениваемого разведения из 6-ти. Если при повторном исследовании чувствительность среды не соответствует паспортному значению, то ее бракуют.

Скорость роста контрольной культуры — минимальное время инкубации посевов, за которое при соответствующем разведении обеспечен отчетливый видимый невооруженным глазом рост культуры во всех пробирках с жидкими питательными средами (помутнение, наличие пленки, изменение цвета среды) или формирование типичных, легко дифференцируемых колоний на чашках с плотной средой.

Скорость роста не должна превышать время инкубации, указанное в нормативных документах для исследований, в которых эта среда используется.

Результат заносят в протокол оценки питательной среды по биологическим показателям.

11.4.3.3 Оценка дифференцирующих свойств на примере среды Эндо и ее аналогов

Для оценки дифференцирующих свойств сред используют два тестовых штамма, отличающихся по основному дифференцируемому признаку ферментации лактозы E. coli (Lac+) и Shigella sonnei или Salmonella typhimurium (Lac-).

11.4.3.4 Подготовка инокулятов

Разведения тестовых штаммов готовят, как указано в 11.4.2.1.3. Посевная доза должна содержать 50-100 микробных клеток на чашку, рассчитанная по контрольному посеву.

11.4.3.5 Методика исследования

Из разведений тестовых штаммов, содержащих исходя из контрольных посевов 500-1000 микробных клеток в 1 см

, готовят 3 смеси:

— по 1 см

каждого штамма E. coli (Lac+) и Shigella sonnei или Salmonella typhimurium (Lac-);

— по 1 см

штамма E. coli (Lac+) и разбавителя;

— по 1 см

штамма Shigella sonnei или Salmonella typhimurium (Lac-) и разбавителя.

Приготовленные смеси тщательно перемешивают. Из каждой смеси в соответствии с рассчитанной посевной дозой (по 50-100 мкл) засевают поверхностным методом не менее чем на 3 чашки с исследуемой средой. Посевы инкубируют при (37±1)°С в течение 18-24 ч.

По окончании инкубации учитывают выраженность дифференциальных признаков при росте колоний тестового микроорганизма E. coli (Lac+), ферментирующего лактозу на исследуемой среде (характерный цвет колоний, среды) и их отсутствие в посевах тестового штамма Shigella sonnei или штамма Salmonella typhimurium (Lac-), не обладающего способностью к ферментации лактозы.

11.4.3.6 Оценка результатов

Дифференцирующие свойства среды считают удовлетворительными, если она обеспечивает определенный в паспорте перечень признаков и степень их выраженности у тестового штамма, обладающего искомыми свойствами. Результат заносится в журнал оценки питательной среды по биологическим показателям.

11.4.4 Определение процента извлекаемости (% всхожести)

Этот показатель позволяет выявить и оценить наличие и степень ингибирующего влияния исследуемой среды на E. coli по сравнению с контрольной средой. В качестве контрольной используют ранее проведенную неселективную среду.

Определение процента извлекаемости (% всхожести) особенно важно для сред, используемых в методах прямого количественного подсчета (прямой посев исследуемой воды на чашку или фильтр), где наличие даже относительного ингибирующего влияния среды на искомые микроорганизмы будет искажать результат и снижать чувствительность метода.

11.4.4.1 Методика исследования

Готовят инокуляты для посева и осуществляют расчет посевной дозы как указано в 11.4.2.1.3.

11.4.4.2 Посев на контрольную и исследуемую среду выполняют прямым посевом согласно 11.4.2.2.2.

11.4.4.3 Чашки с посевами инкубируют в термостате при (36±2)°С в течение 18-24 ч.

После инкубации подсчитывают количество колоний, выросших на каждой чашке. Общее количество колоний во всех повторах (не менее 5) на контрольной неселективной среде должно быть не менее 200. Вычисляют среднее арифметическое значение количества колоний, выросших на контрольной и исследуемой средах.

11.4.4.4 Обработка результатов

Процент извлекаемости рассчитывают по формуле:

, (2)

где

— процент всхожести на исследуемой среде;

— среднее арифметическое значение количества колоний, выросших на исследуемой среде;

— среднее арифметическое значение количества колоний, выросших на контрольной среде.

11.4.4.5 Оценка результатов

Среда признается приемлемой при условии, что различие между средними значениями количества колоний на контрольной и исследуемой средах не достоверно. При этом, как правило, % извлекаемости (всхожести) составляет не менее 80%.

Расчет достоверности различий средних значений количества колоний, выросших на контрольной и исследуемой средах, приведен в приложении В.

Результат заносится в журнал (формуляр) количественной оценки питательной среды по биологическим показателям (приложение А).

В случае получения достоверного различия результатов, исследование повторяют, удваивая количество повторов: не менее 10 чашек с общей численностью количества учитываемых колоний на неселективной среде не менее 400.

11.4.4.6 Оценка показателя ингибиции

Для оценки ингибирующих свойств среды Эндо (и ее аналогов) по отношению к микробамассоциантам используют тестовый штамм Staphylococcus aureus.

11.4.4.7 Подготовка инокулята

Разведения тестового штамма готовят и контролируют, как указано в 11.4.2.1.3.

11.4.4.8 Методика контроля

Взвесь штамма-ассоцианта из разведений 10

(10

микробных клеток в см

) по 100 мкл засевают на 3 чашки Петри с испытуемой и контрольной (неингибиторной) средами. В качестве контрольной среды используется питательный агар. Через 24-48 ч инкубации при температуре (36±2)°С определяют число колоний, сформировавшихся на испытуемой и контрольной средах.

11.4.4.9 Оценка результатов

Ингибирующие свойства среды являются удовлетворительными, если в разведении 10

отсутствует рост микроба-ассоцианта при наличии роста в контрольных посевах. Результат заносят в журнал (формуляр) оценки питательной среды (приложение А).

11.5 Контроль на этапе использования питательных сред

В процедуре анализа возможны нарушения использования питательных сред (перегрев, чрезмерная инкубация при высокой температуре и т.д.), приводящие к ухудшению их ростовых свойств. Кроме того, возможно неверное толкование полученного результата, вследствие слабой выраженности признака у исследуемого микроорганизма. Контроль на этом этапе позволяет минимизировать подобные проблемы.

Контроль сред на этапе использования включает:

— контроль температурного режима водяных бань, предназначенных для поддержания плотных питательных сред в расплавленном состоянии;

— учет времени нахождения среды в расплавленном состоянии;

— постановку положительного и отрицательного контролей каждой партии приготовленной питательной среды.

Данный вид контроля проводится при каждом использовании питательных сред.

11.5.1 Контроль времени нахождения питательной среды в расплавленном состоянии

Питательная среда не должна находиться в расплавленном состоянии более 8 ч. Повторное плавление плотной питательной среды не допускается.

11.5.2 Постановка положительного и отрицательного контролей

Постановку контролей осуществляют в процессе идентификации микроорганизмов при выполнении подтверждающих тестов.

11.5.2.1 Тестовые культуры

В качестве тестовых культур используют штаммы:

— E. coli (например, шт. М17-02 или шт. 1257, шт. АТСС 10536);

— Salmonella typhimurium (например, шт. 9640 или шт. АТСС 13311);

— Staphylococcus aureus (например, шт. 906 или шт. АТСС 6538);

— Pseudomonas aeruginosa (например, шт. АТСС 27853 или шт. АТСС 10145, шт. АТСС 15442);

— Aspergillus brasiliensis (например, шт. АТСС 16404);

— Candida albicans (например, шт. АТСС 10231 или шт. АТСС 24433);

— Enterococcus faecalis (например, шт. АТСС 29212);

— Pseudomonas fluorescens (например, шт. АТСС 948).

Накануне исследования тестовую культуру готовят, как указано в 13.3.4.

11.5.2.2 Методика контроля

Постановку положительного контроля осуществляют путем внесения одной петли агаровой культуры тестового штамма в пробирку с используемой средой (средами) для идентификации. Отрицательным контролем служит пробирка с аналогичной средой без посева. Обе пробирки маркируют и помещают в термостат вместе с посевами. Возможен метод посева по ГОСТ 26670.

11.5.2.3 Учет результатов

По истечении срока инкубации в пробирке с положительным контролем должен наблюдаться хорошо различаемый рост, со всеми типичными для него отличительными признаками, которые предполагается выявлять на данной среде. Цвет индикатора среды должен изменяться на цвет, определяемый в паспорте среды как положительный результат утилизации данного углевода. В пробирке с отрицательным контролем среда должна находиться без изменений. Результаты положительного и отрицательного контролей заносятся в рабочий журнал основного исследования.

12 Правила приготовления серийных разведений

Разведением для микробиологических исследований служит раствор или суспензия исследуемого образца, смешанные с девятикратным количеством жидкости для разведения — разбавителем. Приготовление разведений необходимо:

— при исследовании загрязненных вод в целях снижения количества микроорганизмов на единицу объема, для обеспечения возможности наблюдения за их ростом или подсчетом колоний;

— для постановки исследований, требующих количественного учета используемых модельных микроорганизмов, например при количественной оценке качества питательных сред, мембранных фильтров и т.д.

Приемлемое для учета число микроорганизмов составляет:

— для метода подсчета колоний на чашках Петри (90-100 мм) — от 15 до 300 колоний;

— для учета колоний на фильтре (47-50 мм) — от 15 до 100 колоний;

— для учета колоний на фильтре (35 мм) — от 15 до 60 колоний.

Важным моментом в процедуре приготовления разведений является равномерность распределения внесенных микроорганизмов по объему разбавителя. Равномерность распределения достигается тщательным перемешиванием полученной смеси встряхиванием или пипетированием. Достичь более качественных результатов позволяет использование специальных приборов — встряхивателя или вортекса.

В процессе приготовления разведений каждый образец с помощью прибора тщательно перемешивается в течение 5-10 с.Частоту вращения подбирают так, чтобы жидкость, которая образует воронку, не доходила до края пробирки на 2-3 см.

12.1 Разбавители

В качестве разбавителей при приготовлении разведений используют:

— пептонно-солевой: в 1000 см

дистиллированной воды добавляют 1,0 г пептона и 8,5 г натрия хлористого;

— физиологический раствор: в 1000 см

дистиллированной воды добавляют 8,5 г натрия хлористого.

Для приготовления разбавителя указанные компоненты растворяют в воде, при необходимости, с подогреванием. Доводят pH так, чтобы после стерилизации он был равен 7,0±0,2 при 25°С. Разливают разбавитель во флаконы. Стерилизуют при 121°С в течение 20 мин. Помимо перечисленных выше разбавителей, для приготовления разведений исследуемой воды допускается применение стерильной водопроводной воды.

12.2 Методика выполнения разведений исследуемой воды

Разведения исследуемого образца воды следует готовить непосредственно перед анализом и использовать для инокуляции не позже 30 мин с момента приготовления. В стерильные пробирки, количество которых соответствует выбранной степени разбавления исследуемой воды, асептически вносят по 9 см

разбавителя. В первую из пробирок, содержащих 9 см

разбавителя, не касаясь стенок пробирки и поверхности разбавителя, пипеткой вносят 1 см

хорошо перемешанной пробы воды, тщательно перемешивают.

Приготовленное первое разведение (10

) содержит в 1 см

суспензии 0,1 см

исходного образца. В следующую (вторую) пробирку, также содержащую 9 см

разбавителя, не касаясь стенок пробирки и поверхности разбавителя, новой пипеткой вносят 1 см

хорошо перемешанного первого разведения исследуемой пробы. Смесь тщательно перемешивают. Второе разведение (10

) в 1 см

суспензии содержит 0,01 см

исходного образца.

Процедуру приготовления разведений продолжают по описанной схеме до получения суспензии с необходимой концентрацией исходного образца.

12.3 Методика приготовления суспензий с заданной концентрацией клеток тестовых микроорганизмов

Приготовление суспензий с заданной концентрацией клеток тестовых микроорганизмов осуществляют с использованием оптического стандарта мутности, соответствующего 0,9-1 млрд. микробных кл/см

В стерильную стандартную пробирку, прилагаемую к стандарту, вносят 3-4 см

разбавителя. Агаровую культуру тестового микроорганизма петлей переносят в пробирку и растирают по внутренней поверхности пробирки, постепенно смешивая с содержащимся в ней разбавителем.

Возможно приготовление бактериальной взвеси методом смыва выросшей культуры со скошенного агара 5 см

разбавителя.

Полученную взвесь микроорганизмов интенсивно перемешивают, добиваясь полного и равномерного распределения клеток. Мутность полученной взвеси сравнивают с мутностью оптического стандарта (возможно применение специальных приборов, предназначеных для измерения мутности клеточных суспензий в пределах диапазона 0,0-6,0 единиц МакФарланда (McF) (0-0,2

кл/см

), который также предварительно тщательно перемешивают.

При визуальном несоответствии мутности приготовленной суспензии стандарту, ее доводят либо добавлением агаровой культуры, либо добавлением разбавителя. После каждого вносимого изменения суспензию тщательно перемешивают.

При совпадении мутности приготовленной суспензии и мутности оптического стандарта считается, что концентрация клеток тестовой культуры в данной суспензии примерно соответствует значению, указанному для данного стандарта (0,9-1

кл/см

Для получения суспензии с нужной концентрацией тестового микроорганизма выполняют серийные разведения полученной стандартной суспензии описанным выше способом.

Для контроля правильности приготовления суспензии, правильности выполнения разведений и расчета заражающей дозы проводят контрольный высев в соответствии с 11.4.2.1.3.

13 Этапы сохранения микробиологических культур

13.1 Контрольные (референтные) штаммы микроорганизмов

В качестве контрольных (эталонных) штаммов используют тест-штаммы из официально признанных коллекций микроорганизмов, отличающиеся генетической стабильностью и изученными феноти-пическими характеристиками, в том числе чувствительностью к антибактериальным препаратам. В условиях лаборатории штаммы должны иметь паспорт и храниться в соответствии с действующими на территории Российской Федерации санитарными правилами и нормами при работе с микроорганизмами III-IV групп патогенности таким образом, чтобы возможность мутаций и контаминации культуры была минимальной.

Хранение культур осуществляется в соответствии с действующими на территории Российской Федерации санитарными правилами и нормами. Лаборатория должна иметь разрешение на работу с микроорганизмами III-IV групп патогенности. С учетом различной технической и материальной обеспеченности лабораторий возможны два варианты ведения эталонных бактериальных культур:

— без создания запаса эталонной культуры длительного хранения, не требующий специального оснащения;

— с созданием запаса эталонной культуры длительного хранения с применением криоконсерва-ции, который следует рассматривать как оптимальный.

13.2 Для непродолжительного хранения «рабочих» штаммов их выращивают в пробирке со скошенным агаром и хранят в холодильнике при температуре 2-8°С, субкультивируют в соответствии с ГОСТ ISO 11133 или другими утвержденными в установленном порядке методическими документами и стандартами или используют готовые культуры на петлях или в гранулах.

Рабочую культуру готовят накануне исследования. Для этого ее высевают со среды хранения (например, с полужидкого агара) в пробирки со скошенным питательным агаром, с питательным бульоном или на специальные питательные или дифференциальные среды (если готовые культуры на петлях или в гранулах).

Процесс ведения эталонных культур, в данном варианте, состоит из следующих блоков:

— восстановление и контроль лиофилизированной культуры;

— создание запаса рабочей культуры;

— хранение в полужидком агаре при температуре 4-8°С;

— восполнение запаса рабочей культуры;

— подготовка культуры для целевого использования;

— контроль видовых и паспортных свойств.

Хранение запаса рабочей культуры в полужидком агаре при (4-8)°С не требует специального оснащения, но порождает необходимость восполнения запасов рабочей культуры путем получения ее субкультур на среде хранения каждые 3 месяца. Дополнительные пассажи через питательные среды могут привести к диссоциации штамма и потере тестовых свойств. Восполнять запас рабочей культуры разрешается только 3 раза (конец 3, 6 и 9-го месяцев) с момента его создания. Это ограничивает срок использования эталонной культуры, полученной из 1 ампулы, 1 годом, по истечении которого необходимо вскрыть новую ампулу с тестовой культурой.

Для длительного хранения штаммы находятся в лиофилизированном виде при температуре 4-6°С или в виде суспензии микроорганизмов в стабилизирующем растворе в замороженном состоянии при температуре минус 70°С и ниже в морозильной камере или в жидком азоте.

В случае необходимости (при длительном хранении) для повышения активности культуры ее необходимо предварительно провести через питательные бульоны.

Если «рабочие» культуры были контаминированы или имеет место снижение чувствительности, необходимо вернуться к исходным культурам.

13.3 Подготовка тестовой культуры для целевого использования

13.3.1 Восстановление лиофилизированной эталонной культуры

Оттянутый конец ампулы с лиофилизированной культурой нагревают над пламенем горелки. Влажным концом стерильного ватного тампона прикасаются к нагретой части, в результате чего появляются трещины. Конец ампулы накрывают трехслойной марлевой салфеткой, смоченной 70%-ным этиловым спиртом и хорошо отжатой и обламывают пинцетом.

После вскрытия ампула остается накрытой той же салфеткой в течение 1-2 мин. Затем салфетку осторожно снимают и вместе с остатками стекла погружают в дезраствор. В ампулу вносят 0,3 см

питательного бульона для регидратации. В качестве питательного бульона можно использовать мясо-пептонный бульон, сердечно-мозговой, триптон-соевый, тиогликолевый. Содержимое ампулы перемешивают, переносят стерильной пастеровской пипеткой или шприцем в пробирку с питательным бульоном и инкубируют при (37±1)°С в течение 18-24 ч. Оставшуюся бульонную культуру используют для оценки степени диссоциации эталонного штамма.

После инкубации из питательного бульона делают высев петлей на скошенный питательный агар в две пробирки (при восстановлении штамма E. coli

посев осуществляется на скошенный питательный агар, содержащий стрептомицин). Посевы инкубируют при (37±1)°С 18-24 ч.

Одну пробирку с посевом используют для постановки тестов на соответствие полученного штамма видовым, паспортным свойствам. Второй посев на скошенном питательном агаре используют для создания запасов рабочей культуры.

Культура с измененными свойствами в работу не допускается.

13.3.2 Создание запасов рабочей культуры

При удовлетворительном прохождении контрольных тестов культуру со скошенного питательного агара (например, для E. coli

— с питательного агара со стрептомицином) засевают уколом в столбик с полужидким агаром. В зависимости от интенсивности работы лаборатории посев проводят в 4-7 пробирок, из расчета по 1-2 пробирки на 1 месяц работы и в 1 пробирку для восполнения запасов рабочей культуры через три месяца на следующий квартал. Посевы инкубируют 18-24 ч при (37±1)°С. При наличии роста пробирки закрывают резиновыми пробками и закладывают на хранение при температуре 4-8°С.

Одну из пробирок с культурой, предназначенной для восполнения рабочих запасов, маркируют и хранят отдельно. Запасы рабочей культуры желательно хранить в отдельном холодильнике.

13.3.3 Восполнение запасов рабочей культуры

Восполнение запасов рабочей культуры производится в конце 3, 6 и 9-го месяца с момента вскрытия ампулы (каждые 3 месяца).

Для восполнения запасов рабочей культуры используется субкультура на среде хранения, полученная ранее при создании запасов или при очередном их восполнении. Из пробирки с культурой, предназначенной для восполнения запасов, производят посев в питательный бульон. Посевы инкубируют при (37±1)°С в течение 18-24 ч. Оставшуюся бульонную культуру (например, E. coli M17-02) используют для оценки степени диссоциации.

При наличии диссоциации (по размеру, S-R-диссоциация, др.) подсчитывают количество измененных колоний и общее количество просмотренных колоний. Общее количество просмотренных бактерий не должно быть менее 30. Затем рассчитывают процент диссоциации по формуле:

. (3)

Если процент диссоциированных колоний превышает 25%, то данная культура не пригодна для дальнейшего использования.

После инкубации из питательного бульона делают высев петлей в две пробирки со скошенным питательным агаром. При ведении штамма E. coli

посев осуществляется на скошенный питательный агар, содержащий стрептомицин. Посевы инкубируют при (37±1)°С 18-24 ч.

Один из посевов используют для постановки тестов на соответствие полученного штамма видовым, паспортным свойствам. Второй посев на скошенном питательном агаре используют для восполнения запасов рабочей культуры.

При удовлетворительном прохождении контрольных тестов процедура закладки культуры на хранение осуществляется согласно 13.2, 13.3.5. Восполнение запасов рабочей культуры проводят только 3 раза. По истечении года использования необходимо получить новую эталонную культуру из коллекции микроорганизмов.

Контрольными тестами являются тесты на проверку жизнеспособности, оценку морфологических и биохимических свойств с применением селективных сред, возможно использование автоматических биохимических анализаторов или тест-систем для определения биохимических свойств.

13.3.4 Подготовка культуры для целевого использования в анализе

Накануне использования культуру с полужидкого агара высевают на 2 пробирки со скошенным питательным агаром (например, E. coli

пересевают на скошенный питательный агар, содержащий стрептомицин). Посевы инкубируют 18-24 ч при (37±1)°С.

Культуру из одной пробирки используют по назначению с предварительной подготовкой согласно методическим документам. Вторая пробирка используется для получения культуры для работы на следующий (второй) день. При необходимости получения культуры тест-штамма на третий день высев снова производят с полужидкого агара.

13.3.5 Создание запасов эталонных штаммов

Параллельно с постановкой контрольных тестов из пробирки со скошенным питательным агаром культуру засевают в 2 пробирки с питательным бульоном или на две чашки Петри с агаром и инкубируют 18-24 ч при (37±1)°С.

При удовлетворительном прохождении контрольных тестов в пробирке с суточной культурой проводят подготовку для сохранения культур в условиях низких температур (криоконсервации) в соответствии с 13.4.2. Криопробирки с запасом эталонной культуры устанавливают в криобокс (штатив для криопробирок) и закладывают на хранение при температуре минус (70±10)°С. Альтернативным вариантом является хранение в жидком азоте при наличии соответствующего оборудования.

При инкубировании культур на чашках Петри с агаром процедуру подготовки и закладки для длительного хранения при температуре минус (70±10)°С или для хранения в жидком азоте проводят в соответствии с 13.4.3.

Закладку запасов эталонной культуры на длительное хранение осуществляют единожды на весь период ее использования и запасы эталонной культуры при хранении в условиях низких температур восполнению не подлежат.

Данный блок выполняет задачу накопителя биомассы эталонного штамма, что позволяет избежать необходимости восполнять запасы рабочей культуры за счет повторных пассажей эталонного штамма через питательные среды и удлиняет «срок службы» культуры, полученной из одной ампулы.

13.3.6 Создание запасов рабочей культуры

Температуру криопробирки из запасов эталонной культуры доводят до комнатной температуры. Содержимое аккуратно перемешивают, вносят в пробирку с 8-10 см

питательного бульона и инкубируют при 37°С 18-20 ч. После инкубации из питательного бульона выполняют высев в две пробирки со скошенным питательным агаром (для E. coli

— на питательный агар, содержащий стрептомицин). Посевы инкубируют в термостате 18-24 ч при 37°С. Оставшуюся бульонную культуру используют для оценки степени диссоциации, как указано в 13.3.1.

Один из посевов на скошенном питательном агаре используют для постановки тестов на соответствие полученного штамма паспортным (типовым) свойствам. Второй посев используют для создания запасов рабочей культуры.

При несоответствии штамма видовым и паспортным свойствам использование культуры не допускается. В этом случае необходимо разморозить еще одну емкость с эталонной культурой и подвергнуть ее аналогичному исследованию.

Если культура снова не прошла контроль, ее снимают с хранения и в дальнейшем не используют. Необходимо получить новую ампулу с эталонной культурой и начать процедуру ведения тестового штамма сначала.

При удовлетворительном прохождении тестов культуру из пробирки со скошенным питательным агаром засевают уколом в 3-6 пробирок с полужидким агаром из расчета 1-2 пробирки на месяц в зависимости от интенсивности работы лаборатории. Посев инкубируют 18-24 ч при 37°С. Пробирки закрывают резиновыми или силиконовыми пробками и хранят при 4-8°С.

Запасы рабочей культуры создают 1 раз в 3 месяца, используя для этой цели новую пробирку из запаса эталонной культуры. Повторное замораживание размороженной эталонной культуры запрещается. Запасы рабочей культуры желательно хранить в отдельном холодильнике.

13.4 Подготовка культур микроорганизмов к процессу длительного хранения при низких температурах(криоконсервации)

13.4.1 Оборудование, расходные материалы и реактивы

Оборудование:

— автоклав вертикальный;

— термостат;

— микровстряхиватель или вортекс;

— низкотемпературный морозильник на минус 80°С;

— одноканальный механический дозатор переменного объема (рабочий объем 100-1000 мкл) с набором наконечников;

— криохранилища или сосуд Дюара, обеспечивающий возможность хранения в жидком азоте;

— водяная баня.

Расходные материалы и реактивы:

— пробирки типа Эппендорф;

— криопробирки с юбками и без, с завинчивающимися крышками со штриховым кодом и без него с бусами и без бус;

— соломины с хлопковой и гидрофобной пробкой в различных вариантах: 0,3; 0,5 и 1,0 см

со штриховым кодом и без него;

— стерильные пластиковые криопробирки с винтовой крышкой объемом 2,0 см

;

— микробиологическая петля;

— спиртовка стеклянная;

— штатив пластиковый для пробирок;

— пластиковые коробки с ячейками;

— чашки Петри;

— этиловый спирт.

13.4.2 Подготовка культур микроорганизмов

Не менее 2-х для каждой коллекционной культуры стерильные пластиковые криопробирки с винтовой крышкой объемом 2,0 см

или пробирки типа Эппендорф, устойчивые к низким температурам, маркируют с указанием номера штамма и даты (месяц, год) криоконсервации. Разливают в подготовленные криопробирки по 900 мкл бактериальной бульонной суспензии, добавляют по 900 мкл стерильного 20%-ного раствора глицерина и закрывают крышками. Вместо глицерина можно добавить по 0,1 мг сахарозы или лактозы, глюкозы, маннита, сорбита, декстрана, поливинилпирролидона, полигликоли, обеспечивающих защитное действие на наружной поверхности клеточной мембраны, тщательно перемешивают на микровстряхивателе или на вортексе.

Перед криоконсервацией из полученной бактериальной суспензии 100 мкл используют для определения жизнеспособности культуры. При этом бактериальную взвесь помещают на поверхность ага-ризованной среды, обеспечивающей оптимальный рост культуры, растирают шпателем с дальнейшим термостатированием при температуре инкубации, используемой для культивирования микроорганизма, который планируется сохранять.

После тщательного перемешивания на микровстряхивателе или на вортексе, заполненные крио-пробирки размещают в пластиковых контейнерах с ячейками, затем помещают в низкотемпературную камеру или морозильник на минус (70±10) °С или в жидкий азот на минус 196°С.

Перед использованием замороженный образец достают из места хранения, помещают на 45 с в водяную баню, прогретую заранее до (37±1)°С, затем достают и размораживают при комнатной температуре в анаэробных или аэробных условиях, требуемых для его культивирования.

При частой разморозке криопробирок титр микроорганизмов снижается, поэтому размораживать несколько раз криопробирки с культурами не рекомендуется.

13.4.3 Процесс длительного хранения при низких температурах (криоконсервация) микроорганизмов, выросших на поверхности агаризованных питательных сред

Микроорганизмы рассевают по всей поверхности чашки Петри на питательной среде. В начале стационарной фазы роста микроорганизмы собирают с поверхности агара одноразовой бактериологической петлей (при этом металлические петли использовать не рекомендуется из-за возможного повреждения клеточной стенки) или ватным тампоном и помещают в 800 мкл среды для криозаморозки или криопротекторы, суспендируют с помощью микровстряхивателя или вортекса, затем помещают в низкотемпературный морозильник на минус (70±10)°С или в жидкий азот.

13.4.4 Внутриклеточные криопротекторы и криозащитные среды

Выбор криопротектора или криозащитной среды зависит от вида бактерий. При замораживании новых штаммов следует предварительно проверить действие на них криопротектора.

13.4.4.1 Использование в качестве криопротектора 10%-ных растворов глицерина и ДМСО

Микроорганизмы помещают в криопробирки и добавляют по 1 см

10%-ного раствора глицерина с ДМСО, перемешивают и затем помещают криопробирки в морозильную камеру при минус (70±10)°С или в жидкий азот. Перед использованием криопробирку достают и размораживают при комнатной температуре. При этом глицерин стерилизуют автоклавированием в течение 20 мин при 121°С и хранят при температуре 4-6°С в течение 30 дней.

Стерилизацию ДМСО осуществляют фильтрованием, используя пористые свечи «Села» или установку стерилизующей фильтрации. ДМСО собирают порциями по 10-15 см

в стерильные пробирки и хранят в замороженном состоянии при температуре минус 5°С (ДМСО замерзает при температуре минус 18°С).

13.4.4.2 Использование в качестве криопротектора составных криозащитных сред

Подготавливают основу криозащитной среды из расчета на 500 см

дистиллированной воды, добавляют 2 г бактериологического сухого европейского агара, 2,5 г — NaCI, 1 г дрожжевого экстракта, 0,2 мг L-цистеин, 8,5 мг панкреатического гидролизата казеина, 5 г декстрозы. В 500 см

дистиллированной воды постепенно добавляют вышеуказанные ингредиенты, размешивают и доводят до кипения, затем кипятят в течение 5 мин до полного растворения бактериологического агара (оценку проводят визуально, по отсутствию комков на предметном стекле, для чего опускают предметное стекло в приготовленную среду, вынимают, дают возможность стечь и осматривают стекло на предмет отсутствия комков), при этом pH среды поддерживают в диапазоне (7,2±0,2), разливают в стерильные флаконы емкостью 500 см

. Основу криозащитной среды разливают по емкостям и стерилизуют в течение 20 мин при температуре 110 °С. Основа составной криозащитной среды представляет собой полужидкий вязкий стерильный раствор, полностью готовый к использованию для сохранения микроорганизмов в условиях низких и сверхнизких температур. Условия хранения составной среды — при температуре 4-6 °С в течение 14 дней.

В стерильную основу криозащитной среды перед проведением заморозки культур микроорганизмов добавляют 10%-ный раствор глицерина в следующих пропорциях: на 100 см

среды 14 см

глицерина; 200 см

— 28 см

глицерина; 20 см

— 2,8 см

глицерина; 30 см

— 4,2 см

глицерина; 40 см

— 5,6 см

глицерина; 500 см

— 70 см

глицерина.

10%-ный раствор глицерина готовят из концентрата глицерина путем разведения стерильной дистиллированной водой до соотношения 1:10 и стерилизуют в течение 20 мин при 121°С. Хранят при температуре 4-6°С в течение 30 дней.

Бактериальные культуры смывают или снимают ватным тампоном или стерильной одноразовой пластиковой бактериологической петлей (при этом металлические петли использовать не рекомендуется из-за возможного повреждения клеточной стенки) со всей поверхности питательной среды в криопробирки или пробирки типа Эппендорф, устойчивые к низким температурам, рассчитанные на 2 см

, смешивают в соотношении 1:2 с криозащитной средой, перемешивают на вортексе в течение 2-5 мин до получения однородной массы, затем криопробирки завинчивают крышкой или защелкивают и помещают в соответствующее хранилище, где подвергают немедленной заморозке, а затем оставляют для хранения при низких температурах до тех пор, пока не потребуется использовать эти культуры. Максимальное время хранения без пересева микроорганизмов при температуре минус (70±10)°С составляет три года.

Оттаивание криопробирок с бактериальными культурами производят непосредственно перед проведением исследований, для чего требуемые для исследования образцы вынимают из низкотемпературного хранилища, размораживают в течение 45 с на прогретой заранее до температуры 37°С водяной бане, затем образцы вынимают из водяной бани и оставляют при комнатной температуре до полного оттаивания. Затем содержимое пробирки высевают на чашки с питательными средами. Последующая заморозка после оттаивания микроорганизмов нежелательна.

13.5 Консервирование бактериальных культур высушиванием из замороженного состояния (лиофилизация)

13.5.1 Оборудование

В зависимости от способа размещения биопрепаратов при высушивании различают сублимационные установки коллекторного и камерного типа.

В коллекторных установках ампулу, флакон, колбу с биопрепаратом (каждый элемент в отдельности) во время сушки связывают с устройством для улавливания водяных паров (конденсатором) индивидуальным трубопроводом.

В камерных установках сосуды с препаратами помещают в общую сушильную камеру, где и осуществляется, как правило, весь цикл высушивания препарата.

По принципу работы сублимационные установки подразделяются на периодические, поточно-циклические и установки с непрерывным действием.

13.5.2 Подготовка культур к сушке

Качество лиофилизации зависит от качества используемых микробных клеток, от того, насколько они жизнеспособны и в каких условиях выросли.

Выращивают достаточно большое количество клеток на поверхности питательного агара в чашке Петри так, чтобы в суспензии содержалось не менее 10

кл/см

, при этом посев чистых бактериальных культур осуществляют газоном. Их собирают в период максимальной стабильности и жизнеспособности культуры, т.е. в поздней экспоненциальной или ранней стационарной фазах роста (для большинства культур суточные).

13.5.3 Защитные среды

Для подготовки клеток к лиофилизации их суспендируют в среде, содержащей растворы защитных сред. В качестве криопротекторов используют:

— декстран (10%);

— инозит (5%);

— глутамат (5%);

— раффиноза (5%);

— пептон (0,1-10%);

— сахароза (10%);

— лактоза (10%);

— трегалоза (10%);

— обезжиренное молоко (10-20%);

— натрия глутамат (5%);

— гидролизат казеина;

— 12%-ный раствор сахарозы;

— лошадиная сыворотка;

— глюкозо-желатиновая среда;

— сахарозо-желатиновая среда.

13.5.4 Подготовка стабилизатора-носителя, в котором проводят лиофилизацию культур

Готовят 20%-ное снятое цельное молоко и стерилизуют его порциями по 15-20 см

при температуре 112°С в течение 15 мин. Следует избегать перегрева, так как при этом может произойти карамелизация молока.

Обезжиренное молоко готовят путем центрифугирования цельного молока (3500 об/мин, 40 мин), затем образовавшийся плотный слой жира удаляют и обезжиренное молоко (обрат) автоклавируют при температуре 117°С в течение 15 мин.

13.5.5 Способ приготовления сахарозо-желатиновой или глюкозо-желатиновой сред

К 100 мл дистиллированной воды добавляют 1 г желатина и 5 г сахарозы (5 г глюкозы). Дают постоять среде 2 ч при комнатной температуре. Затем стерилизуют в автоклаве при 120°С в течение 30 мин.

В стерильных условиях микробные клетки, выращенные в бульоне (с сердечно-мозговой вытяжкой, триптон-соевом, бруцелла, шадлера, мясо-пептонный и др.), отделяют в стерильных условиях центрифугированием, затем суспендируют осадок в защитной среде, чтобы получилась суспензия, содержащая не менее 106 кл/см

. Эту же процедуру применяют и в том случае, когда в качестве защитной среды используется сахароза, декстран (10%), лошадиная сыворотка, инозит и другие вещества.

13.5.6 Заполнение ампул или пенициллиновых флаконов микробной суспензией

В каждую ампулу или пенициллиновый флакон из нейтрального стекла (45

10 мм) в зависимости от ее объема наливают от 1 до 3 см

, т.е. 20% (вес/объем) суспензии с микробными клетками, содержащей 10% (вес/объем) стабилизатора-носителя, затем закрывают стерильной негигроскопической ватной пробкой и подравнивают ее ножницами. После приготовления суспензии ее следует разлить по ампулам как можно быстрее. Интервал между разливом и процессом лиофилизации должен быть сведен до минимума, чтобы избежать осаждения клеток и других изменений в культуре. Вставляют ватные пробки на глубину приблизительно 1,3 см ниже края ампулы и обжигают их верхнюю часть, чтобы убрать лишние волокна ваты.

13.5.7 Процедура лиофилизации

Готовые для лиофилизации флаконы с защитной средой и микробными культурами непосредственно перед лиофилизацией помещают в морозильные камеры на минус (70±10)°С не менее чем на 16 ч, достают непосредственно перед процедурой лиофилизации и ставят в разогретую лиофильную камеру. Общая продолжительность цикла высушивания составляет не более 50 ч. После высушивания флаконы герметизируют в стерильных условиях.

13.5.8 Хранение

Лиофилизованные культуры хранят при температуре 4-6°С. С понижением температуры растет и сохраняемость микробных клеток. При комнатной температуре лиофилизованные культуры хранить не рекомендуется.

13.6 Восстановление (реактивация) культур из лиофилизата

Лиофилизованную культуру переводят в суспензию сразу после вскрытия ампул, добавляя в каждую от 0,3 до 1,0 см

соответствующей стерильной жидкой среды. Суспензию в ампулах хорошо перемешивают и переносят в пробирки с 5 см

жидкой среды (питательного бульона). После тщательного перемешивания инокулят с культурами термостатируют в течение 2 ч в термостате при температуре (37±1)°С, затем отбирают 0,2 см

суспензии и наносят на твердую агаризованную питательную среду или полужидкую среду того же состава (питательный бульон). Рост бактерий, подвергавшихся лиофилизации, часто начинается после длительной лаг-фазы. Поэтому нельзя делать заключение о гибели культуры, если инкубация была недостаточно длительной.

13.7 Проверка жизнеспособности восстановленных бактерий после лиофилизации

Чтобы определить, насколько эффективен процесс высушивания бактерий из замороженного состояния, проверяют их жизнеспособность как до, так и после лиофилизации культуральным методом, а также методом покраски на живые и мертвые с применением набора для флуоресцентной окраски клеток или трипанового синего.

Для этого суспензию клеток стерильно разводят и делают посев штрихом на твердые среды. Пробирки и чашки со средой инкубируют при оптимальной для бактерий температуре и, как только начинается их рост, делают пересев на свежую среду, чтобы убедиться в чистоте культуры.

При использовании метода оценки живых и мертвых бактерий 100 мкл бактериальной суспензии смешивают 1:1 с флуоресцентной краской клеток или трипановым синим, пепетируют и проводят оценку в камере Горяева под микроскопом.

13.8 Консервирование высушиванием из жидкого состояния

13.8.1 Подготовка клеток для L-высушивания

Для высушивания используют клеточную суспензию с плотностью не менее 10

кл/см

в подходящей защитной среде. В случае жидких культур клетки собирают стерильным центрифугированием (4000 об/мин, 30 мин) с последующим суспендированием осадка при помощи стеклянных шариков в защитной среде.

13.8.2 Заполнение ампул микробной суспензией

Готовые ампулы (содержащие тонкий диск стабилизатора-носителя) выдерживают несколько минут при температуре 20-25°С. В каждую ампулу стерильно вносят около 0,025 см

(одна капля с пипетки Пастера) клеточной суспензии, осторожно капая на тонкий диск, чтобы не коснуться стенок ампулы. После приготовления суспензии ее следует разлить по ампулам как можно быстрее. Интервал между разливом и процессом лиофилизации должен быть сведен до минимума, чтобы избежать осаждения клеток и других изменений в культуре. Вставляют ватные пробки на глубину приблизительно 1,3 см ниже края ампулы и обжигают их верхнюю часть, чтобы убрать лишние волокна ваты.

13.8.3 Высушивание

Заполненные ампулы быстро ставят на металлический поддон, который переносят в металлическую камеру на водяной бане при температуре 20°С. После 20-30 мин эквилибрации образцов включают вакуумный насос, который отсасывает влагу из сушильной камеры. При этом влага конденсируется на холодной ловушке (приблизительно минус 35°С).

В технологии сушки из жидкого состояния различают две стадии — первичное и вторичное высушивание.

Приложение А

(рекомендуемое)

Примеры формуляров для записи результатов контроля

А.1 Формуляр для записи результатов контроля микробной обсемененности воздуха


	Наименование организации	Формуляр ______
	Испытательный лабораторный центр Микробиологическая лаборатория	действует с: _______________ Стр ____ из _____
	Контроль обсемененности воздуха


Дата посева	Питательные среды. Результат	Дата окончания исследо- вания	Подпись исполни- теля	Дата посева	Питательные среды. Результат	Дата окончания исследо- вания	Подпись исполни- теля
	МПА				МПА
	ЖСА				ЖСА
	Сабуро				Сабуро
	МПА				МПА
	ЖСА				ЖСА
	Сабуро				Сабуро

Аспирационным методом: МПА — 100 л — 37°С 24 ч; ЖСА — 250 л — 37°С 48 ч; Сабуро — 250 л до 5 сут. ОМЧ — не более 500 КОЕ/м

; S. aureus — отсутствие; дрожжевые и плесневые грибы — отсутствие.


		Составил:

Дата введения:

		Проверил:

А.2 Формуляр контроля паразитарной загрязненности воздуха и пыли


	Наименование организации	Формуляр ______
	Испытательный лабораторный центр Паразитологическая лаборатория	действует с: _______________ Стр ____ из _____
	Контроль паразитарной загрязненности воздуха и пыли в паразитологи-ческой лаборатории (комната, помещение или бокс и т.д.)


Дата	Вид	Всего	Приме-	НД на	Место	Яйца гельминтов	Фамилия
прове- дения иссле- дова- ния	иссле- дова- ния	коли- чество отоб- ранных проб для иссле- дова- ния	няемая мето- дика при иссле- дова- нии проб	методы иссле- дования	отбора пробы (назва- ние или номер помеще- ния, бокса и т.д.)	Обнаружено	Не обна- ружено	и подпись прово- дившего иссле- дование
						При обнаружении дается краткая характеристика объекта и указывается количество обнаружения в пробе

Примечание — Периодичность проведения контроля устанавливается в плане производственного контроля лаборатории.

А.3 Формуляр для записи результатов контроля микробной обсемененности лабораторной посуды


	Наименование организации	Формуляр ______
	Испытательный лабораторный центр Микробиологическая лаборатория	действует с: _______________ Стр ____ из _____
	Контроль обсемененности лабораторной посуды (ЛП)


Дата/	ОМЧ*	Сульфитредуцирующие	Резуль-	Дата	Под-
наимено- вание ЛП	МПБ (20% от объема флакона) 36±2°С 48 ч	МПА 36±2°С 48 ч	клостридии (железосульфатный агар 44°С 18 ч)»	тат	окон- чания иссле- дова- ния	пись испол- нителя
		Конт- роль посуды	Конт- роль среды	Сте- рильная водо- провод- ная вода (20% от объема флако- на)	Конт- роль посуды	Конт- роль сте- риль- ности водо- про- водной воды
Флаконы	100,0	1,0	1,0	100,0	100,0	100,0
		1,0
	100,0	1,0		100,0	100,0
		1,0
	100,0	1,0		100,0	100,0
		1,0
Чашки Петри	10,0	1,0
		1,0
	10,0	1,0
		1,0
	10,0	1,0
		1,0
Пробирки	5,0	1,0
		1,0
	5,0	1,0
		1,0
	5,0	1,0
		1,0
Пипетки	1,0	1,0
		1,0
	1,0	1,0
		1,0
	1,0	1,0
		1,0
* ОМЧ — 1 раз в неделю.
** Сульфитредуцирующие клостридии — 1 раз в квартал.


		Составил:

Дата введения:

		Проверил:

А.4 Формуляр для записи результатов контроля паразитарной загрязненности поверхностей в лаборатории


	Наименование организации	Формуляр ______
	Испытательный лабораторный центр Микробиологическая (паразитологическая) лаборатория	действует с: _______________ Стр ____ из _____
	Контроль качества проведения дезинфекционных мероприятий в паразитологической лаборатории (комната, помещение или бокс и т.д.) методом смыва


Дата прове-	Вид иссле-	Всего количество	Приме- няемая	НД на методы	Место/ поверх-	Результат исследования	Фамилия и
дения иссле- дова- ния	дова- ния	отобранных проб для исследования	методика при исследо- вании проб	иссле- дования	ность, с которого отбира- ется смыв	Яйца гель- мин- тов	Цисты/ ооцисты патоген- ных простей- ших	подпись прово- дившего иссле- дование
		В одном помещении рекомендуется отбирать не менее 10 проб

А.5 Формуляр для записи результатов контроля качества питательных сред


	Наименование организации	Формуляр ______
	Испытательный лабораторный центр Микробиологическая лаборатория	действует с: _______________ Стр ____ из _____
	Результат внутренних испытаний питательных сред, приготовленных лабораторией

Наименование питательной среды:

Внешний вид упаковки:

Внешний вид питательной среды:

Этап взвешивания навески среды и

Этап кипячения,

Этап внесения

Режим стерили-

Этап внесения

Ожидаемый:

Наблюда-

ется:

растворения. Приготовленный объем:

мин

добавок до стерилизации

зации:

, мин

добавок после стерили-

зации

Обезвоженная среда (и код) серия, срок годности:

Произво-

дитель:

Коли-

чество:

Коли-

чество ДВ:

Добавка серия, срок годности:

Произво-

дитель:

Коли-

чество:

Коли-

чество ДВ:

Физический контроль качества

Ожидаемое значение pH

Измерен-

ный pH

Качество подтверждено:

Дефекты:

Дата/подпись

да

нет

Ожидаемое заполняющее количество и/или толщина слоя:

Наблюда-

ется:

Качество подтверждено:

Дефекты:

Дата/подпись

да

нет

Ожидаемый цвет:

Наблюда-

ется:

Качество подтверждено:

Дефекты:

Дата/подпись

да

нет

Ожидаемая прозрачность/

присутствие

Наблюда-

ется:

Качество подтверждено:

Дефекты:

Дата/подпись

оптических

да

нет

артефактов:

Ожидаемые стабильность/

постоянство/

Наблюда-

ется:

Качество подтверждено:

Дефекты:

Дата/подпись

влажность геля:

да

нет

Микробное загрязнение

Номера испытуемых чашек или пробирок:

Результат:

Качество подтверждено:

Номера загрязненных чашек или пробирок:

Дата/подпись

Инкубация:

да

нет

Микробиологический рост —

Производительность

Метод контроля: количественный

качественный

Штаммы:

Критерии:

Результат:

Качество подтверждено:

Дата/подпись

да

нет

Инкубация:

Эталонная среда:

Микробиологический рост —

Селективность

Метод контроля: количественный

качественный

Штаммы:

Критерии:

Результат:

Качество подтверждено:

Дата/подпись

да

нет

Инкубация:

Эталонная среда:

Микробиологический рост —

Специфичность

Метод контроля: количественный

качественный

Штаммы:

Критерии:

Результат:

Качество подтверждено:

Дата/подпись

да

нет

Инкубация:

Эталонная среда:

Выпуск партии

Подробности

Выпуск партии: да

нет

Дата/подпись

хранения

Результат внутренних испытаний питательных сред, приготовленных лабораторией


		Составил:

Дата введения:

		Проверил:

Приложение Б

(обязательное)

Методы санитарно-паразитологического исследования смывов с поверхностей, воздуха и пыли для проведения внутрилабораторного контроля

Б.1 Исследование смывов с поверхностей при осуществлении внутрилабораторного контроля в паразитологических лабораториях (комнатах, помещениях)

Б.1.1 Отбор проб и подготовка к исследованию

При определении обсемененности возбудителями паразитарных болезней в лабораториях (комнатах, помещениях), задействованных в паразитологических исследованиях не реже 1 раза в месяц, отбираются смывы с поверхностей.

Смывы берут с любых поверхностей в лаборатории (комнате, помещении), непосредственно задействованных в паразитологических исследованиях (столы, стены, рабочие поверхности микроскопов, лотки, руки, халаты, спецодежда персонала, ручки дверей, ручки и поверхности раковин, поверхности фильтровальных установок, полы, санузел лаборатории и т.д.)

Для отбора смывов применяют кисточки из щетины, беличьи кисточки, смоченные в 1%-ном растворе едкого натра, или в 10%-ном растворе глицерина, или 1%-ном растворе стирального порошка. В центрифужные пробирки наливают до половины объема 10%-ный раствор глицерина. Для каждой группы предметов берут отдельную пробирку и кисточку, которые нумеруются (номер кисточки и пробирки должны совпадать). В одну пробу, т.е. в пробирку, можно собирать смывы с нескольких однородных предметов (например: столы, рабочие поверхности микроскопа, ручки дверей и т.д.).

Смывы с рук персонала берут у каждого отдельно, чтобы при обнаружении яиц гельминтов или/и цист кишечных простейших можно было знать, какой именно сотрудник нарушает правила гигиены.

Для снятия яиц гельминтов с рук персонала рекомендуется мыть их раствором питьевой соды или 1%-ным раствором едкого натра; смывные воды центрифугируют, осадок можно также профильтровать в аппарате Гольдмана и затем исследовать фильтры.

При взятии смывов с поверхностей кисточкой, смоченной в растворе, многократно и с нажимом проводят по поверхности однородных предметов обследуемого объекта. Причем кисточку в процессе отбора часто и тщательно ополаскивают в пробирке и вновь делают смывы с поверхности предметов.

Площадь исследуемой поверхности для одной пробы смывов составляет не менее 0,25 м

(0,5

0,5 м).

После отбора проб пробирки с вложенными в них кисточками в штативах доставляются на паразитологическое исследование.

Этикетирование целесообразно проводить не для каждой отдельной пробирки.

Б.1.2 Исследование смывов на яйца гельминтов

Б.1.2.1 Метод центрифугирования

Ход исследования

Кисточки со смывами ополаскивают в жидкости пробирки.

Центрифугируют полученные пробы в этих же пробирках, надосадочную жидкость сливают.

Осадок помещают на предметное стекло и микроскопируют.

Плотный осадок делят на несколько предметных стекол.

Б.1.2.2 Флотационный метод

Ход исследования

В пробирку со смывом добавляют 5-6 см

Время экспозиции 12-15 мин.

При использовании флотационного раствора хлорида натрия — 20-25 мин. Затем покровное стекло снимают пинцетом и полученную висячую каплю на покровном стекле аккуратно переносят на предметное стекло в каплю 50%-ного раствора глицерина. Полученный препарат микроскопируют при 80-150-кратном увеличении.

Б.1.3 Исследование смывов на цисты простейших

Б.1.3.1 Метод Романенко

Ход исследования

Кисточки со смывом ополаскивают в жидкости пробирки, затем сливают эту жидкость в высокий цилиндр емкостью 0,5-1,0 дм

с чистой водой, которую наливают с таким расчетом, чтобы при добавлении смыва не превысить общую емкость цилиндра. Всплывшие на поверхность жидкости кусочки бумаги, ткани и другие крупные частицы удаляют петлей с сеткой, а оставшуюся жидкость отстаивают в течение 12-16 ч, надосадочную жидкость удаляют, а осадок микроскопируют, окрашивая 1%-ным раствором Люголя.

Б.1.3.2 Метод иммуномагнитного разделения и мечение флуоресцирующими антителами (ИМС) на определение цист и ооцист кишечных простейших.

Б.1.4 Материал, оборудование и реактивы

Магнитный штатив.

Автоматические пипетки на 1-10 мкл, 20-200 мкл и 100-1000 мкл.

Наконечники для автоматических пипеток.

Градуированная пипетка на 10 см

Лабораторный вортекс.

Лабораторный ротатор.

Пробирки для иммуномагнитной сепарации (ИМС-пробирки или плоскостенные пробирки) или обычные центрифужные.

Штатив для ИМС-пробирок.

Пробирки типа Эппендорф на 1,5 см

Штатив для пробирок типа Эппендорф.

Флуоресцентный микроскоп с набором необходимых фильтров и принадлежностей в рекомендованной комплектации или насадка на микроскоп ОптиЛюм.

Стекла предметные SuperStick

S100-2 (два окна), или обычные предметные стекла.

Пастеровские пипетки.

Буфер для иммуномагнитной сепарации Grab

Buffer A (1), 2-концентрированный.

Иммуномагнитная суспензия Giardia-Grab

IMS Beads (2), специфичная к цистам лямблий.

Иммуномагнитная суспензия Crypto-Grab

IMS Beads (3), специфичная кооцистам криптоспоридий.

Моющий буфер Grab

Buffer В (4).

Таблетированный фосфатный буфер PBS (6).

DAPI концентрированный раствор (7), 2 мг/см

DAPI в метаноле.

Моющий буфер SureRinse

(8).

Иммунореагент Aqua-Glo

G/C (9) в рабочем разведении.

Положительный контроль (10).

Контрастирующий краситель (11), С101.

Защитная среда (12) No-Fade

, M101 или E1-vanol No-Fade

, M102.

Метанол.

0,1 Н раствор соляной кислоты.

1 Н раствор NaOH.

Примечание — Допускается использование материалов, оборудования и реактивов иных производителей с аналогичными характеристиками, но не ниже указанных.

Б.1.5 Подготовка проб (смывов) к исследованию

Подготовка проб (смывов) к исследованию после фильтрации смыва с рабочих поверхностей осадок с фильтров (МФАС или АТМ) смывают в 10 см

дистиллированной воды, переливают в центрифужную пробирку и центрифугируют 10 мин при 1500 об/мин. Затем удаляют надосадочную жидкость и проводят исследование осадка. При этом осадок должен быть не более 1 см

. Если получился больший объем осадка, его необходимо ресуспендировать дистиллированной водой.

В одной ИМС-пробирке обрабатывается не более 0,5 см

концентрата пробы, ресуспендированного в 3 см

дистиллированной воды. Больший объем осадка необходимо перемешать с дистиллированной водой, разделить на части, в каждой из которых должно содержаться не более 0,5 см

исходного осадка, и далее обрабатывать как две и более пробы.

Примечание — Диагностические наборы с иммунореагентами и буферными растворами перед использованием выдержать в течение одного часа при комнатной температуре.

Б.1.6 Иммунохимическое связывание, магнитная сепарация и промывка

С помощью градуированной пипетки на 10 см

, предварительно омытой дистиллированной водой, перенести в пробирку для иммуномагнитной сепарации (ИМС-пробирку или плоскостенную пробирку) исследуемый концентрат, ресуспендированный в 3 см

дистиллированной воды. Омыть пробирку, в которой находился концентрат, двумя порциями дистиллированной воды по 1 см

, оба смыва перенести в пробирку для иммуномагнитной сепарации. Общий объем раствора в пробирке для ИМС составит 5 см

Внести в пробирку для ИМС 5 см

2-концентрирован-ного буфера Grab

Buffer A (1). Плотно закрыть крышку пробирки и перемешать раствор, переворачивая пробирку 3 раза. По выполнении всех процедур переноса пробы общий объем раствора в ИМС-пробирке составляет 10 см

Перемешать иммуномагнитную суспензию Giardia-Grab

IMS Beads (2) на вортексе в течение 20 с, отобрать 100 мкл суспензии и перенести ее в ИМС-пробирку, в которой уже находится проба. Перемешать иммуномагнитную суспензию Crypto-Grab

IMS Beads (3) на вортексе в течение 20 с, отобрать 100 мкл суспензии и перенести ее в пробирку для ИМС, в которой уже находится проба. Закрепить пробирку для ИМС в штативе лабораторного ротатора перпендикулярно к оси вращения. Перемешивать в течение 1 ч при скорости 18 об/мин при комнатной температуре. Извлечь ИМС-пробирку из ротатора. Поместить ее в магнитный штатив плоской стороной к магниту. Бережно покачивать штатив с пробиркой вручную в течение 3 мин, поворачивая ее на 90° от себя/на себя, при этом плоская сторона пробирки должна находиться снизу.

Остановив покачивание в вертикальном положении пробирки и не вынимая ее из магнитного штатива, осторожно вылить надосадочную жидкость из пробирки. Не вынимая ИМС-пробирку из штатива и не касаясь магнитного осадка на стенке, отобрать остатки жидкости со дна пробирки с помощью пастеровской пипетки.

Извлечь пробирку из штатива, добавить в пробирку 0,48 см

буфера Grab

Buffer В (4). Поворачивая пробирку, осторожно смыть суспензию с плоской стенки. С помощью пастеровской пипетки омыть плоскую стенку пробирки.

С помощью пастеровской пипетки перенести 0,48 см

суспензии в пробирку типа Эппендорф на 1,5 см

Дважды омыть плоскую стенку ИМС-пробирки 0,48 мл буфера Grab

Buffer В, осторожно поворачивая пробирку и используя ту же пастеровскую пипетку. Последовательно перенести оба смыва в пробирку типа Эппендорф на 1,5 см

с помощью одной пастеровской пипетки, при этом избегать образования пузырей. Подождать примерно 15 с и перенести остатки жидкости из ИМС-пробирки в туже пробирку типа Эппендорф.

Закрыть крышку пробирки типа Эппендорф и поместить ее в магнитный штатив. Бережно покачивать штатив с пробиркой вручную в течение 1 мин, поворачивая ее на 180° от себя/на себя, при этом пробирка должна находиться сверху.

Не вынимая пробирку типа Эппендорф из магнитного штатива и не касаясь суспензии на стенке пробирки, с помощью пастеровской пипетки осторожно отобрать всю жидкость из пробирки.

Б.1.7 Диссоциация

Извлечь пробирку типа Эппендорф из магнитного штатива, добавить в пробирку 50 мкл 0,1 Н раствора соляной кислоты. Перемешать суспензию на вортексе в течение 50 с.

Инкубировать пробирку в течение 10 мин при комнатной температуре.

Перемешать суспензию в микроцентрифужной пробирке на вортексе в течение 30 с.

Установить пробирку в магнитный штатив. Через 30 с осторожно, не касаясь осадка на стенке пробирки, с помощью автоматической пипетки отобрать 50 мкл супернатанта и перенести его в окно предметного стекла (слайда) SuperStick

(5), в котором находится 6 мкл 1,0 Н раствора NaOH.

Повторить процедуры диссоциации. Обе порции исследуемого раствора можно внести в одно и то же или в два окна предметного стекла (слайда) SuperStick

для последующего иммунофлуоресцентного мечения. Внести в окно предметного стекла (слайда) положительный контроль с цистами лямблий и криптоспоридий (контрольный образец прилагается и находится в диагностическом наборе), предварительно ресуспендированный с помощью вортекса за 20 с.

Подсушить предметное стекло (слайд) SuperStick

в потоке теплого (не горячего) воздуха или с помощью устройства для сушки предметных стекол (слайдов) (примерно 15-30 мин).

Б.1.8 Подготовка к иммунофлуоресцентному мечению

Растворить 1 таблетку таблетированного фосфатного буфера (6) в 100 см

дистиллированной воды.

Приготовить рабочий раствор DAPI: развести 1 мкл 500х-концентрированного раствора (7) из диагностического набора в 5 см

готового фосфатного (PBS) буфера. Рабочий раствор DAPI необходимо готовить в день выполнения исследования. Использовать только свежеприготовленный рабочий раствор DAPI. Избегать воздействия прямого солнечного света.

Примечание — Для фиксации цист и ооцист на предметном стекле (слайде) внести в каждое окно предметного стекла (слайда) по 45 мкл абсолютного метанола и высушить (примерно 30 мин). После фиксации метанолом интенсивность флуоресценции DAPI возрастает.

Б.1.9 Флуоресцентное и иммунофлуоресцентное мечение

Убедиться в завершении сушки предметного стекла (слайда). Внести в окна предметного стекла (слайда) 50 мкл рабочего раствора DAPI. Инкубировать при комнатной температуре приблизительно 1 мин. Внести в окна слайда 50-100 мкл моющего буфера SureRinse

(8), подождать 1 мин. Осторожно наклонить предметное стекло (слайд) (узким краем вниз) и с помощью фильтровальной бумаги удалить моющий буфер, не касаться при этом поверхности окна предметного стекла (слайда).

Внести одну каплю (ок. 45 мкл) иммунореагента AquaGlo

G/C (9) в окна предметного стекла (слайда). При необходимости, с помощью аппликатора или стеклянной палочки распределить реагент по лунке, не касаться при этом поверхности окна предметного стекла (слайда).

Поместить препараты в ячейку влажности и инкубировать не менее 25 мин при 37°С или не менее 40 мин при комнатной температуре. Допускается более длительное время инкубации.

Внести в окна предметного стекла (слайда) 50-100 мкл моющего буфера SureRinse

Примечание — Чтобы снизить неспецифическую флюоресценцию и выделить контрастный фон для лучшего наблюдения зеленой флюоресценции цист и ооцист, используется следующая процедура: нанести по одной капле контрастирующего красителя (11) в каждую лунку, инкубировать 1 мин при комнатной температуре. Внести в окна предметное стекла (слайда) 50-100 мкл моющего буфера SureRinse

Разложить препараты на наклонном штативе для предметных стекол (слайдов), подсушить в токе теплого воздуха.

Нанести 1 каплю защитной среды (12) No-Fade

в каждую лунку. Нанести покровное стекло.

Примечание — Меченые препараты должны храниться в темноте при температуре (5±3)°С. Не допускать замораживания. Меченые препараты, защищенные средой No-Fade

, могут храниться при температуре (5±3)°С в течение по крайней мере 6 месяцев.

Б.1.10 Люминесцентная микроскопия

Исследуют препараты не менее чем при 100-кратном общем увеличении на наличие яблочно-зеленой флюоресценции, микроскопируя все поля зрения лунки предметного стекла (слайда). При использовании каждой новой партии реагентов и перед началом микроскопии препаратов исследуемых проб следует предварительно просмотреть препарат положительного контроля, для чего используется контрольная суспензия с точно подсчитанными цистами лямблий и ооцистами криптоспоридий, прилагаемая в диагностическом наборе.

Результат:

— цисты лямблий — светящиеся и флюоресцирующие яблочно-зеленым светом объекты, от овальных до сферических (от 10 до 18 мкм в диаметре), с ярко подсвеченными краями;

— ооцисты криптоспоридий — сверкающие и флюоресцирующие яблочно-зеленым светом объекты, от овальных до сферических (от 2,5 до 6 мкм в диаметре), с ярко подсвеченными краями.

Б.2 Санитарно-паразитологическое исследование пыли и воздуха в помещениях для осуществления внутрилабораторного контроля

Б.2.1 Отбор проб и подготовка к исследованию

Для сбора пыли используют камеру, представляющую собой металлический цилиндр длиной 110-120 мм с внутренним диаметром 27 мм [по ширине стандартного предметного стекла (слайда)]. В стенке цилиндра имеется всасывающее отверстие размером 2

25 мм. Внутри цилиндра укреплены 2 стержня, фиксирующие предметное стекло (слайд) в диаметральной плоскости и продольном направлении. С одного конца цилиндр закрывают съемной крышкой, а открытым концом присоединяют к патрубку пылесоса или другого всасывающего устройства (аспиратор, воздуходувка и т.п.).

На одну сторону чистого предметного стекла (слайда) наносят тонкий слой 50%-ного раствора глицерина в виде полоски шириной 1,5-2,0 см и длиной 4-5 см. Предметное стекло (слайд) вставляют в камеру так, чтобы смазанная глицерином поверхность была обращена к всасывающему отверстию камеры. Камеру закрывают крышкой. Затем включают пылесос или другое всасывающее устройство и производят отбор пыли.

При отборе проб всасывающее отверстие камеры должно быть обращено к исследуемой поверхности и находиться на расстоянии 2-3 мм. Перемещать всасывающее устройство во время работы над поверхностью следует равномерно. На одну пробу собирают пыль с площади не менее 0,25 м

в течение 20 с, воздуха — 60 с. После отбора пробы пылесос или другое всасывающее устройство выключают, открывают камеру и извлекают предметное стекло (слайд). На смазанной стороне предметного стекла (слайда) будет отчетливо виден пылевой след, представляющий собой готовый препарат, который микроскопируют (при увеличении

56-80). Если препарат получился плотным, его просветляют 1-2 каплями воды или 50%-ного раствора глицерина. Под микроскопом среди пылевых частиц хорошо видны яйца гельминтов. Микроскопирование препаратов может производиться на обследуемом объекте сразу после отбора проб или в лаборатории.

Сбор проб пыли и воздуха непосредственно на предметное стекло (слайд), покрытое клейкой смазкой, исключает использование фильтров, центрифугирование, приготовление мазков и другие действия, во время которых могут быть потери яиц гельминтов или нарушение их целостности. Кроме того, использование клейких предметных стекол (слайдов) ускоряет время отбора проб и позволяет, что особенно важно при обследовании детских учреждений, просматривать предметные стекла на местах обследования. Последнее дает возможность на местах составлять план мероприятий по предупреждению загрязнения и дегельминтизации внешней среды.

Б.2.2 Исследование пыли и воздуха на яйца гельминтов. Метод Каледина и Романенко (1982)

Для отбора и исследования проб пыли используют липкую прозрачную целлофановую ленту (скотч) со слоем клея до 3 мм.

Ленту шириной 20 мм и длиной 7-8 см приклеивают липким слоем к разным участкам исследуемой поверхности 6-8 раз, в зависимости от запыленности объекта, а затем ее помещают на предметное стекло (слайд). Липкой лентой нельзя делать отбор проб пыли с бумажных поверхностей (книги), мягких игрушек и очень загрязненных предметов (половики, коврики).

При проведении исследования ленту отклеивают на участках микроскопирования и вносят под нее несколько капель касторового или вазелинового масла (для устранения пузырьков воздуха), исследуют при малом увеличении микроскопа. Препарат может храниться несколько дней.

Приложение В

(обязательное)

Расчет достоверности различий средних значений количества колоний, выросших на контрольной и исследуемой средах по Стьюденту-Фишеру

Достоверность различия средних значений количества колоний, выросших на контрольной и исследуемой средах/мембранных фильтрах, оценивают с использованием критерия Стьюдента для вероятности 95%.

Для определения достоверности различия средних величин двух вариационных рядов с использованием критерия Стьюдента сначала рассчитывают дисперсию для каждого сравниваемого ряда значений, далее вычисляется критерий Стьюдента (t).

В.1 Определение дисперсии

Дисперсию (

) вычисляют по формуле:

, (В.1)

где

— знак суммирования;

— варианты количества колоний на чашках (фильтрах) на данной среде;

M — среднее арифметическое значение количества выросших колоний;

N — количество посевов в исследовании, выполненных на данной среде.

В.2 Расчет значения критерия Стьюдента

Критерий Стьюдента t вычисляется по формуле:

, (В.2)

где

— сравниваемые средние арифметические значения количества колоний;

— дисперсии сравниваемых рядов посевов;

— количество посевов в исследуемых вариационных рядах.

Для оценки достоверности различия средних величин полученное значение критерия сравнивается с табличным значением, для числа степеней свободы

и вероятности 95%. Значения

по Стьюденту-Фишеру приведены в таблице В.1. Знак критерия не принимается во внимание.

Если полученное значение критерия больше табличного, то различие между сравниваемыми средними величинами достоверно.

Таблица В.1 — Значения

(по Стьюденту-Фишеру)


Число степеней вероятности свободы n	Требуемый уровень доверительного интервала средней p
	0,95	0,99
1	12,71	63,66
2	4,3	9,92
3	3,18	5,84
4	2,78	4,6
5	2,57	4,03
6	2,45	3,71
7	2,36	3,5
8	2,31	3,36
9	2,26	3,25
10	2,23	3,17
11	2,2	3,11
12	2,18	3,06
13	2,16	3,01
14	2,14	2,98
15	2,13	2,95
16	2,12	2,92
17	2,11	2,9
18	2,1	2,88
19	2,09	2,86
20	2,09	2,84
21	2,08	2,83
22	2,07	2,82
23	2,07	2,81
24	2,06	2,8
25	2,06	2,79
26	2,06	2,78
27	2,05	2,77
28	2,05	2,76
29	2,04	2,76
30	2,04	2,75
40	2,02	2,7
60	2	2,66
120	1,98	2,62
бесконечность	1,96	2,58

Оценку неопределенности измерений проводят в соответствии с ГОСТ Р ИСО 21748.

Библиография


[1]	СанПиН 3.3686-21	Санитарно-эпидемиологические требования по профилактике инфекционных болезней
[2]	Р 3.5.1904-04	Использование ультрафиолетового бактерицидного излучения для обеззараживания воздуха в помещениях
[3]	СанПиН 1.2.3685-21	Гигиенические нормативы и требования к обеспечению безопасности и (или) безвредности для человека факторов среды обитания


УДК 543.63:544:632:006.354		ОКС 13.060.70

Ключевые слова: качество воды, вода питьевая, внутрилабораторный контроль, микробиологическая лаборатория, паразитологическая лаборатория, обсемененность, стерильность, дистиллированная вода, питательные среды, тест-микроорганизмы, криопротекторы, лиофилизация культур, криозаморозка

Источник

ГОСУДАРСТВЕННОЕ САНИТАРНО-ЭПИДЕМИОЛОГИЧЕСКОЕ НОРМИРОВАНИЕ

РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

Утверждаю

Руководитель Федеральной службы

по надзору в сфере защиты

прав потребителей

и благополучия человека,

Главный государственный

санитарный врач

Российской Федерации

А.Ю.ПОПОВА

30 апреля 2020 г.

2.1.4. ПИТЬЕВАЯ ВОДА И ВОДОСНАБЖЕНИЕ НАСЕЛЕННЫХ МЕСТ

ОРГАНИЗАЦИЯ МОНИТОРИНГА ОБЕСПЕЧЕНИЯ НАСЕЛЕНИЯ КАЧЕСТВЕННОЙ

ПИТЬЕВОЙ ВОДОЙ ИЗ СИСТЕМ ЦЕНТРАЛИЗОВАННОГО ВОДОСНАБЖЕНИЯ

МЕТОДИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

МР 2.1.4.0176-20

3. Введены впервые.

I. Общие положения и область применения

— социально-гигиенического мониторинга (далее — СГМ);

— проверок и расследований в отношении организаций, осуществляющих водоснабжение;

II. Организация контроля качества питьевой воды

2.1. Принципы организации мониторинга качества

питьевой воды

2.1.1. Мониторингу полежит питьевая вода систем централизованного холодного водоснабжения.

2.1.2. Основные задачи организации и функционирования системы мониторинга качества питьевой воды:

2.2. Контроль качества и безопасности воды в рамках СГМ

2.2.1. Организация системы точек контроля в рамках СГМ

2.2.1.3. К точкам обязательного контроля в системе следует отнести:

— подъем станции водоподготовки (1, 2 подъем);

— водовод;

— водопроводная наружная распределительная сеть;

— водопроводные внутренние сети (кран потребителя).

2.2.1.5. Общие принципы выбора точек контроля в распределительной сети:

1) в сельских поселениях:

— до 5000 жителей — не менее 1 точки;

— свыше 5000 жителей — не менее 2 точек;

2) в городских поселениях:

— до 10000 жителей — не менее 4 точек;

— от 10000 до 50000 жителей — не менее 6 точек;

— от 50000 до 100000 жителей — не менее 12 точек;

— от 100000 до 250000 жителей — не менее 16 точек;

— от 250000 до 1000000 жителей — не менее 30 точек;

— от 1000000 до 3000000 жителей — не менее 50 точек;

— свыше 3000000 жителей — не менее 80 точек.

2.2.2. Показатели качества питьевой воды, контролируемые

в рамках СГМ

2.2.3. Кратность отбора проб в рамках СГМ

2.2.3.5. Время отбора проб рекомендуется в часы с максимальным разбором воды из сети.

2.3. Производственный контроль качества и безопасности

питьевой воды

Таблица 1

Количество и периодичность отбора проб питьевой воды

для лабораторных исследований в местах водозабора

Виды показателей

Количество проб в течение одного года, не менее

для подземных источников

для поверхностных источников

Микробиологические

4 (по кварталам года с учетом сезона)

12 (ежемесячно)

Паразитологические

не проводят <*>

12 (ежемесячно)

Органолептические

4 (по кварталам года с учетом сезона)

12 (ежемесячно)

Обобщенные

4 (по кварталам года с учетом сезона)

12 (ежемесячно)

Неорганические и органические вещества

4 (по кварталам года с учетом сезона)

Радиологические

———————————

Таблица 2

Виды определяемых показателей и количество исследуемых

проб питьевой воды перед ее поступлением

в распределительную сеть

Виды показателей

Количество проб в течение одного года, не менее

для подземных источников

для поверхностных источников

Численность населения, обеспечиваемого водой из данной системы водоснабжения, тыс. чел.

до 20

20 — 100

свыше 100

до 100

свыше 100

Микробиологические

50 (1)

150 (2)

365 (3)

Паразитологические

Не проводятся <3>

12 (6)

Органолептические

50 (1)

150 (2)

365 (3)

Обобщенные показатели

4 (4)

6 (5)

12 (6)

24 (7)

Неорганические и органические вещества

4 (4)

12 (6)

Показатели, связанные с технологией водоподготовки

Остаточный хлор, остаточный озон — не реже 1 раза в час, остальные регенты — не реже 1 раза в смену

Радиологические

Примечания:

1. Принимается следующая периодичность отбора проб воды:

1) — еженедельно;

2) — 3 раза в неделю;

3) — ежедневно;

4) — 1 раз в сезон года;

5) — 1 раз в два месяца;

6) — ежемесячно;

7) — 2 раза в месяц.

— превышающим 0,5 ПДК по максимальным значениям в результате проведенного ретроспективного анализа;

— приведенным в санитарных правилах <1>.

———————————

Таблица 3

Количество исследуемых проб питьевой воды

в распределительной водопроводной сети

Количество обслуживаемого населения, тыс. чел.

Количество проб в месяц

до 10

10 — 20

20 — 50

50 — 100

100

более 100

100+1 проба на каждые 5 тыс. чел., свыше 100 тыс. населения

— выбору технологии водоподготовки;

— выбору технологии реконструкции водовода;

— реконструкции существующих сооружений и водоводов;

— капитальному ремонту;

— изменению гидравлических режимов.

— обеспечение в программах исследований унификации, единства выбора показателей наблюдения;

— обеспечение максимального охвата систем водоснабжения.

———————————

2.4. Организация федерального государственного

санитарно-эпидемиологического надзора качества

и безопасности питьевой воды в рамках

проверочных мероприятий

2.4.7. Отбор проб рекомендуется проводить в часы с максимальным разбором воды из сети.

III. Перечень показателей и данных для формирования

федерального информационного фонда СГМ

IV. Аналитическая обработка данных мониторинга, оценка

качества питьевой воды и формирование

управленческих решений

— оперативный анализ результатов лабораторных исследований;

4.4. В зависимости от результатов мониторинга качества питьевой воды возможен следующий алгоритм действий:

———————————

— для канцерогенного риска — не выше 1 x 10-5;

2). Настороженность в отношении наиболее уязвимых групп населения (дети).

3). Реализация сокращенного объема мероприятий.

———————————

<4> Р 2.1.10.1920-04.

4). Реализация расширенного объема мероприятий.

5). Прекращение или ограничение водоснабжения.

———————————

4.5. Примеры формирования стандартных управленческих решений приведены в приложении 4 к настоящим МР.

Приложение 1

к МР 2.1.4.0176-20

МИНИМАЛЬНЫЕ ОБЯЗАТЕЛЬНЫЕ ПЕРЕЧНИ ПОКАЗАТЕЛЕЙ КОНТРОЛЯ

БЕЗОПАСНОСТИ И КАЧЕСТВА ПИТЬЕВОЙ ВОДЫ

1. Минимальный обязательный перечень показателей,

контролируемых в воде водоисточников

1.1. Водоисточник поверхностный

Кратность отбора — 1 раз в месяц

Бактериологические

Общие колиформные бактерии

Термотолерантные колиформные бактерии

Колифаги

Паразитологические

Цисты и ооцисты патогенных простейших, яйца и личинки гельминтов

Неорганические

Аммиак и аммоний-ион (по азоту)

Нитраты (по NO3)

Нитриты (по NO2)

Кадмий

Марганец

Мышьяк

Свинец

Сульфаты

Фосфаты

Хлориды

Цинк

Обобщенные

Нефтепродукты (суммарно)

БПК5

ХПК

ПАВ анионактивные (суммарно)

Растворенный кислород

Органические

Бенз(а)пирен

Гидроксибензол

Органолептические

Запах

Мутность

Кратность отбора — 1 раз в год <6>

———————————

<6> В случае превышения 0,5 ПДК контроль осуществляют ежемесячно до достижения содержания на уровне 0,1 ПДК.

Неорганические

Медь

Никель

Ртуть

Полихлорированные бифенилы

Хром (суммарный)

Радиологические

Удельная эффективная альфа-радиоактивность

Удельная эффективная бета-радиоактивность

1.2. Водоисточник подземный

Кратность отбора — 1 раз в сезон

Бактериологические

Общие колиформные бактерии

Термотолерантные колиформные бактерии

Общее микробное число

Неорганические

Аммиак и аммоний-ион (по азоту)

Барий

Бор

Железо (включая хлорное железо) по Fe

Кадмий

Марганец

Мышьяк

Нитраты (по NO3)

Нитриты (по NO2)

Свинец

Стронций

Сульфаты

Фтор

Хлориды

Цинк

Обобщенные

Жесткость общая

Общая минерализация (сухой остаток)

Окисляемость перманганатная

Органолептические

Запах

Мутность

Цветность

Кратность отбора — 1 раз в год <7>

———————————

<7> В случае превышения 0,5 ПДК контроль осуществляют ежемесячно до достижения содержания на уровне 0,1 ПДК.

Неорганические

Кремний (по Si)

Медь

Никель

Ртуть

Стронций

Хром

Радиологические

Удельная активность радона (222Rn)

Удельная эффективная альфа-радиоактивность

Удельная эффективная бета-радиоактивность

1.3. Водоисточник морской

Кратность отбора — 1 раз в месяц

Бактериологические

Общие колиформные бактерии

E. coli

Колифаги

Энтерококки

Стафилококк

Неорганические

Аммиак и аммоний-ион (по азоту)

Кадмий

Марганец

Мышьяк

Нитраты (по NO3)

Нитриты (по NO2)

Свинец

Сульфаты

Фосфаты

Цинк

Обобщенные

ХПК

БПК5

Нефтепродукты (суммарно)

Органические

Гидроксибензол

Бенз(а)пирен

Органолептические

Запах

Прозрачность

Кратность отбора — 1 раз в год <8>

———————————

<8> В случае превышения 0,5 ПДК контроль осуществляют ежемесячно до достижения содержания на уровне 0,1 ПДК.

Неорганические

Медь

Никель

Ртуть

Хром (суммарный)

Радиологические

Удельная эффективная альфа-радиоактивность

Удельная эффективная бета-радиоактивность

2. Минимальный обязательный перечень показателей,

контролируемых в воде перед подачей

в распределительную сеть

Кратность отбора — 1 раз в месяц

Бактериологические

Общее микробное число

Общие колиформные бактерии

Термотолерантные колиформные бактерии

Колифаги <9>

Паразитологические

Цисты и ооцисты патогенных простейших, яйца и личинки гельминтов <9>

Неорганические

Аммиак и аммоний-ион (по азоту)

Нитраты (по NO3)

Барий

Бор

Железо (включая хлорное железо) по Fe

Кадмий

Кремний (по Si) <10>

Марганец

Мышьяк

Свинец

Сульфаты

Фтор

Хлориды

Цинк

Обобщенные

Жесткость общая

Общая минерализация (сухой остаток)

Нефтепродукты (суммарно) <4>

Окисляемость перманганатная

Органолептические

Запах

Мутность

Цветность

———————————

<9> Только для воды централизованных систем водоснабжения из поверхностных источников.

<10> Только для воды централизованных систем водоснабжения из подземных источников.

Кратность отбора — 1 раз в год <11>

———————————

<11> В случае превышения 0,5 ПДК контроль осуществляют ежемесячно до достижения содержания на уровне 0,1 ПДК.

Неорганические

Бром

Йод

Магний

Медь

Никель

Ртуть

Селен

Хром (общий)

3. Дополнительный (обязательный) перечень химических

показателей, контролируемых в воде перед подачей

в распределительную сеть в зависимости

от способа водоподготовки

Кратность отбора — 1 раз в месяц

Применяемые реагенты

Показатель

Алюминийсодержащие коагулянты

Алюминий

Хлорсодержащие реагенты (за исключением диоксида хлора)

Хлор остаточный (свободный и связанный)

Хлороформ

Бромдихлорметан

Дибромхлорметан

Бромоформ

Диоксид хлора

Хлориты

Озонирование

Формальдегид

Бромат-ион

4. Минимальный обязательный перечень показателей,

контролируемых в воде распределительной сети

Кратность отбора — 1 раз в месяц

Бактериологические

Общее микробное число

Общие колиформные бактерии

Термотолерантные колиформные бактерии

Колифаги <12>

Неорганические

Железо (включая хлорное железо) по Fe

Обобщенные

Окисляемость перманганатная

Органолептические

Запах

Мутность

Цветность

———————————

<12> Только для воды централизованных систем водоснабжения из поверхностных источников.

Кратность отбора — 1 раз в год

только в воде распределительной сети из подземных водоисточников

Радиологические

Удельная активность радона (222Rn)

Удельная эффективная альфа-радиоактивность

Удельная эффективная бета-радиоактивность

5. Дополнительный (обязательный) перечень химических

показателей, контролируемых в воде распределительной сети

в зависимости от способа водоподготовки

Кратность отбора — 1 раз в месяц

Применяемые реагенты

Показатель

Алюминийсодержащие коагулянты

Алюминий

Хлорсодержащие реагенты (за исключением диоксида хлора)

Хлороформ

Бромдихлорметан

Дибромхлорметан

Бромоформ

Диоксид хлора

Хлориты

Озонирование

Формальдегид

Бромат-ион

6. Дополнительный перечень показателей

(определяются в случае превышения допустимых уровней одного

или более основных бактериологических показателей, а также

по эпидемическим показаниям):

1.1. Водоисточник поверхностный

вирусологические

Вирусы (энтеровирусы, ротавирусы, вирусы гепатита A и другие)

бактериологические

Возбудители кишечных инфекций бактериальной природы

1.2. Водоисточник подземный

вирусологические

Вирусы (энтеровирусы, ротавирусы, вирусы гепатита A и другие)

бактериологические

Возбудители кишечных инфекций бактериальной природы

1.3. Водоисточник морской

вирусологические

Вирусы (энтеровирусы, ротавирусы, вирусы гепатита A и другие)

бактериологические

Возбудители кишечных инфекций бактериальной природы

2. Вода перед подачей в распределительную сеть

вирусологические

Вирусы (энтеровирусы, ротавирусы, вирусы гепатита A и другие)

бактериологические

Возбудители кишечных инфекций бактериальной природы, Pseudomonas aeruginosa

Споры сульфитредуцирующих клостридий (при оценке эффективности технологии обработки воды)

Приложение 2

к МР 2.1.4.0176-20

Таблица 2.1.1

Паспорт источника централизованной системы

холодного водоснабжения

Сведения о водном объекте

Сведения о водозаборе

Сведения о точке контроля качества воды источника централизованной системы холодного водоснабжения

Население, пользующееся водой из данного источника, чел

Наличие (отсутствие) санитарно-эпидемиологического заключения о соответствии границ зон санитарной охраны и ограничений использования земельных участков в границах таких зон санитарным правилам

Группа

Наименование водного объекта

Номер скважины для подземного источника

Код водного объекта

Организация, осуществляющая водозабор в целях холодного водоснабжения

Местоположение водозабора

Номер (код) водозабора

Адрес точки

Код точки контроля водозабора

Географические координаты точки контроля

ИНН

Адрес

Наименование

Субъект Российской Федерации

Муниципальный район (городской округ)

Внутрирайонное МО

Городское или сельское поселение

Х-координаты точки (с.ш.)

У-координаты точки (в.д.)

Градусы (ГГ)

Минуты (ММ)

Секунды (СС)

Градусы (ГГ)

Минуты (ММ)

Секунды (СС)

10.

11.

12.

13.

14.

15.

16.

17.

18.

19.

20.

21.

22.

В качестве источника информации используются

Сведения о водном объекте

Сведения о водозаборе

Организация, осуществляющая водозабор в целях холодного водоснабжения

Местоположение водозабора

графы 8 — 11 — справочник ОКТМО;

графа 12 — данные организации, осуществляющей водоснабжение;

Сведения о точке контроля качества воды источника централизованной системы холодного водоснабжения

графа 13 — блок ЕИАС Роспотребнадзора «Справочник РПН/Точка отбора»;

графа 14 — формируется в соответствии с правилами, утвержденными Роспотребнадзором;

графы 15 — 20 — определяются с помощью GPS-приемника;

графа 21 — данные организации, осуществляющей водоснабжение;

графа 22 — данные Роспотребнадзора.

Таблица 2.1.2

Паспорт точки перед подачей в распределительную сеть

Субъект Российской Федерации

Муниципальный район (городской округ)

Внутрирайонное МО

Городское или сельское поселение

Номер (код) водозабора

Наименование станции водоподготовки (водопровода)

Адрес водопровода

Номер (код) водопровода

Организация, эксплуатирующая водопровод

Характеристика водоочистных сооружений

Население, пользующееся питьевой водой из данного водопровода, чел

Мощность, м3/сут.

Комплекс очистных сооружений

Обеззараживающая установка

Год запуска

Год последнего капитального ремонта, реконструкции

ИНН

Адрес

Наименование

проектная

фактическая

Наличие (отсутствие) (да/нет)

Состав (механическая, коагуляция, фильтрация и т.д.)

Наличие (отсутствие) (да/нет)

Способ обеззараживания

10.

и.

12.

13.

14.

15.

16.

17.

18.

19.

20.

Таблица 2.1.2

(продолжение)

Код контроля точки перед подачей в распределительную сеть

Географические координаты точки контроля

Х-координаты точки (с.ш.)

У-координаты точки (в.д.)

Градусы (ГГ)

Минуты (ММ)

Секунды (СС)

Градусы (ГГ)

Минуты (ММ)

Секунды (СС)

21.

22.

23.

24.

25.

26.

27.

В качестве источника информации используются

графы 1 — 4 — справочник ОКТМО;

графа 5 — таблица 2.1.1 (графа 13);

графы 6 — 8 — данные организации, эксплуатирующей водопровод;

Организация, эксплуатирующая водопровод

Характеристика водоочистных сооружений

графы 12 — 20 — данные организации, эксплуатирующей водопровод;

графа 21 — формируется в соответствии с правилами, утвержденными Роспотребнадзором;

графы 22 — 27 — определяются с помощью GPS-приемника.

Таблица 2.1.3

Паспорт точки контроля в распределительной сети

Субъект Российской Федерации

Муниципальный район (городской округ)

Внутрирайонное МО

Городское или сельское поселение

Номер (код) водозабора

Номер (код) водопровода

Наличие дополнительного обеззараживания (да/нет)

Тип точки в распределительной сети

Адрес точки

Код точки контроля в распределительной сети

Географические координаты точки контроля

Х-координаты точки (с.ш.)

У-координаты точки (в.д.)

Градусы (ГГ)

Минуты (ММ)

Секунды (СС)

Градусы (ГГ)

Минуты (ММ)

Секунды (СС)

10.

11.

12.

13.

14.

15.

16.

В качестве источника информации используются

графы 1 — 4 — справочник ОКТМО;

графа 5 — таблица 2.1.1 (графа 12);

графа 6 — таблица 2.1.2 (графа 8);

графа 7 — 8 — данные организации, эксплуатирующей водопровод;

графа 10 — формируется в соответствии с правилами, утвержденными Роспотребнадзором;

графы 11 — 16 — определяются с помощью GPS-приемника;

Таблица 2.1.4

Вещества, рассматриваемые как приоритетные загрязнения

питьевой воды централизованной системы

холодного водоснабжения

Номер (код) водозабора

Номер (код) водопровода

Показатель

Способ поступления загрязняющего вещества

Население, пользующееся питьевой водой из данного водопровода, чел.

загрязнение источника

обработка воды

транспортировка воды

В качестве источника информации используются:

графа 1 — таблица 2.1.1 (графа 12);

графа 2 — таблица 2.1.2 (графа 8);

графа 3 — блок ЕИАС Роспотребнадзора «Справочник РПН/Точка отбора»;

графы 4 — 6 — данные организации, осуществляющей водоснабжение;

графа 7 — данные организации, эксплуатирующей водопровод.

Таблица 2.2.1

Сведения о качестве воды источника централизованной системы

холодного водоснабжения (пример)

Код точки контроля водозабора (из табл. 2.1.1, графа 15)

Дата

Показатель

Единица измерения

Результат исследования

Норматив

Ошибка метода исследования

НД на метод исследования

Таблица 2.2.2

Сведения о качестве воды перед подачей в распределительную

сеть (пример)

Код точки контроля перед подачей в распределительную сеть (из табл. 2.1.2, графа 19)

Дата

Показатель

Единица измерения

Результат исследования

Норматив

Ошибка метода исследования

НД на метод исследования

Таблица 2.2.3

Сведения о качестве воды в распределительной сети

Код точки контроля в распределительной сети (из табл. 2.1.3, графа 4)

Дата

Показатель

Единица измерения

Результат исследования

Норматив

Ошибка метода исследования

НД на метод исследования

Таблица 2.3

Численность населения, обеспеченного качественной питьевой

водой из систем централизованного холодного

водоснабжения (пример)

Населенный пункт

Численность населения, чел.

Численность населения, обеспеченного централизованным водоснабжением, чел.

общее

городское

общее

городское

общее

городское

В качестве источника информации используются:

графа 1 — справочник ОКТМО;

Численность населения, чел.

графы 2 — 3 — данные Росстата (на начало календарного года);

Численность населения, обеспеченного централизованным водоснабжением, чел.

графы 4 — 5 — данные организации, осуществляющей водоснабжение;

графы 6 — 7 — данные Роспотребнадзора.

Приложение 3

к МР 2.1.4.0176-20

МЕТОДИЧЕСКИЕ ПОДХОДЫ

К АНАЛИТИЧЕСКОЙ ОБРАБОТКЕ ДАННЫХ МОНИТОРИНГА КАЧЕСТВА

ПИТЬЕВОЙ ВОДЫ

Для оценки качества питьевой воды следует использовать 2 подхода:

I. оценка результатов исследований каждой пробы питьевой воды;

II. оценка результатов исследований, полученных в течение года.

I. Оценка результатов исследований каждой пробы

питьевой воды

———————————

II. Результаты исследований воды, полученные в течение

календарного года

———————————

<14> В случае, если получено два и более модальных значений, следует указывать наибольшее значение.

———————————

Приложение 4

к МР 2.1.4.0176-20

ПРИМЕРЫ ФОРМИРОВАНИЯ СТАНДАРТНЫХ УПРАВЛЕНЧЕСКИХ РЕШЕНИЙ

ПРИ ПРОВЕДЕНИИ МОНИТОРИНГА КАЧЕСТВА ПИТЬЕВОЙ ВОДЫ

Вода перед подачей в распределительную сеть

Мониторируемые показатели качества воды

Стандартные управленческие решения

1.1. Запах

При превышении гигиенического норматива, наличии стойкого специфического запаха, обусловленного технологией очистки (хлор, озон и др.) информировать водоснабжающую организацию, потребовать проведения проверки технических режимов, усиления производственного лабораторного контроля, проанализировать поступившие обращения граждан на ухудшение органолептических свойств воды.

При наличии стойкого специфического химического запаха, вызывающего отрицательные сенсорные реакции (например, запах укропа, растворителя, нефти и др.), организовать расширенное лабораторное исследование исходной воды, при необходимости провести исследование на общую токсичность на альтернативных моделях.

1.2. Мутность

При превышении гигиенического норматива провести анализ ретроспективных данных показателя. В случае наличия динамики роста обратить внимание на соблюдение режима фильтрации, коагуляции, превышение нагрузки на станцию, подготовить указания водоснабжающей организации на проверку, обратив внимание на соблюдение режима водотока работы насосных станций.

При длительной динамике роста показателя обратить внимание на качество воды в водоисточнике. Усилить лабораторный контроль. Обратить внимание на значения показателей: хлороформ и колифаги.

1.3. Цветность

При превышении гигиенического норматива обратить внимание на факторы, определяющие нарушения (увеличение концентраций железа, марганца). Подготовить указания водоснабжающей организации по расследованию причин. Обратить внимание на значения галогеноорганических показателей

1.4. Общая минерализация

Ведется контроль сравнения со средними значениями показателя.

1.5. Жесткость

Ведется контроль сравнения со средними значениями показателя.

1.6. Окисляемость перманганатная

При превышении гигиенического норматива более чем в 4 раза обратить внимание на качество исходной воды в части биологического загрязнения, качество обеззараживания. Обратить внимание на динамику показателей азота (аммоний-ион — нитриты — нитраты). По результатам анализа подготовить предложения водоснабжающей организации.

1.7. Нефтепродукты

При превышении гигиенического норматива провести расследование и определить причину: качество воды водоисточника, санитарное состояние оборудования станции водоподготовки. При сильном запахе нефти информировать население об ограничении использования сырой воды в питьевых целях.

1.8. Алюминий

При превышении гигиенического норматива провести дополнительные лабораторные исследования для определения причин, в том числе в процессах коагуляции воды (при реагентной обработке соединениями алюминия). В случае, когда превышение алюминия носит постоянный характер, провести мероприятия по поиску источника загрязнения (поверхностный смыв в период паводка, дноуглубительные работы на водоеме, сброс промстоков).

1.9. Железо

При превышении гигиенического норматива и многолетних фоновых концентраций обратить внимание на технические работы, проводимые на станциях водоподготовки, водопроводах, насосных станциях, в случае изменения режима водотока.

1.10. Кадмий

При превышении гигиенического норматива обратить внимание на фоновый уровень содержания вещества. Провести расчеты риска здоровью. При значительном превышении сделать расширенный химический анализ с определением общей токсичности на альтернативных моделях, при необходимости приостановить эксплуатацию централизованной системы холодного водоснабжения.

1.11. Марганец

При превышении гигиенического норматива обратить внимание на качество воды водоисточника, оценить среднее содержание в воде водоисточника. При необходимости провести мероприятия по поиску источника загрязнения.

1.12. Вещества 1-го и 2-го класса опасности (медь, мышьяк, никель, ртуть, свинец, цинк и т.д.)

При превышении уровня фонового значения в воде водоисточника гигиенического норматива более чем на величину допустимой ошибки метода определения провести расширенное исследование с постановкой реакции общей токсичности на альтернативных моделях, рассчитать риск здоровью населения, при условии неприемлемого риска приостановить эксплуатацию централизованной системы холодного водоснабжения.

1.13. Аммиак и аммоний-ион (по азоту), нитриты, нитраты

При превышении гигиенических нормативов обратить внимание на процессы нитрификации.

Оценить микробиологические показатели качества воды, обратив внимание на общие колиформные бактерии, термотолерантные колиформные бактерии

1.14. Показатели, характеризующие технологию водоподготовки (формальдегид, остаточный хлор, хлороформ и др.)

При превышении гигиенических нормативов подготовить указание водоснабжающей организации об устранении технологических недостатков. Проводятся расчеты риска здоровью с целью определения ущерба, наносимого потребителям.

1.15. Органические химические препараты, используемые в сельском хозяйстве, стойкие органические соединения

При превышении гигиенических нормативов провести расширенный анализ воды, в том числе воды водоисточника, исследования общей токсичности на альтернативных моделях, расчет риска здоровью, при необходимости приостановить эксплуатацию централизованной системы холодного водоснабжения.

1.16. Микробиологические показатели (общее микробное число, общие колиформные бактерии, термотолерантные колиформные бактерии, колифаги, цисты и ооцисты патогенных простейших, яйца и личинки гельминтов)

При превышении гигиенического норматива по общему микробному числу, общим колиформным бактериям, термотолерантным колиформным бактериям, цистам и ооцистам патогенных простейших, яйцам и личинкам гельминтов проводится повторное микробиологическое исследование. При превышении гигиенического норматива по колифагам проводятся исследование на выявление патогенных микроорганизмов и оперативные мероприятия по устранению загрязнения воды. Обращается внимание на режим обеззараживания, увеличение концентраций нитритов и аммония, нарушения режимов водотока в сетях, наличие аварийных ситуаций на сетях. Население оповещается о необходимости использования кипяченной питьевой воды.

Библиографические ссылки

1. Федеральный закон от 30.03.1999 N 52-ФЗ «О санитарно-эпидемиологическом благополучии населения».

3. Федеральный закон от 07.12.2011 N 416-ФЗ «О водоснабжении и водоотведении»;

15. ГОСТ Р 51232-98 «Вода питьевая. Общие требования к организации и методам контроля качества»;

Источник

УТВЕРЖДЕНЫ
заместителем Главного
государственного
санитарного врача РФ
4 апреля 2000 г. N 11-2/42-09

МЕТОДИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ
«РАДИАЦИОННЫЙ КОНТРОЛЬ ПИТЬЕВОЙ ВОДЫ»

Разработаны авторским коллективом в составе: д.м.н. В.Я.Голиков (Российская медицинская академия последипломного образования) — руководитель, О.Е.Тутельян, С.И.Кувшинников (Федеральный центр госсанэпиднадзора Минздрава России), О.В.Липатова (Департамент госанэпиднадзора Минздрава России), к.г. — м.н. А.Е.Бахур (Лаборатория изотопных методов анализа Всероссийского НИИ минерального сырья Министерства природных ресурсов России), к.ф. — м.н. Ю.Н.Мартынюк (Центр метрологии ионизирующих излучений ГП «ВНИИФТРИ» Госстандарта России), к.т.н. И.П.Стамат, к.б.н. И.П.Стамат, к.б.н. В.Н.Шутов, (Федеральный радиологический центр Санкт-Петербургского НИИ радиационной гигиены Минздрава России).

1. Область применения

1.1. Настоящие методические указания (МР) распространяются на проведение гигиенического контроля для оценки радиационной безопасности питьевой воды, производимой и подаваемой централизованными системами питьевого водоснабжения (далее — питьевая вода), а также на питьевую воду, разливаемую в емкости промышленным способом.

1.2. МР не распространяются на воду нецентрализованных и автономных систем водоснабжения, а также на столовые, минеральные и лечебные воды.

1.3. МР относятся к обычным условиям эксплуатации существующих или вводимых в строй систем водоснабжения. На территориях, загрязненных радионуклидами вследствие радиационных аварий или иных причин, органами Госсанэпиднадзора может устанавливаться расширенный перечень контролируемых в воде радионуклидов, с учетом конкретных условий и специфики радионуклидного состава загрязнения.

1.4. МР предназначены для органов и учреждений санитарно-эпидемиологической службы, осуществляющих государственный и ведомственный санитарно-эпидемиологический надзор за состоянием централизованного питьевого водоснабжения, а также для организаций, эксплуатирующих системы водоснабжения питьевого назначения и осуществляющих производственный контроль за качеством питьевой воды.

2. Нормативные ссылки

В настоящих МР использованы ссылки на следующие нормативные документы:

— Санитарные правила и нормы СанПиН 2.1.4.559-96. Питьевая вода. Гигиенические требования к качеству воды централизованных систем питьевого водоснабжения. Контроль качества;

— Санитарные правила и нормативы СП 2.6.1.758-99. Нормы радиационной безопасности (НРБ-99);

— Руководство по контролю качества питьевой воды. Всемирная организация здравоохранения. (Женева, второе аннотированное издание, 1994 г.);

— МУ 2.1.4.682-97. Методические указания по внедрению и применению Санитарных правил норм СанПиН 2.1.4.559-96 «Питьевая вода. Гигиенические требования к качеству воды централизованных систем питьевого водоснабжения. Контроль качества»;

— ГОСТ 51232-98. Вода питьевая. Общие требования к организации и методам контроля качества воды;

— МИ 2453-98. Методики радиационного контроля. Общие требования.

3. Термины и определения

Питьевая вода — вода, по своему качеству в естественном состоянии или после подготовки отвечающая гигиеническим нормативам и предназначенная для удовлетворения питьевых и бытовых потреблений человека, либо для производства продукции для потребления человеком (пищевых продуктов, напитков и иной продукции).

Источник питьевого водоснабжения — водный объект или его часть, которые содержат воду, отвечающую установленным гигиеническим нормативам для источников питьевого водоснабжения, и используются или могут быть использованы для забора воды в системы питьевого водоснабжения с соответствующей подготовкой или без нее.

Централизованная система питьевого водоснабжения — комплекс устройств, сооружений и трубопроводов, предназначенных для забора, подготовки или без нее, хранения, подачи к местам расходования питьевой воды и открытый для всеобщего пользования.

Счетный образец — определенное количество вещества, полученное в результате физических или химических воздействий на пробу согласно установленной методике и предназначенное для измерений его радиационных параметров на радиометрической установке в соответствии с регламентированной методикой выполнения измерений.

Активность радионуклида (А) — мера радиоактивности какого-либо количества радионуклида, находящегося в данном электрическом состоянии в данный момент времени:

где dN — ожидаемое число спонтанных ядерных превращений из данного энергетического состояния, происходящих за промежуток времени dt. Единицей активности является беккерель (Бк).

Активность радионуклида удельная (объемная) — отношение активности А радионуклида в веществе к массе m (объему V) вещества:

Единица удельной активности — беккерель на килограмм, Бк/кг. Единица объемной активности — беккерель на метр кубический, Бк/м3.

Общая (суммарная) альфа-активность воды:

A_альфа =	Сумма	(A_i х (альфа)эта_i),
i

где A_i — активность i радионуклида, (альфа)эта_i — выход альфа-частиц на распад i радионуклида.

Общая (суммарная) бета-активность воды:

A_бета =	Сумма	(A_i х (бета)эта_i),
i

где A_бета — активность i радионуклида,

(бета)эта_i — выход бета-частиц на распад i радионуклида.

В рамках настоящих МР применительно упрощенной системы анализа:

Общая (суммарная) альфа- или бета-активность воды — условная альфа — или бета-активность счетного образца, полученного из контролируемой пробы с помощью регламентированной методики пробоподготовки, численно равная активности назначенного образца сравнения при одинаковых показаниях используемого радиометра.

Радиометрическая установка — техническое средство (радиометр, спектрометр) для измерения активности (удельной активности) радионуклидов в счетном образце.

Минимальная измеряемая активность, А_мин — активность счетного образца, при измерении которой на данной радиометрической установке за время один час относительная статистическая погрешность составляет 50% (Р = 0.95).

Предел дозы — величина годовой эффективной или эквивалентной дозы техногенного облучения, которая не должна превышаться в условиях нормальной работы.

Уровень вмешательства (УВ) — уровень радиационного фактора, при превышении которого следует проводить определенные защитные мероприятия.

Уровень контрольный — значение контролируемой величины дозы, мощности дозы, радиоактивного загрязнения и т.д., устанавливаемое для оперативного радиационного контроля, с целью закрепления достигнутого уровня радиационной безопасности, обеспечения дальнейшего снижения облучения персонала и населения, радиоактивного загрязнения окружающей среды.

Контроль радиационный — получение информации о радиационной обстановке в организации, в окружающей среде и об уровнях облучения людей (включает дозиметрический и радиометрический контроль).

Случайная (статистическая) погрешность измерения — составляющая погрешности результата измерения, изменяющаяся случайным образом при повторных измерениях одной и той же величины.

Систематическая погрешность измерения — составляющая результата погрешности измерения, постоянная или слабо меняющаяся при повторных измерениях одной и той же величины, и связанная с особенностями методики подготовки счетного образца, условий измерений и процедуры проверки.

Абсолютная погрешность измерения — погрешность результата измерения, выраженная в единицах измеряемой величины.

4. Общие положения

4.1. Настоящие методические рекомендации рассматривают порядок применения общих требований и нормативов в целях обеспечения контроля показателей радиационного качества питьевой воды.

4.2. Радиационная безопасность питьевой воды регламентируется следующими нормативными документами в области санитарно-гигиенических нормативов:

— Санитарные правила и нормативы СП 2.6.1.758-99. Нормы радиационной безопасности НРБ-99;

4.3. При разработке российских гигиенических нормативов питьевой воды учитывались рекомендации ВОЗ и основывались на следующих положениях:

— по данным НКДАР влияние питьевой воды на общую дозу не является преобладающим (за исключением отдельных регионов) и обусловлено в основном природными радионуклидами рядов урана и тория;

— при содержании природных и искусственных радионуклидов в питьевой воде, создающих эффективную дозу меньше 0,1 мЗв за год, не требуется проведение мероприятий по снижению ее радиоактивности;

— этому значению дозы при потреблении воды 2 кг в сутки соответствуют средние значения удельной активности за год (уровни вмешательства — УВ), приведенные в приложении П-2 НБР-99. При совместном присутствии в воде нескольких радионуклидов должно выполняться условие:

где А_i — удельная активность i радионуклида в воде,

УВ_i — соответствующий уровень вмешательства;

— величины 0,1 Бк/кг для общей альфа-активности и 1,0 Бк/кг для общей бета-активности рекомендованы как те уровни при мониторинге питьевой воды, ниже которых не требуется никаких дальнейших мероприятий. В случае их превышения необходим более детальный радионуклидный анализ воды.

4.4. Радиационный контроль воды проводят в местах водозабора системы водоснабжения, перед подачей ее в распределительную водопроводную сеть, а также в точках распределительной сети.

4.5. Для оценки стабильности удельной активности радионуклидов в питьевой воде в течение года рекомендуется проводить измерения ежеквартально, в дальнейшем — по согласованию с органами госсанэпиднадзора.

4.6. При проведении радиационного контроля питьевой воды выполняются следующие основные процедуры:

— отбор проб;

— приготовление счетных образцов;

— измерение общей альфа- и бетта-активности:

— идентификация радионуклидов, измерение их индивидуальных концентраций;

— расчет результатов измерений и погрешностей исследований;

— гигиеническая оценка питьевой воды по критериям радиационной безопасности.

4.7. Отбор, консервацию, хранение и транспортирование проб питьевой воды на радиационные испытания производятся по ГОСТ 24481, а также в соответствии с требованиями стандартов и других действующих нормативных документов на методы определения конкретного показателя, утвержденных в установленном порядке.

4.8. Для сопоставимости и воспроизводимости результатов измерения суммарной альфа- и бета-активности с точки зрения соответствия питьевой воды требованиям НРБ-99 и СанПиН 2.1.4.559-96 рекомендуется использование единого способа концентрирования радионуклидов — выпаривание и единых стандартов сравнения — сульфата калия (стандарт «Бета») и сульфата кальция с гомогенно распределенным 239 Pu (стандарт «Альфа») как наиболее близких к реальным пробам по матричному и спектральному составу.

4.9. Контроль за содержанием радионуклидов в питьевой воде организует и (или) осуществляет организация, обеспечивающая водоснабжение населения.

4.10. Лаборатории, осуществляющие радиационный контроль питьевой воды, должны быть аккредитованы на техническую компетентность в установленном порядке в соответствующих областях измерений.

4.11. Государственный надзор за содержанием радионуклидов в питьевой воде осуществляет орган госсанэпиднадзора, который производит оценку доз внутреннего облучения населения территорий и отдельных критических групп населения, подвергающихся наибольшему облучению за счет потребления питьевой воды с повышенным содержанием радионуклидов.

5. Требования к методам и средствам РК

5.1. Методики радиационного контроля питьевой воды должны соответствовать требованиям ГОСТ Р 8.563 и МИ 2453-98, в установленном порядке метрологически аттестованы органами Госстандарта РФ и согласованы с Минздравом РФ.

5.2. Радиометрические установки, используемые для радиационного контроля питьевой воды, должны быть внесены в государственный реестр утвержденных типов средств измерений и проверены. Контрольные меры активности, стандарты сравнения и изотопные индикаторы должны быть аттестованы органами Госстандарта РФ в установленном порядке.

5.3. Радиометрические установки для измерения суммарной альфа- и бета-активности должны отвечать следующим требованиям:

— минимальная измеряемая альфа-активность А_мин (Сумма альфа) для установленных стандартов сравнения не более 0,02 Бк;

— минимальная измеряемая бета-активность А_мин (Сумма бета) для установленных стандартов сравнения не более 0,2 Бк.

5.4. Методики выполнения измерений должны обеспечивать:

— определение общей альфа- и бета-активности проб воды без учета вклада 222 Rn с короткоживущими продуктами его распада (218 Po, 214 Pb, 214 Bi, 214 Po);

— определение удельной активности легколетучих радионуклидов (131 I, 222 Rn и др.) при возможном присутствии их в воде.

5.5. При определении отдельных нормируемых радионуклидов методики выполнения измерений и радиометрические установки должны обеспечивать минимальную измеряемую активность А_мин не выше 0,1 УВ(вода) для данного радионуклида.

5.6. Рекомендуется использовать селективные (избирательные) методы прямого измерения контролируемых радионуклидов, избегая косвенных и расчетных.

6. Определение соответствия питьевой воды критериям радиационной безопасности

6.1. Результатом измерения при определении соответствия питьевой воды критериям радиационной безопасности является измеренное значение удельной активности и погрешность измерения при доверительной вероятности (P = 0,95).

Абсолютная погрешность измерения состоит из случайной (статистической) Дельта_z и систематической (постоянной) Дельта_0 составляющих. Полная погрешность измерения Дельта определяется как:

Дельта = Дельта_z + Дельта_0.

Систематическую погрешность Дельта_0 следует оценивать, исходя из следующего принципа суммирования:

Дельта_0 = кв.корень Дельта(2)_1 + Дельта(2)_2,

где Дельта_1 — погрешности аттестованных метрологических характеристик средств измерений, указанной в свидетельстве о поверке,

Дельта_2 — методическая погрешность подготовки счетного образца. При отсутствии в методике указания последней погрешности, она принимается равной 0,10 (10%).

6.2. Для предварительной оценки соответствия питьевой воды критериям радиационной безопасности используются измеренные значения удельной общей альфа- (А_альфа) и бета- (А_бета) активности и абсолютные погрешности их определения Дельта_альфа и Дельта_бета.

Для питьевой воды подземных источников водоснабжения одновременно с измерениями общей альфа- и бета- активности необходимо определять содержание радона. Результатом измерения является измеренное значение удельной активности радона (А_Rn) и абсолютная погрешность его определения Дельта_Rn.

6.3. Вода соответствует требованиям Норм радиационной безопасности НРБ-99, если одновременно выполняются следующие условия:

А_альфа + Дельта_альфа <= 0,1 Бк/кг (1)

А_бета + Дельта_бета <= 1,0 Бк/кг (2)

А_Rn + Дельта_Rn <= 60 Бк/кг (3)

6.4. При содержании радона в воде выше 60 Бк/кг, необходимо провести дальнейшие исследования в соответствии с пунктами NN 6.9. — 6.10 настоящих МР.

6.5. Если превышен один или оба показателя общей альфа- или бета-активности, то необходимо выполнить радионуклидный анализ.

В таблице 1 приведена рекомендованная последовательность радионуклидного анализа воды в зависимости к минимуму непроизводительные затраты и оптимизировать исследования при радиационном контроле. При формировании перечня контролируемых радионуклидов учитывались распространенность радионуклидов, их концентрации в воде и радиотоксикологические характеристики.

Таблица 1

Рекомендуемая последовательность радионуклидного анализа в зависимости от измеренных уровней общей альфа- и бета-активности

N п/п	Измеренные уровни суммарной альфа- и бета-активности, Бк/кг	Контролируемые радионуклиды	Примечания
1.	А_альфа+Дельта_альфа<= 0,10 А_бета+Дельта_бета<= 1,0	Радионуклидный состав не контролируется
2.	0,10 < А_альфа+Дельта_альфа <= 0,20 А_бета+Дельта_бета<= 1,0	Сокращенный: (210)Ро, (210)Рb*	Проверяется выполнение условия (5). Далее — действия по пп.6.8 — 6.10. настоящих МР.
3.	0,20 < А_альфа+Дельта_альфа <= 0,40 А_бета + Дельта_бета <= 1,0	Расширенный: (210)Ро, (210)Рb, (226)Ra, (228)Ra	Проверяется выполнение условия (5). Далее — действия по пп.6.8. — 6.10. настоящих МР.
4.	А_альфа+Дельта_альфа> 0,40 А_бета+Дельта_бета <= 1,0	Полный: (210)Ро, (210)Рb, (226)Ra, (228)Ra, (238)U, (234)U	При невыполнении условия (4) необходимо дополнительное определение (232)Тh,(230)Th, (228) Th, в районах техногенного загрязнения, действующих АЭС и предприятий ЯТЦ-239+ (240)Pu, (238)Pu, (241)Am. Проверяется выполнение условия (5). Далее — действия по пп.6.8. — 6.10. настоящих МР.
5.	А_бета + Дельта_бета > 1,0 (при любых значениях А_альфа + Дельта_альфа)	(137)Сs, (90)Sr, при необходимости другие техногенные бета- излучающие нуклиды, 40К**

* — необходимость контроля (210)Pb в данном случае вызвана его очень жестким нормативом (УВ(вода) = 0.2 Бк/кг) и типичным для атмосферных выпадений и поверхностных вод соотношением (210)Ро/(210)Pb = 0.2 — 0.3.

** — превышение общей бета- активности может быть обусловлено присутствием 40К, который дает пренебрежимо малый вклад в эффективную дозу за счет питьевой воды.

6.6. При полном радионуклидном анализе рекомендуется выполнять оценку соответствия суммарной активности и суммы активностей радионуклидов по критерию:

A_альфа — Сумма К_iA_i <= 0,2, где (4)

А_альфа — общая альфа-активность,

А_i — измеренная удельная активность i радионуклида в воде,

К_i — коэффициенты, характеризующие несоответствие энергетических спекторов стандарта сравнения и реальной пробы (таблица 2),

0,2 — эмперический коэффициент, учитывающий присутствие в пробе воды других альфа-излучающих нуклидов на уровне не более 5% от значения УВ(вода), определение которых в процессе анализа не выполнялось (например, (232)Th, (230)Th, (228)Th c короткоживущими продуктами его распада, возможно 239+(240)Pu, (238)Pu, (241)Am).

Если условие (4) выполнено, то считается, что все основные дозообразующие альфа-излучающие нуклиды, представленные в пробе, определены, и дальнейшие измерения не требуются.

Таблица 2

Значения коэффициента K_i при использовании стандарта сравнения с Сумма_альфа приблизительно = 5.15 МэВ и нижним уровнем дискриминации альфа-радиометра = 3 МэВ

Альфа-излучающий Радионуклид	Энергия альфа-излучения, кэВ	Значение коэффициента К_i
(232)Th	4010	0.60
(238)U	4195	0.65
(230)Th	4685	0.85
(234)U; (226)Ra	4770; 4780	0.90
(239+240)Pu; (210)Po	5155+5168; 5305	1.00
(228)Th; (241)Am; (238)Pu	5420; 5486; 5500	1.10
(224)Ra; (223)Ra	5680; 5610	1.15

6.7. Вода признается соответствующей критерию радиационной безопасности, если:

Сумма	А_i	+ кв. корень Сумма (	ДельтаА(2)_i	) <= 1, где (5)
УВ_i	У‚_i

А_i — измеренная удельная активность i радионуклида в воде, включая (222)Rn,

У‚_i — соответствующий уровень вмешательства (УВ(вода) согласно Приложению П-2 НРБ-99,

ДельтаА_i — абсолютная погрешность измерения удельной активности i радионуклида.

6.8. При выполнении условия (5) для дальнейшего мониторинга питьевой воды рекомендуется установление местных контрольных уровней для данного водоисточника по общей альфа- и (или) бета- активности, гарантирующих непревышение уровня дозы 0,1 мЗ в/год.

6.9. При невыполнении уровня (5) необходимы дальнейшие исследования воды с целью определения годового поступления радионуклидов:

— Измерения должны характеризовать качество воды на протяжении всего года. Для подземных источников исследуется не менее 4 проб в год, отбираемых в каждый сезон, для поверхностных источников — не менее 12 проб в год, отбираемых ежемесячно.

— Анализы должны отражать качество воды, реально потребляемой населением. При наличии обработки воды или смешения воды различных водозаборов, радиационный контроль проводится перед подачей ее в водопроводную сеть, а для некоторых радионуклидов (газообразных или с малым периодом полураспада, например, для 222Rn) — в точках распределительной сети.

6.10. При обнаружении в воде действующих источников водоснабжения стабильного присутствия радионуклидов выше уровней вмешательства (приложение П-2 НРБ-99) необходимо провести санитарно-эпидемиологическую экспертизу о возможности дальнейшего использования источника водоснабжения или необходимости осуществления защитных мер.

Заместитель
Главного государственного
санитарного врача
Российской Федерации
А.А.МОНИСОВ

Приложение 1

ПРИМЕНЕНИЕ РЕКОМЕНДАЦИЙ ПО СОДЕРЖАНИЮ РАДИОНУКЛИДОВ В ПИТЬЕВОЙ ВОДЕ, ОСНОВАННОЙ НА ВЕЛИЧИНЕ ГОДОВОГО УРОВНЯ ДОЗЫ 0,1 МЗВ

			Определение суммарной альфа- и бета-активности


			V

V			V
Суммарная альфа-активность <= 0,1 Бк/л и суммарная бета-активность <= 1,0 Бк/л			Суммарная альфа-активность > 0,1 Бк/л и суммарная бета-активность > 1,0 Бк/л


					V
					Определение концентраций отдельных радионуклидов и расчет суммарной дозы


					V

		V			V
		Доза <= 0,1 мЗв			Доза >= 0,1 мЗв


V	V			V
Вода пригодна: Никаких дополнительные действия не требуются			Рассмотрение ситуации и при необходимости принятие корректировочных действий для снижения дозы

				V
				Установление контрольных уровней суммарной альфа- и бета- активности для конкретного региона (источника питьевого водоснабжения)

Приложение 2

УРОВНИ ВМЕШАТЕЛЬСТВА (УВ) РАДИОНУКЛИДОВ В ПИТЬЕВОЙ ВОДЕ (ИЗВЛЕЧЕНИЕ ИЗ ПРИЛОЖЕНИЯ П-2 СП 2.6.1.758-99. НОРМЫ РАДИАЦИОННОЙ БЕЗОПАСНОСТИ (НРБ-99)

Радионуклид	Т 1/2	УВ(вода) (Бк/кг)
(3)Н (бета)	12,3 лет	7,7 + 3
(14)С (бета)	5,73 + 3 лет	2,4 + 2
(60)Со (бета, гамма)	5,27 лет	4,1 + 1
(89)Sr (бета)	50,5 сут	5,3 + 1
(90)Sr (бета)	29,1 лет	5,0
(129)I (бета)	1,57 + 7 лет	1,3
(131)I (бета, гамма)	8,04 сут	6,3
(134)Сs (бета, гамма)	2,06 лет	7,3
(137)Сs (бета, гамма)	30,0 лет	1,1 + 1
(210)Pb (бета)	22,3 лет	2,0 — 1
(210)Po (альфа)	138 сут	1,2 — 1
(224)Ra (альфа)	3,66 сут	2,1
(226)Ra (альфа)	1,60 + 3 лет	5,0 — 1
(228)Ra (бета)	5,75 лет	2,0 — 1
(228)Th (альфа)	1,91 лет	1,9
(230)Th (альфа)	7,70 + 4 лет	6,6 — 1
(232)Th (альфа)	1,40 + 10 лет	6,0 — 1
(234)U (альфа)	2,44 + 5 лет	2,9
(238)U (альфа)	4,47 + 9 лет	3,1
(238)Pu (альфа)	87,7 лет	6,0 — 1
(239)Pu (альфа)	2,41 + 4 лет	5,6 — 1
(240)Pu (альфа)	6,54 + 3 лет	5,6 — 1
(241)Am (альфа)	4,32 + 2 лет	6,9 — 1
(222)Rn (альфа)	3,82 бут	60

РН — распространены повсеместно, вероятность достижения или превышения значений УВ(вода) высокая.

РН — распространены повсеместно, достижение или превышение значений УВ-вода возможно в отдельных случаях.

Приложение 3
(справочное)

ПЕРЕЧЕНЬ
МЕТОДИК, ИСПОЛЬЗУЕМЫХ ПРИ РАДИАЦИОННОМ КОНТРОЛЕ ПИТЬЕВОЙ ВОДЫ

1. Подготовка проб природных вод для измерения суммарной альфа- и бета-активности. Методические рекомендации ВИМС. Утверждена. Нач. Центра метрологии ионизирующих излучений ГП ВНИИФТРИ Госстандарта РФ — В.П.Ярына. 28.02.97.

2. Методика измерения суммарной альфа- и бета-активности сухих остатков водных проб с помощью проточного пропорционального счетчика NRR-610. Дополнение к методическим рекомендациям «подготовка проб природных вод для измерения суммарной альфа- и бета-активности». Утверждена. Нач. Центра метрологии ионизирующих излучений ГП ВНИИФТРИ Госстандарта РФ — В.П.Ярына. 19.03.97.

3. Методика измерения суммарной альфа- и бета-активности водных проб с помощью альфа- бета радиометра УМФ-2000. Утверждена Нач. Центра метрологии ионизирующих излучений ГП ВНИИФТРИ Госстандарта РФ — В.П.Ярына. 10.06.97.

4. Радиометрическое определение полония — 210 и свинца — 210 в водах. Утверждена. ВИМС 02.12.92. Согласована. Нач. Центра метрологии ионизирующих излучений НПО ВНИИФТРИ Госстандарта РФ — В.П.Ярына. 10.02.92.

5. Методика выполнения измерений объемной активности изотопов урана (234,238) в пробах природных вод альфа-спектрометрическим методом с радиохимическим выделением. Утверждена. ВИМС. 12.05.99. Утверждена. Директор Центра метрологии ионизирующих излучений ГНМЦ ВНИИФТРИ Госстандарта РФ — В.П.Ярына. 07.05.99.

6. Методика выполнения измерения объемной активности радия — 226 и радия — 228 в пробах природных вод гамма-спектрометрическим методом с предварительным концентрированием. Проект. ВИМС.

7. Методика выполнения измерений объемной активности изотопов тория (232, 230, 228) в пробах природных вод альфа-спектрометрическим методом с радиохимическим выделением. Утверждена. ВНИМС 19.11.97. Согласована. Нач. Центра метрологии ионизирующих излучений НПО ВНИИФТРИ. Госстандарта РФ В.П.Ярына. 10.10.95.

8. Методика выполнения измерений объемной активности изотопов плутония (239 + 240, 238) в пробах природных вод альфа-спектрометрическим методом с радиохимическим выделением. Утверждена. ВИМС 31.02.99. Утверждена. Директор Центра метрологии ионизирующих излучений ГНМЦ ВНИИФТРИ Госстандарта РФ — В.П.Ярына. 09.03.99.

9. Методические рекомендации по определению естественных изотопов: радия — 224, свинца — 210, тория — 232, урана — 238, радия — 226 в пробах питьевой воды, почвы и золы растений. МР ЛНИИРГ МЗ РСФСР. Л., 1978.

10. Методические рекомендации по санитарному контролю за содержанием радиоактивных веществ в объектах внешней среды/Под ред. А.С.Зыковой. М.,

1980. Утв. Главный государственный санитарный врач СССР — П.В.Бургасов.

11. Методика измерения активности радионуклидов в счетных образцах на сцинтилляционном гамма-спектрометре с использованием программного обеспечения «Прогресс». Утверждена. Нач. Центра метрологии ионизирующих излучений ННМЦ ВНИИФТРИ Госстандарта России — В.П.Ярына. 01.05.96.

12. Методика измерения активности бета-излучающих радионуклидов в счетных образцах с использованием программного обеспечения «Прогресс». Утверждена. Нач. Центра метрологии ионизирующих излучений ННМЦ ВНИИФТРИ Госстандарта России — В.П.Ярына. 07.05.96.

13. Методические рекомендации по применению радиологических комплексов с программным обеспечением Прогресс для определения соответствия проб питьевой воды требованиям радиационной безопасности согласно СанПиН 2.1.4.559-96, СанПиН 2.3.2.560-96 и ГН 2.6.1.054-96 (НРБ-96). Утверждена. Директор Центра метрологии ионизирующих излучений ГНМЦ ВНИИФТРИ Госстандарта РФ — В.П.Ярына.

14. Методика экспрессного измерения объемной активности (222)Rn в воде с помощью радиометра радона РРА-01М. Утверждена. Директор Центра метрологии ионизирующих излучений ГНМЦ ВНИИФТРИ Госстандарта РФ В.П.Ярына. 05.03.93.

Приложение 5

ПРИМЕРЫ ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ СООТВЕТСТВИЯ ПИТЬЕВОЙ ВОДЫ КРИТЕРИЯМ РАДИАЦИОННОЙ БЕЗОПАСНОСТИ

Пример 1.

1). При выполнении анализа питьевой воды было установлено:

А_альфа + Дельта_альфа = 0,17 Бк/кг, А_бета + Дельта_бета = 0,16 Бк/кг.

2). Так как превышен контрольный уровень суммарной альфа-активности, необходимо провести радионуклидный анализ. При выборе радионуклидов, подлежащих определению в пробе, руководствуемся п.6.5. настоящих МР:

0,10 < А_альфа + Дельта_альфа = 0,17 <= 0,20

— выполняем сокращенный радионуклидный анализ (в пробе определяем (210)Po, (210)Pb)

3). Последующий анализ показал присутствие данных радионуклидов в следующих концентрациях:

(210)Po — 0,002 +- 0,001 Бк/кг,

(210)Pb — 0,030 +- 0,015 Бк/кг.

4). Проверяем выполнение условия (5) настоящих МР:

Сумма	А_i	+ кв. корень Сумма (	ДельтаА_i	)	2	= (	0,002	+	0,015	) +
УВ_i	УВ_i	0,12	0,20

(	0,001	)	2	+ (	0,015	)	2	= 0,24 < 1
0,12	0,20

Так как присутствие в пробе любых других альфа-излучающих радионуклидов гарантирует выполнение условия (5) настоящих МР, дальнейших исследований не требуется.

Доза, соответствующая этому значению, < 0,1 мЗв. Вода пригодна, никакие дополнительные действия не требуются.

5). Установление контрольного уровня суммарной альфа-активности для данного водоисточника — 0,17 Бк/кг.

Пример 2.

1). При выполнении анализа питьевой воды было установлено:

А_альфа + Дельта_альфа = 0,27 Бк/кг, А_бета + Дельта_бета = 0,18 Бк/кг.

0,20 < А_альфа + Дельта_альфа = 0,27 < 0,40

— выполняем расширенный радионуклидный анализ (в пробе определяем (210)Po, (210)Pb, (226)Ra, (228)Ra)

3). Последующий анализ показал присутствие данных радионуклидов в следующих концентрациях:

(210)Po — 0,012 +- 0,004 Бк/кг,

(210)Pb — 0,20 +- 0,010 Бк/кг,

(226)Ra — 0,117 +- 0,030 Бк/кг,

(228)Rа — 0,050 +- 0,020 Бк/кг.

4). Проверяем выполнение условия (5) настоящих МР:

Сумма	А_i	+ кв. корень Сумма (	ДельтаА_i	)	2	=
УВ_i	УВ_i

(

0,012

0,020

0,117

0,050

) + корень (

0,004

)

+ (

0,010

)

0,012

0,20

0,50

0,20

0,12

0,20

(	0,030	)	2	+ (	0,020	)	2	= 0,82 < 1
0,50	0,20

Доза, соответствующая этому значению < 0,1 мЗв. Вода пригодна, никакие дополнительные действия не требуются.

5). Установление контрольного уровня суммарной альфа-активности для данного водоисточника — 0,27 Бк/кг.

Пример 3.

1). При выполнении анализа питьевой воды было установлено:

А_альфа + Дельта_альфа = 0,049 + 0,008 = 0,57 Бк/кг,

А_бета + Дельта_бета = 0,52 Бк/кг.

2) Так как превышен контрольный уровень суммарной альфа-активности, необходимо провести радионуклидный анализ. При выборе радионуклидов, подлежащих определению в пробе, руководствуемся п.6.5. настоящих МР:

А_альфа + Дельта_альфа = 0,57 > 0,4

— выполняем полный радионуклидный анализ (в пробе определяем (210)Ро, (210)Pb, (226)Ra, (238)U,( 234)U).

3). Последующий анализ показал присутствие данных радионуклидов в следующих концентрациях:

(210)Ро — 0,170 +- 0,030 Бк/кг, (210)Pb — 0,010 +- 0,005 Бк/кг,

(226)Ra — 0,202 +- 0,030 Бк/кг, (228)Ra — 0,033 +- 0,013 Бк/кг,

(238)U — 0,041 +- 0,006 Бк/кг, (234)U — 0,059 +- 0,008 Бк/кг.

4). Выполняем оценку соответствия суммарной активности и суммы активностей радионуклидов по критерию (4) настоящих МР:

А_альфа — Сумма К_iА_i = 0,49 — (0,17 х 1,0 + 0,202 х 0,90 + 0,041 х 0,65 + 0,059 х 0,90) = 0,14 < 0,2

Основные дозообразующие радионуклиды, представленные в пробе, определены.

5). Проверяем выполнение условия (5) настоящих МР:

Сумма

А_i

+ кв.корень Сумма (

ДельтаА_i

)

= (

0,170

0,010

0,202

УВ_i

0,120

0,20

0,50

0,033

0,041

0,059

) + корень (

0,030

)

+ (

0,005

)

+ (

0,030

)

0,20

3,1

2,9

0,12

0,20

0,50

+ (

0,013

)

+ (

0,006

)

+ (

0,008

)

= 2,34 > 1

0,20

3,10

2,40

6). Необходимо проведение санитарно-эпидемиологической экспертизы с целью определения возможности дальнейшей эксплуатации водоисточника или необходимости принятия защитных мер.

Источник

Руководство по обеспечению качества питьевой воды

ТРЕТЬЕ ИЗДАНИЕ

Том 1 Рекомендации

ВСЕМИРНАЯ ОРГАНИЗАЦИЯ ЗДРАВООХРАНЕНИЯ

Женева

2004 г.

Библиотечный каталог публикаций ВОЗ Всемирная организация здравоохранения

Руководство по обеспечению качества питьевой воды. Том 1 : 3-е изд.

1.	Питьевая вода – стандарты	2. Вода – стандарты 3. Качество воды – стандарты
4.	Руководство I. Название
ISBN	(Классификация NLM : WA 675)

Все права охраняются. Публикации Всемирной организации здравоохранения можно получить в отделе сбыта и распространения публикаций Всемирной организации здравоохранения, 20 Avenue Appia, 1211 Geneva 27, Switzerland (тел.: +41 22 791 2476; факс: +41 22 791 4857; эл. почта: bookorders@who.int).

Заявления о разрешении на перепечатку или перевод публикаций ВОЗ – для продажи или для некоммерческого распространения – следует направлять в Отдел публикаций по вышеуказанному адресу

(факс: +41 22 791 4806; эл. почта: permissions@who.int).

Обозначения, используемые в настоящем издании и приводимые в нем материалы ни в коем случае не выражают мнение Всемирной организации здравоохранения о юридическом статусе какой-либо страны, территории, города, района или их органов власти, или относительно делимитации их границ. Пунктирные линии на картах представляют приблизительные линии границ, в отношении которых, тем не менее, может не быть полного согласия.

Упоминание конкретных компаний или продукции определенных производителей не означает, что они одобрены или рекомендованы Всемирной организацией здравоохранения, отдавшей им предпочтение по сравнению с другими компаниями или товарами подобного рода, которые здесь не упоминаются. За исключением возможных ошибок и пропусков, названия патентованной продукции пишутся с заглавной буквы.

Всемирная организация здравоохранения не гарантирует, что информация, содержащаяся в настоящем издании, является полной и правильной, и не несет никакой ответственности за какой-либо ущерб, нанесенный в результате ее использования.

Макет minimum graphics.

Типографский набор произведен компанией SNP Best-set Typesetter Ltd., Гонконг. Отпечатано в Китае компанией Sun Fung

Содержание

Предисловие Выражение признательности

Акронимы и сокращения , используемые в тексте

1.Введение

1.1Общие положения и принципы

1.1.1Микробные аспекты

1.1.2Дезинфекция

1.1.3Химические аспекты

1.1.4Радиационные аспекты

1.1.5Аспекты приемлемости

1.2Роли и обязанности в обеспечении безопасности питьевой воды

1.2.1Надзор и контроль качества

1.2.2Органы общественного здравоохранения

1.2.3Местные органы управления

1.2.4Управление водными ресурсами

1.2.5Учреждения по питьевому водоснабжению

1.2.6Регулирование со стороны общин

1.2.7Продавцы воды

1.2.8Отдельные потребители

1.2.9Учреждения по сертификации

1.2.10Водопроводная система

1.3Вспомогательная документация к Руководству

2.Руководство: основа для безопасной питьевой воды

2.1Основа для безопасной питьевой воды: требования

2.1.1Связанные со здоровьем цели

2.1.2Оценка и разработка систем

2.1.3Оперативный мониторинг

2.1.4Планы регулирования, обоснование и оповещение

2.1.5Надзор за качеством питьевой воды

2.2Руководство по проверкам

2.2.1Качество воды с точки зрения микробного заражения

2.2.2Качество воды с точки зрения химического заражения

2.3Национальная политика в области питьевой воды

2.3.1Законы, регулирующие положения и стандарты

2.3.2Установление национальных стандартов

2.4Определение приоритетных проблем в отношении качества питьевой воды

2.4.1Оценка приоритетов с точки зрения микробного заражения

2.4.2Оценка приоритетов с точки зрения химического заражения

3.Связанные со здоровьем цели

3.1Роль и назначение связанных со здоровьем целей

3.2Виды связанных со здоровьем целей

3.2.1Цели, связанные с конкретной технологией

3.2.2Цели, связанные с эффективностью действий

3.2.3Цели обеспечения качества воды

3.2.4Цели, связанные с результатами в отношении здоровья

iii

РУКОВОДСТВО ПО ОБЕСПЕЧЕНИЮ КАЧЕСТВА ПИТЬЕВОЙ ВОДЫ

3.3Общие соображения при постановке связанных со здоровьем целей

3.3.1Оценка риска в рамках основы для безопасной питьевой воды

3.3.2Эталонный уровень риска

3.3.3Количество лет жизни, скорректированных на инвалидность (DALY)

4.Планы по обеспечению безопасности воды

4.1Оценка и разработка систем

4.1.1Новые системы

4.1.2Сбор и оценка имеющихся данных

4.1.3Охрана ресурсов и источников

4.1.4Очистка

4.1.5Водопроводные системы распределения

4.1.6Неводопроводные, общинные и частные системы

4.1.7Подтверждение

4.1.8Повышение качества и улучшение

4.2Оперативный мониторинг и поддерживающий контроль

4.2.1Определение мер по контролю за системами

4.2.2Выбор параметров для оперативного мониторинга

4.2.3Установление оперативных и критических пределов

4.2.4Неводопроводные, общинные и частные системы

4.3Проверка

4.3.1Проверка качества воды с точки зрения микробного заражения

4.3.2Проверка качества воды с точки зрения химического заражения

4.3.3Источники воды

4.3.4Водопроводные системы распределения

4.3.5Проверка запасов воды, регулируемых общиной

4.3.6Обеспечение качества и контроль качества

4.4Процедуры регулирования для водопроводных систем распределения

4.4.1Предсказуемые аварийные ситуации («отклонения»)

4.4.2Непредвиденные аварии

4.4.3Чрезвычайные ситуации

4.4.4Указания по закрытию водоснабжения, прекращению пользования водой и «кипячению воды»

4.4.5Подготовка плана мониторинга

4.4.6Вспомогательные программы

4.5Регулирование запасов воды на уровне общины и отдельных хозяйств

4.6Обоснование и оповещение

5.Надзор

5.1Виды подходов

5.1.1Проверка

5.1.2Непосредственная оценка

5.2Адаптация подходов к конкретным условиям

5.2.1Городские районы в развивающихся странах

5.2.2Надзор за запасами питьевой воды в общине

5.2.3Надзор за очисткой воды в отдельных хозяйствах и системы хранения

5.3Адекватность снабжения

5.3.1Количество (уровень обслуживания)

5.3.2Доступность (наличие)

СОДЕРЖАНИЕ

5.3.3Доступность по цене

5.3.4Непрерывность

5.4Планирование и осуществление

5.5Регистрация и оповещение

5.5.1Взаимодействие с общиной и потребителями

5.5.2Региональное использование данных

6.Применение Руководства в конкретных условиях

6.1Большие здания

6.1.1Оценка риска для здоровья

6.1.2Оценка системы

6.1.3Регулирование

6.1.4Мониторинг

6.1.5Независимый надзор и вспомогательные программы

6.1.6Качество питьевой воды в учреждениях медико-санитарной помощи

6.1.7Качество питьевой воды в школах и детских садах

6.2Чрезвычайные ситуации и бедствия

6.2.1Практические соображения

6.2.2Мониторинг

6.2.3Руководство по устранению микробного заражения

6.2.4Санитарный контроль и картирование водосбора

6.2.5Руководство по устранению химического и радиоактивного заражения

6.2.6Комплекты для тестирования и лаборатории

6.3Безопасная питьевая воды для путешественников

6.4Системы опреснения

6.5Упакованная питьевая вода

6.5.1Безопасность упакованной питьевой воды

6.5.2Потенциальная польза для здоровья от разлитой по бутылкам питьевой воды

6.5.3Международные стандарты в отношении разлитой по бутылкам питьевой воды

6.6Производство и обработка пищевых продуктов

6.7Самолеты и аэропорты

6.7.1Риски для здоровья

6.7.2Оценка риска в системах

6.7.3Оперативный мониторинг

6.7.4Регулирование

6.7.5Надзор

6.8Суда

6.8.1Риски для здоровья

6.8.2Оценка риска в системах

6.8.3Оперативный мониторинг

6.8.4Регулирование

6.8.5Надзор

7.Аспекты микробного заражения

7.1Вредные факторы микробного заражения, связанные с питьевой водой

7.1.1Инфекции, передающиеся через воду

РУКОВОДСТВО ПО ОБЕСПЕЧЕНИЮ КАЧЕСТВА ПИТЬЕВОЙ ВОДЫ

7.1.2Стойкость и рост бактерий в воде

7.1.3Аспекты общественного здравоохранения

7.2Постановка связанных со здоровьем целей

7.2.1Связанные со здоровьем цели применительно к вредным факторам микробного заражения

7.2.2Подход к оценке риска

7.2.3Постановка целей, связанных с эффективностью действий с учетом риска

7.2.4Представление результатов разработки целей, связанных с эффективностью действий с учетом риска

7.2.5Вопросы адаптации постановки целей, связанных с эффективностью действий с учетом риска, к национальным/местным условиям

7.2.6Цели, связанные с результатами в отношении здоровья

7.3Наличие и обработка патогенов

7.3.1Наличие

7.3.2Обработка

7.4Проверка безопасности и качества воды в плане микробного заражения

7.5Методы выявления индикаторных фекальных бактерий

8.Химические аспекты

8.1Вредные химические вещества в питьевой воде

8.2Получение нормативных величин химических веществ

8.2.1Принятые подходы

8.2.2Пороговые величины химических веществ

8.2.3Альтернативные подходы

8.2.4Непороговые величины химических веществ

8.2.5Качество данных

8.2.6Временные нормативные величины

8.2.7Химические вещества, воздействующие на приемлемость

8.2.8Ненормативные величины химических веществ

8.2.9Смеси

8.3Аналитические аспекты

8.3.1Аналитическая достижимость

8.3.2Аналитические методы

8.4Очистка

8.4.1Достижимость очистки

8.4.2Хлорирование

8.4.3Озонизация

8.4.4Другие процессы дезинфекции

8.4.5Фильтрация

8.4.6Аэрация

8.4.7Химическая коагуляция

8.4.8Адсорбция активированным углем

8.4.9Ионный обмен

8.4.10Мембранные процессы

8.4.11Другие процессы очистки

8.4.12Побочные продукты дезинфекции – меры контроля за процессом

8.4.13Обработка в целях борьбы с коррозией

8.5Нормативные величины для отдельных химических веществ по категориям источника

СОДЕРЖАНИЕ

8.5.1Природные химические вещества

8.5.2Химические вещества из промышленных источников и жилищ человека

8.5.3Химические вещества, используемые в сельском хозяйстве

8.5.4Химические вещества, используемые при обработке воды или возникающие в результате контакта материалов с питьевой водой

8.5.5Пестициды, используемые в воде в целях общественного здравоохранения

8.5.6Цианобактериальные токсины

9.Радиационные аспекты

9.1Источники и воздействие на здоровье радиационного излучения

9.1.1Воздействие радиации через питьевую воду

9.1.2Воздействие на здоровье, вызываемое радиацией, через питьевую воду

9.2Единицы измерения радиоактивности и доза радиации

9.3Нормативные уровни радионуклидов в питьевой воде

9.4Мониторинг и оценка растворенных радионуклидов

9.4.1Скрининг запасов питьевой воды

9.4.2Стратегия оценки питьевой воды

9.4.3Коррективные меры

9.5Радон

9.5.1Радон в атмосфере и воде

9.5.2Риск

9.5.3Руководство по устранению радона в запасах питьевой воды

9.6Взятие проб, анализ и регистрация

9.6.1Измерения общих концентраций альфа- и бетаизлучений

9.6.3Измерение содержания радона

9.6.4Взятие проб

9.6.5Регистрация результатов

10.Аспекты приемлемости

10.1Вкус, запах и вид

10.1.1Загрязнители биологического происхождения

10.1.2Загрязнители химического происхождения

10.1.3Решение проблем, связанных с вкусом, запахом и видом

10.2Температура

11.Фактические данные по микробам

11.1Бактериальные патогены

11.1.1Acinetobacter

11.1.2Аэромонады

11.1.3Бациллы

11.1.4Burkholderia pseudomallei

11.1.5Campylobacter

11.1.6Патогенные штаммы Escherichia coli

11.1.7Helicobacter pylori

11.1.8Klebsiella

11.1.9Legionella

11.1.10Микобактерия

vii

РУКОВОДСТВО ПО ОБЕСПЕЧЕНИЮ КАЧЕСТВА ПИТЬЕВОЙ ВОДЫ

11.1.11Pseudomonas aeruginosa

11.1.12Сальмонелы

11.1.13Шигеллы

11.1.14Staphylococcus aureus

11.1.15Tsukamurella

11.1.16Вибрионы

11.1.17Yersinia

11.2Вирусные патогены

11.2.1Аденовирусы

11.2.2Астровирусы

11.2.3Чашевидные вирусы

11.2.4Энтеровирусы

11.2.5Вирус гепатита А

11.2.6Вирус гепатита Е

11.2.7Ротавирусы и ортореовирусы

11.3Протозойные патогены

11.3.1Акантамеба

11.3.2Balantidium coli

11.3.3Cryptosporidium

11.3.4Cyclospora cayetanensis

11.3.5Entamoeba histolytica

11.3.6Giardia intestinalis

11.3.7Isospora belli

11.3.8Микроспоридия

11.3.9Naegleria fowleri

11.3.10Toxophlasma gondii

11.4Гельминтные патогены

11.4.1Dracunculus medinensis

11.4.2Fasciola spp.

11.5Токсичные цианобактерии

11.6Индикаторные и индексированные организмы

11.6.1Общее количество колиподобных бактерий

11.6.2Escherichia coli и термостойкие колиподобные бактерии

11.6.3Определение количества микроорганизмов чашечным методом

11.6.4Кишечные энтерококки

11.6.5Clostidium perfringens

11.6.6Колифаги

11.6.7Фаги Bacteroides fragilis

11.6.8Энтеровирусы

12.Фактические данные по химическим веществам

12.1Акриламид

12.2Алахлор

12.3Алдикарб

12.4Алдрин и дильдрин

12.5Алюминий

12.6Аммиак

12.7Сурьма

12.8Мышьяк

12.9Асбест

viii

СОДЕРЖАНИЕ

12.10Атразин

12.11Барий

12.12Бентазон

12.13Бензол

12.14Бор

12.15Броматы

12.16Бромированная уксусная кислота

12.17Кадмий

12.18Карбофуран

12.19Тетрахлорид углерода

12.20Хлораль гидрат (трихлорэтан)

12.21Хлордан

12.22Хлорид

12.23Хлор

12.24Хлорит и хлорат

12.25Хлорацетон

12.26Хлорфенолы (2-хлорфенол, 2,4-дихлорфенол, 2,4,6- трихлорфенол)

12.27Хлорпикрин

12.28Хлортолурон

12.29Хлорперифос

12.30Хром

12.31Медь

12.32Цианазин

12.33Цианид

12.34Хлорид циана

12.352,4-D (2,4-дихлорфеноксиуксусная кислота)

12.362,4-DВ

12.37ДДТ и метаболиты

12.38Диалкилтины

12.391,2-дибромо-3-хлорпропан (ДБХП)

12.401,2-диброметан (дибромид этилена)

12.41Дихлоруксусная кислота

12.42Дихлорбензолы (1,2-дихлорбензол, 1,3-дихлорбензол, 1,4- дихлорбензол)

12.431,1-дихлорэтан

12.441,2-дихлорэтан

12.451,1-дихлорэтен

12.461,2-дихлорэтен

12.47Дихлорметан

12.481,2-дихлорпропан (1,2-ДХП)

12.491,3-дихлорпропан

12.501,3-дихлорпропен

12.51Дихлорпроп (2,4- ДП)

12.52Ди(2-этилхексил) адипинат

12.53Ди(2-этилхексил) фталат

12.54Диметоат

12.54а 1,4-Диоксан

РУКОВОДСТВО ПО ОБЕСПЕЧЕНИЮ КАЧЕСТВА ПИТЬЕВОЙ ВОДЫ

12.55Дикват

12.56Эдетовая кислота (ЭДТУ)

12.57Эндосульфан

12.58Эндрин

12.59Эпихлоргидрин

12.60Этилбензол

12.61Фенитротион

12.62Фенопроп (2,4,5-ТП; 2,4,5-трихлорфеноксипропионовая кислота)

12.63Фтор

12.64Формальдегид

12.65Глифосат и АМРА

12.66Галоидированные ацетонитрилы (дихлорацетонитрил, дибромацетонитрил, бромохлорацетонитрил, трихлорацетонитрил)

12.67Жесткость

12.68Гептахлор и эпоксид гептахлора

12.69Гексахлорбензол (ГХБ)

12.70Гексахлорбутадиен (ГХБД)

12.71Сероводород

12.72Неорганическое олово

12.73Йод

12.74Железо

12.75Изопротурон

12.76Свинец

12.77Линдан

12.78Малатион

12.79Марганец

12.80МХФА [4-(2-метил-4-хлорфенокси)уксусная кислота]

12.81Мекопроп (МХФП; [2(2-метил-хлорофенокси)пропионовая кислота]

12.82Ртуть

12.83Метоксихлор

12.84Метилпаратион

12.84(а) Метилтретбутиловый эфир

12.85Метолахлор

12.86Микроцистин-LR

12.87Молинат

12.88Молибден

12.89Монохлорамин

12.90Монохлоруксусная кислота

12.91Монохлорбензол

12.92МХ

12.93Никель

12.94Нитрат и нитрит

12.95Нитрилотриуксусная кислота (НТК)

12.96Паратион

12.97Пендиметалин

12.98Пентахлорфенол (ПХФ)

12.99Перметрин

Соседние файлы в предмете Водоподготовка

#
14.08.201311.37 Mб145Degremont.Технический справочник по обработке воды. Том 1 (из 2-х), 2007.djvu
#
12.08.201332.16 Mб67Ernst-Detlef Schulze,Erwin Beck — Plant Ecology — Springer Berlin -Heidelberg — 2005.pdf
#
#
#
#
14.08.20138.84 Mб169Воронов Ю.В., С.В. Яковлев Водоотведение и очистка сточных вод. 2006.djvu
#
#
#
#
12.08.20134.32 Mб87Когин Очистка питьевой воды.djvu

Источник

Измеряемые характеристики	Рекомендуемые методы измерения	Средства измерения	Диапазон измерений, Бк/кг
Суммарная альфа- и бета-активность А (Сумма_ альфа) и А (Сумма_ бета)	Альфа-бета-радиометрический с предварительным концентрированием радионуклидов (выпаривание) по регламентированной методике, из объема пробы 0.5 — 1.0 л	Низкофоновые альфа-бета-радиометры на основе ППД, сцинтиляционных детекторов или проточных пропорциональных счетчиков	0.02 — 10(3) (Сумма_альфа) 0.20 — 10(3) (Сумма_бета)
Удельная активность (238)U, (234)U, (235)U, (232)Th, (230)Th, (228)Th, (239+240) Pu, (238) Pu,(241)Am	Альфа- спектрометрический с предварительным радиохимическим выделением радионуклидов из объема пробы 0.5 — 1 л и использованием изотопных индикаторов (232)U, (234)Th, (242)Pu, (236)Pu, (243)Am;	Альфа- спектрометры на основе ППД или ионизационных импульсных камер	5 х 10(3) — 10(3)
Удельная активность (226)Ra, (228)Ra, (224)Ra	Гамма- спектрометрический с предварительным количественным концентрированием изотопов радия из объема пробы 5 — 10 л, герметизацией концентрата и выдержкой для накопления равновесных дочерних продуктов распада, альфа- бета- радиометрических селективным радиохимическим выделением изотопов радия и измерением по регламентированной методике	Гамма- спектрометры на основе ППД или сцинтилляционных детекторов, низкофоновые альфа- бетарадиометры	(0.05 — 0.1) — 10(3)
Удельная активность (210)Po, (210)Pb	Альфа- бета- радиометрический или альфа- спектрометрический (210)Ро, (210)Pb или (210)Bi из объема пробы 1 — 3 л	Низкофоновые альфа — бета- радиометры на основе ППД, сцинтилляционных дитекторов или проточных пропорциональных счетчиков	0.02 — 10(3) (альфа) 0.05 — 10(3) (бета)
Удельная активность (137)Cs, (134)Cs	Гамма- спектрометрический инструментальный или бетарадиометрический с предварительным количественным концентрированием изотопов цезия из объема пробы 1 — 10 л	Гамма- спектрометры на основе ППД или сцинтилляционных дитекторов, бета- радиометры	0.1 — 10(3)
Удельная активность (90)Sr	Бета- спектрометрический инструментальный или бетарадиометрический с предварительным селективным концентрированием (90)Sr из объема пробы 1 — 5 л	Бета- спектрометры низкофоновые бета- радиометры	0.1 — 10(3)
Удельная активность (222)Rn	Радиометрический	Радиометры радона	6 — 800

МЕТОДИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ «РАДИАЦИОННЫЙ КОНТРОЛЬ ПИТЬЕВОЙ ВОДЫ»

1. Область применения

2. Нормативные ссылки

3. Термины и определения

4. Общие положения

5. Требования к методам и средствам РК

6. Определение соответствия питьевой воды критериям радиационной безопасности

ПРИМЕНЕНИЕ РЕКОМЕНДАЦИЙ ПО СОДЕРЖАНИЮ РАДИОНУКЛИДОВ В ПИТЬЕВОЙ ВОДЕ, ОСНОВАННОЙ НА ВЕЛИЧИНЕ ГОДОВОГО УРОВНЯ ДОЗЫ 0,1 МЗВ

УРОВНИ ВМЕШАТЕЛЬСТВА (УВ) РАДИОНУКЛИДОВ В ПИТЬЕВОЙ ВОДЕ (ИЗВЛЕЧЕНИЕ ИЗ ПРИЛОЖЕНИЯ П-2 СП 2.6.1.758-99. НОРМЫ РАДИАЦИОННОЙ БЕЗОПАСНОСТИ (НРБ-99)

РЕКОМЕНДУЕМЫЕ МЕТОДЫ ДЛЯ РАДИАЦИОННОГО КОНТРОЛЯ ПИТЬЕВОЙ ВОДЫ

ПЕРЕЧЕНЬ МЕТОДИК, ИСПОЛЬЗУЕМЫХ ПРИ РАДИАЦИОННОМ КОНТРОЛЕ ПИТЬЕВОЙ ВОДЫ

ПРИМЕРЫ ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ СООТВЕТСТВИЯ ПИТЬЕВОЙ ВОДЫ КРИТЕРИЯМ РАДИАЦИОННОЙ БЕЗОПАСНОСТИ

МЕТОДИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ
«РАДИАЦИОННЫЙ КОНТРОЛЬ ПИТЬЕВОЙ ВОДЫ»

ПЕРЕЧЕНЬ
МЕТОДИК, ИСПОЛЬЗУЕМЫХ ПРИ РАДИАЦИОННОМ КОНТРОЛЕ ПИТЬЕВОЙ ВОДЫ